疏肝理气法对夹尾应激大鼠行为学及胃组织学的影响

摘要

目的: 观察疏肝理气法对夹尾应激大鼠行为学及胃组织学的影响.

方法: 30只大鼠随机分为正常组、模型组、柴胡疏肝散组, 每组10只, 对后二组大鼠进行夹尾激惹刺激持续4wk, 并分别给予生理盐水、柴胡疏肝散水煎剂灌胃, 每日观察其一般情况，进行饮食饮水量的测定，每周进行体质量的测定，4wk后观察大鼠胃大体情况及进行组织学检查.

结果: 夹尾激惹刺激大鼠4 wk, 模型组出现了靠边、扎堆状, 兴奋性及活跃程度下降, 打斗减弱, 活动相对迟缓、反应迟钝, 毛发蓬松枯黄、不顺等现象, 而柴胡疏肝散组上述表现则较不显著. 模型组大鼠饮水量、食量较正常对照组显著减低(第4周: 22.0±1.51 vs 25.70±1.4, 10.33±0.84 vs 11.29±0.29, 均P<0.05), 柴胡疏肝散组大鼠饮水量、食量较模型组显著增加(第4周: 24.27±2.3 vs 22.0±1.51, 11.71±1.26 vs 10.33±0.84, 均P<0.05). 模型组大鼠体质量增长显著低于正常对照组(P<0.05), 柴胡疏肝散组大鼠体质量增长较模型组增加, 但无显著性差别.

结论: 疏肝理气法能减轻长期夹尾应激大鼠抑郁、饮食量减低、体质量增长缓慢等情况, 并改善胃组织学, 具有一定的"身心同治"的抗应激作用.

关键词: 疏肝理气; 应激; 大鼠; 行为学; 胃组织学

Effect of soothing the liver and regulating method on behavior and gastric histology in rats

Jiang-Hong Ling, Yu-Qin Zhang, Gang Liang, Lian-Ming Wei, Ye-Qiang Chen, Yao-Li Liu, Yong-Jie Li

Jiang-Hong Ling, Yu-Qin Zhang, Lian-Ming Wei, Ye-Qiang Chen, Department of Traditional Chinese Medicine, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Gang Liang, Department of Pathophysiology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Yao-Li Liu, Yong-Jie Li, Undergraduate Students of Clinical Medicine, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Supported by: the Science Foundation of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. 0447039.

Correspondence to: Jiang-Hong Ling, Department of Traditional Chinese Medicine, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China. ling_jianghong@sina.com

Received: October 29, 2008
Revised: December 10, 2008
Accepted: December 15, 2008
Published online: January 28, 2009

Abstract

AIM: To explore the effects of soothing the liver and regulating method on behavior and gastric tissue of stressed rats induced by constantly squeezing their tails.

METHODS: Thirty rats were randomly divided into control group, model group and Chaihu Shugansan group (n = 10). The animal model of stressed was established by constantly squeezing their tails for 4 wk. Mean while saline, Chaihu Shugansan decoction were administered respectively to three groups by gavage. The animal's general situation and amount of food and water intake were observed daily, body weight was measured weekly, and histopathologcal tests of stomach were performed four weeks later.

RESULTS: Rats in model group showed margination, pad batch, decline in excitement, activity and fight, getting sluggish, blunted in responsiveness, loose and withered hair. The above manifestations in Chaihu Shugansan decoction were not so marked compared with model group. The amount of food and water intake was less in model group than control group (the fourth wk: 22.0 ± 1.51 vs 25.70 ± 1.4, 10.33 ± 0.84 vs 11.29 ± 0.29, both P < 0.05), while the amount of food and water intake was more in Chaihu Shugansan group than model group (the fourth wk: 24.27 ± 2.3 vs 22.0 ± 1.51, 11.71 ± 1.26 vs10.33 ± 0.84, P < 0.05). Weight gain was significantly slower in model group than control group (P < 0.05), but weight gain was greater in Chaihu Shugansan group than model group, but no significance difference was observed.

CONCLUSION: The method of soothing the liver and regulating method not only alleviates depression, poor appetites and antagonized the weight loss, but also improves histology of stomach. It has certain both physical and mental effects against psychological stress.

