RegⅣ与消化系肿瘤研究进展

摘要

再生基因4(regenerating islet-derived family, member 4, RegⅣ)是再生基因家族的新成员, 定位于1p12-13.1, 编码为17 kDa的分泌性蛋白. RegⅣ选择性表达于正常胰腺和胃肠道上皮, 炎症或肿瘤时可见原位或异位高表达. RegⅣ与消化系肿瘤的发生、发展、转移、抗药性及预后密切相关, 其可能成为预防、诊断和治疗整个消化系肿瘤的新的重要靶分子.

关键词: 再生基因4; 消化系肿瘤; 再生基因

Advances in RegIV and alimentary system neoplasms

Ya-Ling Gao, Jian-Lin Ren

Ya-Ling Gao, Jian-Lin Ren, Teaching Hospital of Fujian Medical University (Department of Gastroenterology, Zhongshan Hospital of Xiamen University), Xiamen 361004, Fujian Province, China

Correspondence to: Professor Jian-Lin Ren, Teaching Hospital of Fujian Medical University (Department of Gastroenterology, Zhongshan Hospital of Xiamen University), Xiamen 361004, Fujian Province, China. jianlinr@msn.com

Received: April 7, 2009
Revised: May 12, 2009
Accepted: May 18, 2009
Published online: June 28, 2009

Abstract

RegIV, a novel member of regenerating gene family, is located at 1p12-13.1, encoding a 17-kDa secreted protein, which is constitutively expressed in the epithelium of normal pancreas and gastrointestinal tract, whereas the expression is up-regulated in inflammatory or neoplastic tissues. RegIV is involved in the carcinogenesis, progression, metastasis and drug resistance of alimentary system neoplasms, and is thought to be useful to make a forecast of the prognosis. It may serve as a new important target for the prevention, diagnosis and treatment of gastrointestinal neoplasms.

Key Words: Regenerating islet-derived family, member 4; Alimentary system neoplasms; Regenerating gene

0 引言

再生基因(regenerating gene, Reg)家族是一群主要在肝、胰和胃肠道发挥作用的小分子、多功能的分泌性蛋白, 与组织损伤、炎症、糖尿病和肿瘤的发生密切相关. 2001年Hartupee et al从炎症性肠病库中筛选出再生基因4(regenerating islet-derived family, member 4, RegⅣ). 其定位于1p12-13.1, RegⅣ蛋白由158个氨基酸组成. RegⅣ选择性表达于正常胰腺和胃肠道上皮, 炎症或肿瘤时其表达明显增加, 提示RegⅣ与消化系统肿瘤的发生、发展可能关系密切. 本文将对RegⅣ的结构、分布, 与消化系统肿瘤的关系及其可能分子机制的研究进展作一综述.

1 Reg家族概述

Reg家族属于钙依赖性凝集素超家族(calcium-dependent lectin superfamily), 其代表一组小分子、多功能的分泌性蛋白, 这些蛋白质拥有部分共同结构和某些功能特性. 他们行使急性期类似反应物、凝集素、胰腺β细胞和神经细胞的抗凋亡因子或生长因子的作用[1], 在肝、胰、胃和肠道上皮增生或分化中起重要作用, 主要参与组织损伤、炎症、糖尿病和肿瘤的发生[2]. 根据Reg基因编码蛋白的一级结构, Reg家族可分为4个亚型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ). 在人类至今发现3个亚型(RegⅠ, RegⅢ, RegⅣ). 所有已知的Reg成员具有相似的基因结构, 编码158-175个氨基酸大小不等的分泌蛋白. Reg家族主要在近端胃肠道呈低水平表达, 但组织损伤时可见原位或异位高表达. 这一家族行使多种生物学功能: RegⅠ能促进胰腺再生, 促进胰腺导管和β细胞有丝分裂, 因而有助于改善糖尿病的疾病状态; 促进胃黏膜和小肠绒毛的增殖和再生、分化[3-4], 并可能与食管癌、胃癌、结肠癌有关. RegⅢ在正常小肠、升结肠、胰腺中表达, 在神经细胞和消化系上皮细胞的再生过程中起作用[5].

