研究快报 Open Access
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世界华人消化杂志. 2007-01-18; 15(2): 161-164
在线出版日期: 2007-01-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i2.161
食管/胃底静脉曲张动物模型制作的改进
方和平, 汤照峰, 刘波, 刘池拽, 潘卫东, 许瑞云
方和平, 汤照峰, 刘波, 潘卫东, 许瑞云, 广州中山大学附属第三医院肝胆外科 广东省广州市 510630
刘池拽, 中山市中心医院急诊科 广东省中山市 528400
基金项目: 广东省科技计划重点项目, No. 20012176; 广东省医药卫生科研基金资助项目, No. A2001195.
通讯作者: 许瑞云, 510630, 广东省广州市天河区天河路600号, 广州中山大学附属第三医院肝胆外科. xuruiyun@yahoo.com.cn
电话: 020-85516867-2153
收稿日期: 2006-09-27
修回日期: 2006-10-20
接受日期: 2006-10-25
在线出版日期: 2007-01-18

目的: 改进制作食管/胃底静脉曲张动物模型的方法. 

方法:  选取成年杂种犬26条, 随机分成A、B两组, A组(n = 9)采用门静脉丝线栓塞法; B组(n = 17)采用可充式水囊缩窄环渐进性压迫缩窄门静脉联合门腔转流方法(以下简称可充式水囊缩窄造模法)制作动物模型, 对比两组门静脉压力、胃镜分级、门静脉系统造影图片、食管横切片黏膜下曲张静脉数量和管径、手术时间和术后生存率. 

结果: 成模后A组门静脉平均压力为16.3±2.5 cm H2O, B组门静脉平均压力为20.7±2.4 cm H2O, 差异显著(P<0.05). A、B组成模后食管/胃底静脉曲张胃镜分级(P = 0.026)、食管横切片曲张静脉数量(2.7±1.0 vs 4.1±1.2, P<0.05)和管径(1.4±0.3 vs 2.1±0.8, P<0.05)均有显著差异.

结论:  可充式水囊缩窄造模法是制作食管/胃底静脉曲张动物模型的有效方法.

关键词: 门静脉高压症; 食管; 静脉曲张; 动物模型
引文著录: 方和平, 汤照峰, 刘波, 刘池拽, 潘卫东, 许瑞云. 食管/胃底静脉曲张动物模型制作的改进. 世界华人消化杂志 2007; 15(2): 161-164
An improved reproducible canine model of esophagogastric varices
He-Ping Fang, Zhao-Feng Tang, Bo Liu, Chi-Zhuai Liu, Wei-Dong Pan, Rui-Yun Xu
He-Ping Fang, Zhao-Feng Tang, Bo Liu, Wei-Dong Pan, Rui-Yun Xu, Department Of Hepatobiliary Surgery, the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
Chi-Zhuai Liu, Department Of emergency, Zhongshan Central Hospital, Zhongshan 528400, Guangdong Province, China
Supported by the Key Item from Science and Technology Program of Guangdong Province, No. 20012176, and the Medical Research Fundation of Guangdong Province, No. A2001195.
Correspondence to: Rui-Yun Xu, Department of Hepatobiliary Surgery, the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510630, China. xuruiyun@yahoo.com.cn
Received: September 27, 2006
Revised: October 20, 2006
Accepted: October 25, 2006
Published online: January 18, 2007

AIM: To improve canine model of esophago-gastric varices.

METHODS: A total of 26 canines were used to establish the models of esophagogastric varices with different methods. In group A, nine models of esophagogastric varices were established with two silk in portal vien.In group B, a side-to-side portocaval shunt was performed in 17 canines, with the inferior vena cava ligated, and the portal vein was gradually constricted by a balloon constrictor in order to increase portal vein pressure. The portal pressure, esophagogastric varices grades, coronary venography, and esophageal pathologic changes were examined in both groups.