Key Words: Soothing the liver and regulating method; Stress; Rats; Behavior; Gastric histology

0 引言

应激是一种常见的机体对紧急事件的反应状态, 常可导致胃损伤和运动障碍, 与胃肠道心身疾病起病及症状的发生密切相关[1]. 应激损伤属于中医病因学中的情志致病范畴, 情志内伤最易伤肝, 导致肝失疏泄而出现肝气郁结病证, 进一步发展为肝郁脾虚或肝胃不和等, 出现胃肠道症状, 临床上, 疏肝理气法为主治疗慢性胃肠病具有较好的疗效, 但其作用机制尚不清楚. 本实验以夹尾激惹刺激法制作大鼠应激模型, 观察柴胡疏肝散对其行为学及胃组织学的影响, 为疏肝理气法治疗胃肠道心身疾病提供实验依据.

1 材料和方法

1.1 材料

清洁级8周龄♀Wistar大鼠30只, 体质量190-200 g(广西医科大学实验动物中心提供). 大鼠随机分成正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组, 每组10只. 除正常对照组外, 其余各组参照文献[2]加以改进, 采用夹尾激惹刺激法制造大鼠应激模型, 方法是束缚布包止血钳钳夹标记鼠鼠尾, 立即放开, 每次30 min, 每天2次, 持续4 wk.

经典原方柴胡疏肝散由柴胡、白芍、枳壳、川芎、香附、甘草组成, 将以上药物按成人(60 kg/人)临床用药量的10倍, 按1:5容积比, 用蒸馏水浸泡30 min, 煎煮两次(30 min/次)后, 过滤, 去渣取汁, 合并滤液加热蒸发, 制成1.41 kg/L水煎浓缩液(含生药1.41 kg/L), 4℃保存待用.

1.2 方法

1.2.1 给药方法: 30只大鼠适应性喂养1 wk后, 于造模第1天开始灌胃, 正常对照组和模型组分别予生理盐水灌喂(1.5 mL/100 g体质量), 柴胡疏肝散组予柴胡疏肝散水煎液灌胃, 每次1.5 mL/100 g, 早晚各1次. 共喂药4 wk.

1.2.2 行为学观察: (1)一般情况: 通过动物的皮肤毛发、胡须、情绪反应、行为状态、兴奋程度、活跃状况、睡眠等进行一般情况的观察. (2)饮水量及食量测定: 采用饮水(食)量差值测定法, 每天上午8:00给一定量的水(量筒测量)和食(天平称量), 于次晨8:00测量剩余量, 两者差值与大鼠数目的比值, 即为每只大鼠每日饮水(进食)量. (3)体质量测定: 于实验前和第7、14、21、28 d测量每只大鼠体质量, 每只大鼠每周测值减其实验前测值, 即为每只大鼠体质量增长值.

1.2.3 组织学观察: 实验后4 wk即第28 d, 处死大鼠, 剖腹留取胃, 打开胃腔观察大体病理改变, 取胃组织, 常规HE染色, 光镜观察组织学改变.

统计学处理 所有数据均经SPSS13.0软件处理并以mean±SD表示, 采用单因素方差分析. P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 一般情况

夹尾刺激的第1-2周, 实验动物活跃多动、较兴奋、易怒引发相互间的厮打、尖叫, 第3周上述表现更为强烈, 模型组较柴胡疏肝散组明显. 第3.5周及第4周, 模型组出现了靠边、扎堆状, 兴奋性及活跃程度下降, 打斗减弱, 活动相对迟缓、反应迟钝, 毛发蓬松枯黄、不顺, 而柴胡疏肝散组上述表现则较不显著.

2.2 大鼠饮水量、食量变化、体质量增长情况比较

应激的早期第1周模型组大鼠饮水量较正常对照组显著增加(P<0.01), 柴胡疏肝散组大鼠饮水量较模型组显著减低(P<0.01), 后期至第4周, 模型组大鼠饮水量较正常对照组显著减低(P<0.05), 柴胡疏肝散组大鼠饮水量较模型组显著增加(P<0.05, 表1). 至第4周, 模型组大鼠食量较正常对照组显著减低(P<0.05), 柴胡疏肝散组大鼠食量较模型组显著增加(P<0.05, 表2). 模型组大鼠体质量增长较缓慢, 第4周时模型组大鼠体质量增长显著低于正常组(P<0.05), 柴胡疏肝散组大鼠体质量增长较模型组增加, 但无显著性差别(表3).