2 RegⅣ的结构与分布

2.1 结构

RegⅣ由Hartupee et al[6]于2001年在对炎症性肠病库的高流通量序列分析时筛选并鉴定出. 基于基本序列同源性、组织表达模式和外显子-内含子接合基因组结构的相似性, 认定其属于Reg家族. Kämäräinen et al[7]在已表达序列标志(EST)数据库中发现RegⅣ, 又称之为再生蛋白样蛋白(reg-like protein, RELP)或胃肠分泌蛋白(gastrointestinal secreted protein, GISP). RegⅣ基因由17496个碱基对构成, 包含6个外显子和5个内含子. 翻译出的前蛋白产物有158个氨基酸, 包含22个氨基酸的信号肽和一保守的钙依赖性糖识别域(calcium-dependent carbohydrate-recognition domain, CRD), 成熟的分泌性蛋白相对分子质量约17 kDa, 与其他Reg蛋白有43%-47%的同源性. 与其他人类Reg基因不同, 他不在2号染色体, 而是定位于1p12-13.1.

2.2 分布

RegⅣ蛋白选择性表达于小肠上皮神经内分泌细胞和胃黏膜的壁细胞中[7]. 胃小凹上皮细胞为RegⅣ阴性, 而小肠化生的杯状细胞和肠化生基底部的神经内分泌细胞为RegⅣ阳性[8]. 免疫荧光染色显示RegⅣ与嗜铬粒蛋白A共存于十二指肠上皮的神经内分泌细胞中[9]. 在正常小肠、结肠组织, 神经内分泌细胞呈RegⅣ强阳性表达, 而杯状细胞呈弱阳性表达或无表达. 胰腺b细胞RegⅣ表达阳性[10]. 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)和克罗恩病(Crohn's disease, CD)炎性黏膜的上皮细胞中(分别为腺管上皮和杯状上皮细胞), 胃溃疡的再生上皮边缘和胃窦、食管的化生上皮中RegⅣ的表达增加[7]. 在唾液腺中, RegⅣ表达于涎腺导管上皮和腺泡肌上皮, 但在扁平鳞状上皮无表达[11].

3 RegⅣ与消化系肿瘤

3.1 胃癌

3.1.1 RegⅣ在胃癌中的表达: Oue et al[8]发现29.4%的胃癌RegⅣ呈阳性表达, 并与小肠黏蛋白表型和神经内分泌分化有关. RegⅣ的表达与临床特征, 如肿瘤分期、患者预后等未显示明显相关性. 定量RT-PCR分析显示RegⅣ在30.4%的胃癌中呈高水平表达, 而在正常胃、十二指肠、回肠、结肠、胰腺都呈低水平表达[10]. Sentani et al[12]对多种组织印戒细胞癌(signet-ring cell carcinoma, SRCC)进行免疫组织化学分析发现RegⅣ染色有助于胃肠道SRCC的诊断.

3.1.2 RegⅣ的血清学检测与化疗耐药: Mitani et al[13]应用ELISA法检测胃癌患者血清RegⅣ水平显示: RegⅣ水平在健康人群和慢性活动性胃炎患者中相似. 而在手术前胃癌患者, 甚至是Ⅰ期胃癌的血清浓度却显著升高. 血清RegⅣ的诊断灵敏度(36.1%)高于血清CEA(11.5%)或CA19-9(13.1%). 在36例以低剂量5-FU和顺铂联合化疗的胃癌患者中, 14例RegⅣ阳性表达的患者均未显效或出现疾病进展; 强表达的RegⅣ抑制了5-FU诱导的细胞凋亡, Bcl-2和二氢嘧啶脱氢酶参与了此抑制作用.

