海风藤酮对急性胰腺炎大鼠的治疗作用

摘要

目的: 观察海风藤酮对急性胰腺炎(AP)大鼠自由基水平的影响.

方法: ♂SD大鼠120只随机分为对照组(n = 40), AP组(n = 40)和海风藤酮(SM)治疗组(n = 40). 观察3, 6, 12和24 h大鼠血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、淀粉酶(AMY)、腹水量、胰腺病理等指标的变化.

结果: 与对照组比较, AP组腹水、血清AMY和MDA升高, SOD水平降低, 且有差异统计学意义, 经海风藤酮治疗后, 治疗组腹水(24 h: 4.03±1.36 mL vs 5.15±1.69 mL, P<0.05), 血清AMY(24 h: 69.6±6.7 mkat/L vs 136.6±13.4 mkat/L, P<0.01)和MDA(24 h: 1.45±0.19 nmol/L vs 1.98±0.27 nmol/L, P<0.05)水平显著降低, SOD水平显著升高(24 h: 35.27±8.34 nmol/L vs 19.03±8.74 nmol/L, P<0.05). AP组大鼠胰腺病理变化均显著性升高, 而治疗组与AP组相比在早期(3, 6 h)胰腺病理变化明显减轻.

结论: 海风藤酮通过降低损害因子MDA, 升高保护因子SOD对AP 有治疗作用.

关键词: 急性胰腺炎; 海风藤酮; 丙二醛; 超氧化物歧化酶

Therapeutic effect of kadsurenone on acute pancreatitis in rats

Cheng-Guo Wang, Qing-Jiu Ma, Jian-Guo Lu, Xian-Li He, Qing Wang, Xi-Lin Du, Yan-Kui Chu

Cheng-Guo Wang, Qing-Jiu Ma, Jian-Guo Lu, Xian-Li He, Qing Wang, Xi-Lin Du, Yan-Kui Chu, Department of General Surgery, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, Shaanxi Province, China

Correspondence to: Qing-Jiu Ma, Department of General Surgery, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University, Xinsi Road, Xi'an 710038, Shaanxi Province, China. tdsurg@fmmu.edu.cn

Received: November 1, 2006
Revised: November 1, 2006
Accepted: November 16, 2006
Published online: February 8, 2007

Abstract

AIM: To observe the effect of kadsurenone in the treatment of acute pancreatitis (AP) in rats.

METHODS: A total of 120 male Sprague Dawley rats were randomized into 3 groups: control group (n = 40), AP model group (n = 40) and kadsurenone treatment group (n = 40). The indexes including the plasma levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD), amylase (AMY), the volumes of ascites, and pancreatitic pathology were observed at the 3^rd, 6^th, 12^th and 24^th hour.

RESULTS: The plasma levels of AMY, MDA, and the volumes of ascites were remarkably elevated while the plasma level of SOD was lowered in AP rats. Kadsurenone significantly decreased the plasma levels of AMY (24 h: 69.6 ± 6.7 mkat/L vs 136.6 ± 13.4 mkat/L, P < 0.01), MDA (24 h: 1.45 ± 0.19 nmol/L vs 1.98 ± 0.27 nmol/L, P < 0.05), and the volumes of ascites (24 h: 4.03 ± 1.36 mL vs 5.15±1.69 mL, P < 0.05), while increased the plasma level of SOD (24 h: 35.27 ± 8.34 nmol/L vs 19.03 ± 8.74 nmol/L, P < 0.05). Severe pathological changes were observed in AP rates, but they were notably alleviated after kadsurenone treatment.

CONCLUSION: Kadsurenone is effective in the treatment of AP by decreasing the level of harmful factor MDA while increasing the level of the defensive factor SOD.

Key Words: Acute pancreatitis; Kadsurenone; Malondialdehyde; Superoxide dismutase

0 引言

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种并发症多, 病死率很高的急腹症之一, 他发展迅速, 病理生理表现复杂多变, 有多种因素及炎性因子参与救治难度大. 氧自由基(OFR)是AP合并其他器官损伤、发展为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)的重要原因之一[1-2]. 海风藤酮(kadsurenone)是中药海风藤的提取物[3], 本研究通过大鼠AP模型, 动态观测大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、淀粉酶(AMY)、病理改变等, 以判定海风藤酮对AP治疗的影响, 为探讨该药在临床上应用治疗AP的可能性提供理论和实验依据.

1 材料和方法

1.1 材料

健康Wister大鼠120只, 10-12 wk龄, 体质量200-300 g, ♂♀不限, 由第四军医大学动物实验中心提供. 海风藤酮(150 mg)购自北京大学药学院, 牛磺胆酸钠购自Sigma公司, MDA, SOD检测试剂盒, 购自南京建成生物工程研究所.