表1 三组大鼠饮水量变化情况 (mean±SD, mL/d, n = 10).

分组	实验前	第1周	第2周	第3周	第4周
正常对照组	22.80±2.00	23.89±1.50	25.43±2.51	26.29±2.25	25.70±1.40
模型组	23.94±1.73	28.56±1.90b	25.40±1.64	25.39±1.01	22.00±1.51b
柴胡疏肝散组	24.10±2.78	26.29±1.29d	25.41±1.07	27.43±3.79	24.27±2.30c

^bP<0.01 vs 正常对照组;

^cP<0.05,

^dP<0.01 vs 模型组.

表2 三组大鼠食量变化 (mean±SD, g/d, n = 10).

分组	实验前	第1周	第2周	第3周	第4周
正常对照组	11.72±1.45	11.71±0.72	11.22±1.14	11.45±0.96	11.29±0.29
模型组	11.69±1.44	12.05±0.97	11.64±1.54	11.03±1.45	10.33±0.84a
柴胡疏肝散组	11.20±2.66	11.86±0.54	11.47±1.17	12.39±1.01	11.71±1.26c

^aP<0.05 vs 正常对照组;

^cP<0.05 vs 模型组.

表3 三组大鼠体质量增长情况 (mean±SD, g, n = 10).

分组	第1周	第2周	第3周	第4周
正常对照组	4.76±5.96	7.4±7.16	11.8±5.07	14.2±5.62
模型组	3.26±9.88	6.4±9.84	7.7±7.78	8.5±6.36a
柴胡疏肝散组	4.57±12.39	7.2±13.2	10.4±10.02	12.4±10.38

^aP<0.05 vs 正常对照组.

2.3 组织学大体观察

正常对照组胃黏膜无明显潮红、肿胀、糜烂等病变. 模型组大鼠胃残留饮食物较多, 几乎均可见数个针尖样大小的糜烂点, 柴胡疏肝散组亦可见残留饮食物、糜烂, 但数量、程度均较模型组轻.

光镜检查: 正常对照组大鼠胃黏膜有轻度淋巴细胞浸润; 模型组大鼠胃黏膜固有层均有轻、中度淋巴细胞、嗜酸性细胞浸润, 黏液分泌亢进, 部分腺体扩张, 胃小凹中有大量浆液, 黏膜下层组织疏松水肿, 胃肌层无明显病理改变, 柴胡疏肝散组亦可见黏膜轻度炎症反应, 部分也存在黏液分泌亢进现象, 但程度较模型组为轻(图1).

图1 大鼠胃组织学变化. A: 模型组; B: 柴胡疏肝散组.

3 讨论

强烈的或持续的生理应激与心理应激可以致病, 已成为公认的事实. 消化系统易受内外环境刺激及情绪的影响, 是心身相关最敏感的器官, 消化系统心身疾病的病种和发病率居内科心身疾病的首位, 但遗憾的是针对性的身心同治原则在临床工作中依然未得到足够的重视.

应激的本质就是对外界刺激的适应过程[3]. 有学者[4-5]认为祖国医学中, 肝是人体的应激反应调节中枢, 肝主疏泄的功能可维持和促进全身气血的正常运行, 调适各脏器对应激的反应, 肝藏血、调节血量的功能可改善微循环, 促使全身血液在应激状态下重新分布. 可见肝主疏泄的功能也就类似于应激过程中的"调适"作用.《玉机微义》讲:"脏气不平, 胜乘相因为病, 怒伤肝, 肝克脾, 脾气不正, 必胀于胃, 名日胜克". 沈金鳌曰:"胃病, 惟肝气相乘为尤甚". 肝失疏泄必然影响脾胃气机的升降出入, 导致呃逆嗳气、脘腹胀满疼痛、泄泻或便秘等症. 这与临床所见消化系心身疾病高发病率是一致的. 可以认为肝失疏泄为消化系心身疾病的本源, 疏肝理气法即为身心同治之法.