3.1.3 RegⅣ与胃癌细胞的生长和腹膜播散: 刘兵 et al[14]应用siRNA沉默胃癌细胞中RegⅣ的表达, 发现细胞增殖率受到明显抑制(P = 0.0057), 凋亡率明显增加(P = 0.0231). Miyagawa et al[15]通过定量RT-PCR发现RegⅣ在发生腹膜播散的胃癌细胞系中过表达. RegⅣ mRNA在手术切除标本的表达水平比配对正常黏膜表达量高20倍. 发生腹膜播散的胃癌患者腹膜冲洗液中RegⅣ mRNA表达水平显著高于无腹膜播散患者[16]. 且RegⅣ丰度与腹膜壁渗透程度有关, RegⅣ可能参与胃癌腹膜播散, 腹腔灌洗液中RegⅣ是一潜在腹膜播散标志物[15]. RegⅣ的稳定表达显著增加了胃癌动物模型的腹膜转移. 采用多变量分析提示RegⅣ可能是一独立的不良预后预测因子[17]. Kuniyasu et al[18]通过过表达和沉默表达RegⅣ的比较分析发现, 过表达RegⅣ导致Bcl-2、Bcl-xL、存活素、磷酸化的AKT和磷酸化的EGFR的水平均升高, 氮氧化物诱导的凋亡减少; 小鼠模型中可见腹膜肿瘤的数目增加.

3.2 结直肠癌

3.2.1 RegⅣ与畸变隐窝病灶: 畸变隐窝病灶(aberrant crypt foci, ACF)是最早可识别的肿瘤发生前结肠病变, 正常结肠黏膜向ACF转变的特性了解将有助于我们解析结肠癌发生机制. Glebov et al[19]对ACF病变组织及相应正常黏膜进行对比提示RegⅣ是差异表达的基因之一(P<0.001). 实时RT-PCR检测显示RegⅣ在ACF中过表达, 至少比配对的正常黏膜高2倍. 且ACF基因表达模式在升、降结肠中趋于相似, 失去了原有正常黏膜的基因表达特性.

3.2.2 RegⅣ在结直肠腺瘤中的表达: Zhang et al[20]基于抑制差减杂交法(suppression subtractive hybridization, SSH), 确定了RegⅣ是一相对于正常黏膜在结直肠腺瘤中高表达的强候选基因. RegⅣ可能在结直肠腺瘤的分化起始中扮演重要角色, 而他的检测可能在结直肠腺瘤的形成中起到早期诊断的作用. 国内学者发现RegⅣ mRNA水平在结直肠腺瘤中高表达; 经原位杂交方法分析, RegⅣ mRNA水平与结直肠腺瘤的发育不良严重程度相关, 提示RegⅣ的过表达可能是结直肠癌发生的早期事件, RegⅣ过表达的检测可能有益于腺瘤向癌转变的早期诊断[21-23].

Dieckgraefe et al以APC基因的一个无意突变小鼠做原始模型研究RegⅣ在结肠癌发生中的作用机制时发现: RegⅣ的表达增加发生在APC二次突变之前, 而腺瘤发生于二次突变之后. 提示Reg Ⅳ在结肠癌前病变区、腺瘤的发展和扩展过程中有重要作用, RegⅣ可能是对癌前病变的一个促进作用[24]. 因此, RegⅣ可能就是人们一直追寻的生物学标志物: 可以判断结肠黏膜是否有转变为腺瘤或腺癌的危险.

3.2.3 RegⅣ与结直肠癌分期、转移及化疗耐药: Oue et al[10]发现虽然RegⅣ在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)的表达比正常结肠组织高. 36.1%(13/36)结肠直肠腺癌是RegⅣ阳性, 并与肿瘤分期有关. 93.3%(14/15)结肠直肠类癌瘤检测到RegⅣ表达[8]. Yeh et al应用RT-QPCR和膜芯片技术研究CRC患者外周血中RegⅣ等6种mRNA标志物的表达, 发现RegⅣ mRNA过表达率为80.0%(64/80), RegⅣ mRNA的过表达与CRC的TNM分期及淋巴结转移密切相关[25]. CRC伴肝转移的RegⅣ表达阳性率明显高于无转移病例(P = 0.0102). RegⅣ阳性表达的CRC比阴性表达的存活率低(P = 0.0117)[26]. ELISA法检测CRC患者术前血清RegⅣ水平显示Ⅳ期CRC伴肝转移患者较0-Ⅲ期患者明显升高. 说明RegⅣ是预后不良的预测因子, 血清RegⅣ浓度可能预测CRC并发肝转移. Violette et al[9]应用差异展示PCR法分析发现RegⅣ在CRC耐药细胞中高表达, 在敏感细胞系则是低表达, 提示RegⅣ在CRC中的潜在作用, 而且可能是影响肿瘤患者存活率的预后指标并与肿瘤的耐药性有关.