1.2 方法

采用随机数字把120只大鼠分为3组: 对照组(n = 40)、急性胰腺炎(AP)组(n = 40)和海风藤酮治疗组(n = 40). 参照Aho法并加以改进[4]. 所有大鼠术前禁食12 h, 自由饮水. 称质量, 20 g/L 戊巴比妥钠腹腔内麻醉, 大鼠仰卧固定, 上腹正中切口进腹. 对照组进腹后轻揉胰腺及十二指肠, 暴露时间同其他两组, 关腹. AP组、海风藤酮组进腹后提起胃、十二指肠, 找到胆总管, 然后用无损伤血管夹夹闭肝门处的胆总管, 用4号钝性针头穿刺胆胰管乳头对侧的十二脂肠壁, 将针头插入胆胰管内约5 mm处, 再用无损伤血管夹夹住针头远侧的胆胰管向胆胰管内注射50 g/L牛磺胆酸钠溶液(1 μL/g), 注射速度0. 2 mL/min. 注射完毕后, 保留针头3 min. 然后松开2个无损伤血管夹, 抽出针头, 用1号线缝合关腹. 海风藤酮组关腹立即后腹腔内注射海风藤酮, 注射量为10 μg/g, 由于海风藤酮均以DMSO(25 g/L)为溶剂, 故对照组和AP组均于关腹后腹腔内注射等量的DMSO. 术后各组动物自由饮水. 分别于术后3, 6, 12, 24 h分批心脏抽血处死大鼠(每组各个时间点10 只大鼠), 观察腹水性状和量, 采集血液标本, 在胰头、胰体、胰尾各取一块胰腺组织在40 g/L中性福尔马林溶液中固定. 各组大鼠处死后首先抽取腹水、记量, 观察其颜色及浑浊度; 观察胰腺大体改变, HE镜下观察病理改变, 并按照Kusske et al[5]的方法作胰腺组织病理评分, 按照水肿、炎症、出血、坏死程度不同分0-4分进行盲法评分. 利用采集的血液标本, 提取血清, 使用MDA, SOD 检测试剂盒进行检测.

统计学处理 用SPSS12.0统计分析软件包进行处理, 计量资料以均数±标准差表示, 以t检验行统计学处理, 计数资料采用χ²检验行统计学处理.

2 结果

2.1 腹水的性状和量

对照组无明显腹水积聚. 3 h AP组、海风藤酮组均为µ黄色、澄清的渗出液; 6 h AP组、海风藤酮组腹水量增加, 为淡红色、浑浊的液体; 12, 24 h两组腹水量进一步增加, 但AP组比海风藤酮组腹水颜色更深, 腹水量更多, 二者有显著性差异(P<0.05, P<0.01, 表1).

表1 各组大鼠不同时间腹水量和血清淀粉酶的比较 (mean±SD, n = 40).

分组	腹水量(mL)				AMY(μkat/L)
	3 h	6 h	12 h	24 h	3 h	6 h	12 h	24 h
对照	0	0	0	0	26.6±6.0	30.0±3.2	29.7±2.4	28.1±2.3
AP	3.19±1.12b	4.51±1.42b	4.98±1.47b	5.15±1.69b	90.4±11.9b	156.3±13.6b	146.4±13.7b	136.6±13.4b
海风藤酮	2.06±1.48c	2.37±1.15c	2.51±1.24c	4.03±1.36c	79.3±9.8d	112.9±7.1d	72.1±5.1d	69.6±6.7d

^bP<0.01 vs 对照组;

^cP<0.05,

^dP<0.01 vs AP组.

2.2 血清淀粉酶检测结果

AP组各时间点的淀粉酶(AMY)水平均较对照组显著升高(P<0.01), 海风藤酮组各时间点的淀粉酶水平均较AP组显著降低(P<0.01, 表1).

2.3 大鼠血清MDA, SOD含量检测

AP组与对照组比较, 各时间点的MDA水平显著性升高, SOD水平显著性降低(P<0.05);在各个时间点上, 与AP组比较, 海风藤酮组的MDA水平显著性降低, SOD水平显著性升高(P<0.05, 表2).

表2 各组大鼠血清MDA和 SOD含量的比较 (mean±SD, n = 10, nmol/L).

分组	MDA				SOD
	3 h	6 h	12 h	24 h	3 h	6 h	12 h	24 h
对照	0.81±0.17	0.86±0.18	0.78±0.17	0.75±0.21	46.23±5.94	45.62±4.36	46.21±5.32	47.12±5.10
AP	1.34±0.28a	1.52±0.48a	1.80±0.32a	1.98±0.27a	34.78±7.69a	27.69±7.27a	26.02±8.31a	19.03±8.74a
海风藤酮	0.95±0.18c	1.07±0.20c	1.32±0.24c	1.45±0.19c	42.04±6.54c	37.74±8.81c	34.04±6.54c	35.27±8.34c

^aP<0.05 vs 对照组;

^cP<0.05 vs AP组.