本研究采用长期夹大鼠尾部诱导大鼠应激反应, 通过躯体刺激的方式来诱导并实现心理性应激, 最终形成相应的病理变化. 结果发现, 应激大鼠的胃黏膜均出现不同程度的糜烂和炎症反应, 提示夹尾对大鼠是一种有效的应激源. 本实验的研究结果还表明, 夹尾应激大鼠皮毛疏松无光泽, 性情暴躁, 易怒嘶咬, 继而抑郁达到了"怒伤肝、久则郁"的效果, 符合肝郁证的动物模型[6]. 本研究以柴胡疏肝散为载体, 研究疏肝理气法的抗应激作用. 结果发现柴胡疏肝散既有调节应激后大鼠的郁怒和胃潴留增多、饮水量和食量减少、体质量增长缓慢等情绪状态和行为, 同时也具有减轻胃黏膜糜烂和炎症等的胃黏膜保护作用, 说明疏肝理气法能增强大鼠抗应激的能力, 具有标本同治、身心兼顾的效用, 与文献一致[7].

本实验通过观察疏肝理气法对夹尾应激大鼠行为学及胃组织学影响的情况, 揭示了应激在疾病尤其是慢性胃肠道疾病如胃炎、消化性溃疡、功能性胃肠病等发生中的重要作用, 同时也揭示了中医疏肝理气法"身心同治"治疗作用. 这为疏肝理气法治疗消化系心身疾病提供了理论依据, 在社会竞争日趋激烈、人们承受的精神压力日趋增大以及由此所引起的疾病在人类疾病谱中所占的地位日趋重要的当今社会, 具有重要的现实意义. 脑肠肽是指存在于胃肠道内分泌细胞、肠道神经系统及中枢神经系统的肽类激素, 他们作为神经肽或神经内分泌或神经旁分泌物质, 调节着胃肠运动、分泌吸收等复杂的功能, 并与情绪有关. 中医"肝主疏泄"的功能既与机体情志活动关系密切, 又能助脾胃运化. 中医肝主疏泄理论与西医脑肠肽理论有着异曲同工, 殊途同归之路, 均注重有机整体, 相互关照, 中医"肝主疏泄"的功能可能是调节脑肠肽的核心[8-9]. 已有不少研究证明,各种应激可引起体内脑肠肽含量和功能的变化[10-15]. 那么, 疏肝理气法"身心同治"的抗应激作用又是否与调节脑肠肽有关? 这是值得今后进一步研究的课题.

评论

背景资料

应激与胃肠道心身疾病起病及症状的发生密切相关, 在中医学属于情志致病范畴, 临床上疏肝理气法治疗胃肠道心身疾病具有较好的疗效, 但其作用机制尚不清楚.

同行评议者

刘绍能, 主任医师, 中国中医科学院广安门医院消化科.

研发前沿

疏肝理气法治疗胃肠道心身疾病的机制尚不清楚, 可能与其对抗应激所致的躯体性的和心理性的双重影响而发挥"心身同治"作用有关.

创新盘点

该研究发现柴胡疏肝散水煎剂能减轻长期夹尾应激大鼠抑郁、饮食量减低、体质量增长缓慢等情况, 并改善胃黏膜糜烂和炎症反应. 提示疏肝理气法具有一定的"身心同治"的抗应激作用.

应用要点

应激与胃肠道心身疾病起病及症状的发生密切相关, 疏肝理气法的"身心同治"的抗应激作用, 为疏肝理气法广泛应用于功能性胃肠病的治疗提供了依据.

名词解释

身心同治: 中医学认为形(形态、形体、身体、体质)与神(神志、神明、神识)是不可分割的统一体, 他们是相互联系, 相互影响. 健康和疾病都是心理现象和生理现象共同作用的结果. 因此, 诊断、治疗、护理、宜忌、预防是因人、因时、因地制宜的, 既要看到脏腑功能, 又要看到七情活动.

同行评价

本研究设计合理, 论据充足, 结果可靠, 具有一定的科学性、创新性和可读性.

备注

编辑:史景红 电编:吴鹏朕

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