3.3 胰腺癌

胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC)在常见的恶性肿瘤中显示最高的死亡率, 5年生存率只有4%, 而大多数的PDAC患者都是在进展期才被诊断, 此时已经错失了有效的治疗时机. Takehara et al[27]报道RegⅣ在PDAC细胞中过表达. RegⅣ蛋白呈时间剂量依赖性促进PDAC细胞的生长, 通过RNA干扰技术可阻断RegⅣ的促生长效应, 同时外源性RegⅣ蛋白促进PK-45P细胞的Akt的磷酸化, 提示RegⅣ的促生长效应可能通过PKB/Akt信号通路来介导, 以抗体中和RegⅣ效应可能是一潜在的治疗PDAC的工具. 早期PDAC患者血清中呈现RegⅣ水平的显著提高, 血清RegⅣ可能是检测早期PDAC的肿瘤标志物. 然而, RegⅣ在CRC[9], GC[10], 炎症性肠病[7], 阑尾黏液囊腺瘤和腹膜假性黏液瘤(pseudomyxoma peritonei, PMP)[28], 前列腺癌[29-30]和唾液腺囊性腺样癌[11]中高表达, 所以血清中RegⅣ水平的升高在诊断中的灵敏度和特异度还要大量基础研究的证实.

Nakata et al[31]采用免疫组织化学染色和显微解剖定量RT-PCR检测胰导管内乳头状黏液瘤(intraductal papillary mucinous neoplasms, IPMNs)和IPMN来源的侵袭性导管腺癌中RegⅣ的表达情况, 结果显示34%(43/125)IPMNs是RegⅣ阳性. RegⅣ mRNA水平在肠型IPMNs比在胃型IPMNs和正常胰导管上皮的表达水平都高(P = 0.005, P = 0.004). 相对于腺瘤(8/52), RegⅣ更倾向于在边缘病变(14/28)和癌(21/45)中表达, 且与边缘病变的增殖活性密切相关, 进而推测RegⅣ参与IPMNs的"肠"途径的癌发生机制.

4 RegⅣ在胃肠道肿瘤发生中介导的信号通路

Bishnupuri et al[32]在结肠腺癌细胞系HCT116和HT29的培养基中加入纯化的重组人类RegⅣ基因(rhR4), 观察到剂量依赖性的细胞数目的增加, 与EGF的效应相同. 并观察到EGFR Tyr992、Tyr1068以及Akt Thr308、Ser473的快速磷酸化. 采用荧光素酶报告基因测定发现RegⅣ通过EGFR和Akt信号通路, 引起活化剂蛋白-1(activator protein-1, AP-1)转录因子活性的增加. AP-1是由c-Jun和c-Fos蛋白组成的二聚体, 在许多基因的转录活化中起重要作用, 许多癌基因通过AP-1介导产生致癌作用. 同时发现c-Jun、JunB、JunD、FosB的表达数量协同AP-1活性的增加而增加, AP-1与经rhR4处理过的细胞的结合活性的显著增加以及JunB、JunD、FosB抗体超滞留的增加. 而且, rhR4处理后导致Bcl-2、Bcl-xL、存活素和基质溶解因子表达量的增加, 而这些基因与进展期CRC的不良预后密切相关. 总之, 在CRC中, RegⅣ可能通过提高Bcl-2、Bcl-xL、存活素的水平激活EGFR/Akt/AP-1信号通路而提高癌细胞的存活率. 因此, 阻断RegⅣ信号通路可能是人类胃肠道腺癌有效的治疗干预措施.