2.4 胰腺病理改变及评分

对照组的胰腺组织在肉眼及光镜下观察基本正常, 仅3, 6 h时有轻度水肿, 无明显出血及坏死. AP组随时间推移病理改变程度加质量. 其表现为在3, 6, 12, 24 h分别以胰腺间质、被膜下水肿, 血管充血、红细胞溢出, 大量炎性细胞浸润, 胰腺呈片状凝固性坏死及大片胰腺腺泡结构消失, 胰腺实质局灶性坏死为主. 海风藤酮组则各时间点胰腺组织的病理学改变均较胰腺炎组轻. 胰腺组织水肿、腺泡细胞破坏、出血、坏死均较胰腺炎组轻, 以3 h及6 h差别最为明显. 根据病理学评分可知12、24 h海风藤酮组病理学评分亦较AP组低, 但二者间无显著性差异. AP组与对照组比较, 各时间点胰腺病理评分均显著性升高(P<0.01); 在早期(3, 6 h), 与AP组比较海风藤酮组的胰腺病理评分显著性降低(P<0.05, 表3).

表3 各组大鼠病理评分 (mean±SD, n = 40).

分组	胰腺病理评分
	3 h	6 h	12 h	24 h
对照	0.86±0.51	0	0	1.18±0.61
AP	5.20±0.79b	7.10±0.55b	11.72±0.14b	13.45±1.62b
海风藤酮	3.24±0.81c	4.93±1.01c	11.02±0.74	12.73±1.42

^bP<0.01 vs 对照组;

^cP<0.05 vs AP组.

3 讨论

AP的发病机制至今未能完全阐明, 除传统的胰酶在胰腺内被激活, 引起自身消化外, 多项研究发现胰腺缺血-再灌注损伤导致的自由基损害在AP向SAP的演进过程中具有质量要的作用[6-7]. 鉴于AP发病机制的复杂性, 对其病理机制及病理过程, 仅仅应用西医药手段进行针对性防治是困难的, 而采用中西医结合手段显得更为恰当. 已有报告指出中药不仅可以抑制胰酶的活性, 还可以改善微循环、抑制自由基的产生、降低AP时的炎性细胞因子水平, 从而达到治疗AP的目的. 自由基是在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子的总称. 主要包括氧自由基和脂性自由基. 自由基的化学性质极为活泼, 易于失去电子(氧化) 或获得电子(还原), 特别是其氧化作用强, 故具有强烈的引发脂质过氧化的作用[8-9].

海风藤酮是从中药海风藤中提取出来的一种天然生物物质, 具有行经络, 和血脉, 宽中理气, 下湿除风之功效, 他主治治风湿痹痛、风寒骨痛、外感风寒、跌打损伤、闭经等症. 药理研究证实, 海风藤酮是天然的血小板活化因子(PAF)拮抗剂, 他能与PAF竞争靶位, 有效地抑制组织缺血时PAF活性的发挥, 减少内源性花生四烯酸释放, 提高细胞内环磷酸腺苷的水平, 抑制TXA2的合成及促进PGI2的产生, 纠正TXA2/PGI2比例失衡, 故能扩张外周血管, 改善微循环, 降低血液黏滞度, 改善血流变, 增加脏器微循环的血流量[10-13]. 最新的研究还发现, 海风藤酮还具有显著的抗氧化作用和钙离子拮抗样效应, 能有效清除氧自由基, 抑制钙离子内流, 他还可降低胰腺酶活性, 减轻胰腺组织自我消化等功能[14-15]. 海风藤酮广泛应用于心血管, 肺、脑、肾等疾病的防治. 本研究结果显示, 诱发胰腺炎后, 早期(3 h)即可见血清MDA含量增高、SOD降低; 且随着时间推移, 血清MDA进行性升高、SOD进行性降低, 二者改变的程度与胰腺的病理改变、AMY水平、腹水量的变化相吻合. 经海风藤酮治疗后, 虽然MDA仍继续升高, 但各时间段均比未治疗组有明显降低; SOD水平在造模12 h达到最低点后, 开始回升, AMY水平、腹水量、胰腺病理改变均较未经治疗的AP组减轻. 这提示AP时产生大量自由基, 而清除氧自由基的能力则明显下降, 可导致AP病程进展, 海风藤酮能减少AP时血清内自由基, 提高保护因子SOD水平, 减轻胰腺的病理损害, 阻止了病变的继续发展. 本实验应用海风藤酮来治疗AP, 初步在自由基水平上了解海风藤酮对AP的影响, 但是, 海风藤酮减轻AP时自由基损害的具体机制仍未能清楚阐明, 有进一步研究的必要.

评论

背景资料

海风藤酮(kad-surenone)是中药海风藤的提取物, 能扩张外周血管, 改善微循环, 降低血液黏滞度, 改善血流变, 增加脏器微循环的血流量, 被广泛应用于心血管, 肺、脑、肾等疾病的防治. 本文旨在探讨其对大鼠急性胰腺炎的治疗作用.

同行评价

海风藤在临床上的功效主治是祛 风湿, 通经络, 行气止痛, 利水消肿. 本文观察海风藤酮对急性胰腺炎(AP)大鼠的治疗作用, 对于寻求急性胰腺炎的有效治疗方法有一定临床意义.

备注

电编:李琪 编辑:张焕兰

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