5 结论

RegⅣ是选择性表达于胰腺和胃肠道上皮的小分子分泌性蛋白, 参与消化系统上皮细胞的增殖、再生和炎性、化生反应, 并与消化系统肿瘤的发生、发展密切相关. 但其在消化系统肿瘤发生、发展中的确切作用机制未明, 要进一步明确从而更好地指导临床应用, 仍需更深入的研究.

评论

背景资料

再生基因家族包含多个成员, 在糖尿病、炎症损伤及癌瘤发生中起重要作用; 尤其是RegⅣ在消化系肿瘤中的作用越来越受到人们的关注.

同行评议者

李淑德, 主任医师, 中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科

研发前沿

RegⅣ参与胰腺、胃肠道上皮细胞的增殖、分化, 与消化系统肿瘤的发生、发展、浸润、转移、化疗耐药性及预后密切相关, 但其确切作用机制未明, 还需要更多深入的研究.

创新盘点

本文比较系统地阐述了RegⅣ与消化系统肿瘤关系的研究现状及进展, 希望能为探索RegⅣ在消化系肿瘤中的发生、发展机制及指导临床应用提供参考.

应用要点

RegⅣ可能是一潜在的肿瘤标志物, 并且可能成为消化系统肿瘤基因靶向治疗的分子靶点.

同行评价

本文选题较新, 参考文献引用合理, 具有重要的理论指导意义.

备注

编辑: 李军亮 电编: 何基才

参考文献

1.	Broekaert D, Eyckerman S, Lavens D, Verhee A, Waelput W, Vandekerckhove J, Tavernier J. Comparison of leptin- and interleukin-6-regulated expression of the rPAP gene family: evidence for differential co-regulatory signals. Eur Cytokine Netw. 2002;13:78-85.  [PubMed]  [DOI]

2.	Zhang YW, Ding LS, Lai MD. Reg gene family and human diseases. World J Gastroenterol. 2003;9:2635-2641.  [PubMed]  [DOI]

3.	Bluth MH, Patel SA, Dieckgraefe BK, Okamoto H, Zenilman ME. Pancreatic regenerating protein (reg I) and reg I receptor mRNA are upregulated in rat pancreas after induction of acute pancreatitis. World J Gastroenterol. 2006;12:4511-4516.  [PubMed]  [DOI]

4.

Ose T, Kadowaki Y, Fukuhara H, Kazumori H, Ishihara S, Udagawa J, Otani H, Takasawa S, Okamoto H, Kinoshita Y. Reg I-knockout mice reveal its role in regulation of cell growth that is required in generation and maintenance of the villous structure of small intestine. Oncogene. 2007;26:349-359.  [PubMed]  [DOI]

5.	Hervieu V, Christa L, Gouysse G, Bouvier R, Chayvialle JA, Bréchot C, Scoazec JY. HIP/PAP, a member of the reg family, is expressed in glucagon-producing enteropancreatic endocrine cells and tumors. Hum Pathol. 2006;37:1066-1075.  [PubMed]  [DOI]

6.	Hartupee JC, Zhang H, Bonaldo MF, Soares MB, Dieckgraefe BK. Isolation and characterization of a cDNA encoding a novel member of the human regenerating protein family: Reg IV. Biochim Biophys Acta. 2001;1518:287-293.  [PubMed]  [DOI]

7.	Kämäräinen M, Heiskala K, Knuutila S, Heiskala M, Winqvist O, Andersson LC. RELP, a novel human REG-like protein with up-regulated expression in inflammatory and metaplastic gastrointestinal mucosa. Am J Pathol. 2003;163:11-20.  [PubMed]  [DOI]

8.

Oue N, Mitani Y, Aung PP, Sakakura C, Takeshima Y, Kaneko M, Noguchi T, Nakayama H, Yasui W. Expression and localization of Reg IV in human neoplastic and non-neoplastic tissues: Reg IV expression is associated with intestinal and neuroendocrine differentiation in gastric adenocarcinoma. J Pathol. 2005;207:185-198.  [PubMed]  [DOI]

9.	Violette S, Festor E, Pandrea-Vasile I, Mitchell V, Adida C, Dussaulx E, Lacorte JM, Chambaz J, Lacasa M, Lesuffleur T. Reg IV, a new member of the regenerating gene family, is overexpressed in colorectal carcinomas. Int J Cancer. 2003;103:185-193.  [PubMed]  [DOI]

10.

Oue N, Hamai Y, Mitani Y, Matsumura S, Oshimo Y, Aung PP, Kuraoka K, Nakayama H, Yasui W. Gene expression profile of gastric carcinoma: identification of genes and tags potentially involved in invasion, metastasis, and carcinogenesis by serial analysis of gene expression. Cancer Res. 2004;64:2397-2405.  [PubMed]  [DOI]

11.	Sasahira T, Oue N, Kirita T, Luo Y, Bhawal UK, Fujii K, Yasui W, Kuniyasu H. Reg IV expression is associated with cell growth and prognosis of adenoid cystic carcinoma in the salivary gland. Histopathology. 2008;53:667-675.  [PubMed]  [DOI]

12.	Sentani K, Oue N, Tashiro T, Sakamoto N, Nishisaka T, Fukuhara T, Taniyama K, Matsuura H, Arihiro K, Ochiai A. Immunohistochemical staining of Reg IV and claudin-18 is useful in the diagnosis of gastrointestinal signet ring cell carcinoma. Am J Surg Pathol. 2008;32:1182-1189.  [PubMed]  [DOI]

13.	Mitani Y, Oue N, Matsumura S, Yoshida K, Noguchi T, Ito M, Tanaka S, Kuniyasu H, Kamata N, Yasui W. Reg IV is a serum biomarker for gastric cancer patients and predicts response to 5-fluorouracil-based chemotherapy. Oncogene. 2007;26:4383-4393.  [PubMed]  [DOI]

14.	刘 兵, 项 明, 于 颖彦, 杨 秋蒙, 蔡 劬, 陈 雪华, 李 建芳, 刘 炳亚, 朱 正纲. 体外RNA干扰抑制RegⅣ基因表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响. 世界华人消化杂志. 2009;17:549-553.  [PubMed]  [DOI]

15.	Miyagawa K, Sakakura C, Kin S, Nakase Y, Fukuda K, Hagiwara A, Okazaki Y, Hayashizaki Y, Yamagishi H. [Over expression of Reg IV in peritoneal dissemination of gastric cancer]. Gan To Kagaku Ryoho. 2004;31:1909-1911.  [PubMed]  [DOI]

16.	Miyagawa K, Sakakura C, Nakashima S, Yoshikawa T, Kin S, Nakase Y, Fukuda K, Hagiwara A, Okazaki Y, Hayashizaki Y. [Analysis of Reg IV expression in peritoneal dissemination of gastric cancer using real-time RT-PCR]. Gan To Kagaku Ryoho. 2005;32:1707-1708.  [PubMed]  [DOI]

17.

Miyagawa K, Sakakura C, Nakashima S, Yoshikawa T, Fukuda K, Kin S, Nakase Y, Shimomura K, Oue N, Yasui W. Overexpression of RegIV in peritoneal dissemination of gastric cancer and its potential as A novel marker for the detection of peritoneal micrometastasis. Anticancer Res. 2008;28:1169-1179.  [PubMed]  [DOI]

18.	Kuniyasu H, Oue N, Sasahira T, Yi L, Moriwaka Y, Shimomoto T, Fujii K, Ohmori H, Yasui W. Reg IV enhances peritoneal metastasis in gastric carcinomas. Cell Prolif. 2009;42:110-121.  [PubMed]  [DOI]

19.	Glebov OK, Rodriguez LM, Soballe P, DeNobile J, Cliatt J, Nakahara K, Kirsch IR. Gene expression patterns distinguish colonoscopically isolated human aberrant crypt foci from normal colonic mucosa. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2006;15:2253-2262.  [PubMed]  [DOI]

20.	Zhang Y, Lai M, Gu X, Luo M, Shao L. Reg IV, a differentially expressed gene in colorectal adenoma. Chin Med J (Engl). 2003;116:918-922.  [PubMed]  [DOI]

21.	Zhang Y, Lai M, Lv B, Gu X, Wang H, Zhu Y, Zhu Y, Shao L, Wang G. Overexpression of Reg IV in colorectal adenoma. Cancer Lett. 2003;200:69-76.  [PubMed]  [DOI]

22.	Lü BJ, Cui J, Xu J, Zhang H, Luo MJ, Zhu YM, Lai MD. [Bioinformatic analysis of adenoma-normal mucosa SSH library of colon]. Yi Chuan. 2006;28:385-392.  [PubMed]  [DOI]

23.	Lü B, Xu J, Zhu Y, Zhang H, Lai M. Systemic analysis of the differential gene expression profile in a colonic adenoma-normal SSH library. Clin Chim Acta. 2007;378:42-47.  [PubMed]  [DOI]

24.	Pankova-Kholmyansky I, Arber N. Reg IV can serve for early diagnosis and therapy. Cancer Biol Ther. 2007;6:123-124.  [PubMed]  [DOI]

25.	Yeh CS, Wang JY, Wu CH, Chong IW, Chung FY, Wang YH, Yu YP, Lin SR. Molecular detection of circulating cancer cells in the peripheral blood of patients with colorectal cancer by using membrane array with a multiple mRNA marker panel. Int J Oncol. 2006;28:411-420.  [PubMed]  [DOI]

26.	Oue N, Kuniyasu H, Noguchi T, Sentani K, Ito M, Tanaka S, Setoyama T, Sakakura C, Natsugoe S, Yasui W. Serum concentration of Reg IV in patients with colorectal cancer: overexpression and high serum levels of Reg IV are associated with liver metastasis. Oncology. 2007;72:371-380.  [PubMed]  [DOI]

27.	Takehara A, Eguchi H, Ohigashi H, Ishikawa O, Kasugai T, Hosokawa M, Katagiri T, Nakamura Y, Nakagawa H. Novel tumor marker REG4 detected in serum of patients with resectable pancreatic cancer and feasibility for antibody therapy targeting REG4. Cancer Sci. 2006;97:1191-1197.  [PubMed]  [DOI]

28.	Heiskala K, Giles-Komar J, Heiskala M, Andersson LC. High expression of RELP (Reg IV) in neoplastic goblet cells of appendiceal mucinous cystadenoma and pseudomyxoma peritonei. Virchows Arch. 2006;448:295-300.  [PubMed]  [DOI]

29.	Ohara S, Oue N, Matsubara A, Mita K, Hasegawa Y, Hayashi T, Usui T, Amatya VJ, Takeshima Y, Kuniyasu H. Reg IV is an independent prognostic factor for relapse in patients with clinically localized prostate cancer. Cancer Sci. 2008;99:1570-1577.  [PubMed]  [DOI]

30.

Hayashi T, Matsubara A, Ohara S, Mita K, Hasegawa Y, Usui T, Arihiro K, Norimura S, Sentani K, Oue N. Immunohistochemical analysis of Reg IV in urogenital organs: Frequent expression of Reg IV in prostate cancer and potential utility as serum tumor marker. Oncol Rep. 2009;21:95-100.  [PubMed]  [DOI]

31.	Nakata K, Nagai E, Ohuchida K, Aishima S, Hayashi A, Miyasaka Y, Yu J, Mizumoto K, Tanaka M, Tsuneyoshi M. REG4 is associated with carcinogenesis in the 'intestinal' pathway of intraductal papillary mucinous neoplasms. Mod Pathol. 2009;22:460-468.  [PubMed]  [DOI]

32.	Bishnupuri KS, Luo Q, Murmu N, Houchen CW, Anant S, Dieckgraefe BK. Reg IV activates the epidermal growth factor receptor/Akt/AP-1 signaling pathway in colon adenocarcinomas. Gastroenterology. 2006;130:137-149.  [PubMed]  [DOI]