RESULTS: The mean portal pressure was significantly higher in group B than that in group A (20.7 ± 2.4 cm H2O vs 16.3 ± 2.5 cm H2O, P < 0.05). The esophagogastric varices grades (P = 0.026), numbers (2.7 ± 1.0 vs 4.1 ± 1.2, P < 0.05) and diameters (1.4 ± 0.3 mm vs 2.1 ± 0.8 mm, P < 0.05) of varicose veins were also significant different between group A and B.

CONCLUSION: The portocaval shunt with a balloon constrictor is feasible and reliable for the induction of esophagogastric varices.

Key Words: Portal hypertension; Esophagogastric varices; Animal model
0 引言

食管/胃底静脉曲张动物模型是门静脉高压症临床与实验研究的重要平台[1-3], 国内外现存造模方法如Jensen[4]、Sakata[5]制模法, 丝线[6]、白芪粉[7]、PVA[8]栓塞门静脉法, 丝线结扎门静脉联合门腔转流法[9-10]等, 但都存在一个共同缺点, 即成模不稳定, 或成模成功率低. 因此, 改进现有造模方法, 制作稳定、持久、成功率高的食管/胃底静脉曲张动物模型, 对门静脉高压症的研究(尤其是治疗方法的研究)具有重要意义. 本研究对Dennis的"琼脂缩窄环造模法"进行改进, 自行设计了"可充式水囊缩窄造模法", 并以成年杂种犬为对象, 对该法的造模效果进行了评价. 

1 材料和方法
1.1 材料

健康成年杂种犬26条, 雌雄不限, 体质量12.3-22.6 (平均16.1±2.5) kg, 动物由中山大学医学院实验动物中心提供. 随机分成A, B两组, A组9条采用门静脉丝线慢性栓塞法. B组17条采用可充式水囊缩窄造模法制作模型,

1.2 方法

1.2.1 门静脉丝线慢性栓塞法[3]:A组: 上腹部正中切口开腹, 开腹后胃网膜右静脉插管水柱法测压, 暴露门静脉前壁, 将肝胃韧带离断以防止形成新侧支回流. 将两根十号丝线分别穿进两个18号针头, 在门静脉前壁距离胃冠状静脉汇入口上方0.5 cm向肝门方向30度角穿刺, 轻轻送入丝线约10 cm, 退出针头, 丝线被保留在门静脉内, 纱布压迫局部止血. 门静脉距离肝门1.5 cm以丝线结扎缩窄50%, 关腹.

1.2.2 可充式水囊缩窄造模法(图1): B组: 取上腹部正中切口开腹, 暴露肝门部门静脉及其属支(胃十二指肠静脉和胃脾静脉)和下腔静脉. 结扎离断肝胃韧带, 在胃十二指肠静脉以上将门静脉游离约1.5 cm, 备放置缩窄环. 向下游离3-4 cm门静脉和肠系膜上静脉, 游离下腔静脉约3-6 cm, 在胃脾静脉汇入门静脉以下行门静脉-下腔静脉侧吻合. 将一直径0.8 cm, 长1.0 cm可充式水囊缩窄环套于肝门部门静脉游离段(图2), 在门-腔吻合口近心端0.5-1.0 cm处以7号丝线结扎下腔静脉, 使下腔静脉血流经吻合口汇入门静脉. 再次测定门静脉压力, 试验性向球囊注水以充盈球囊, 记录压迫门静脉1/2, 2/3及全部闭塞所需水量, 将球囊注水端自腹壁引出并固定包埋于皮下. 术后7-10 d按照术中测得的水量注射泛影葡胺至球囊以缩窄门静脉1/2-2/3, 14-21 d再次注入泛影葡胺, 摄片球囊完全被造影剂充满, 外形与缩窄环一致, 至此门静脉完全阻断.

图1
图1 可充式水囊缩窄环.
图2
图2 门腔吻合口.

术前分别行胃镜检查, 食管曲张静脉程度按以下标准记录: Ⅰ级: 曲张静脉直径小于1.0 mm; Ⅱ级: 曲张静脉直径1.0-2.0 mm; Ⅲ级: 曲张静脉直径2.0-3.0 mm; Ⅳ级: 曲张静脉直径大于3.0 mm. 开腹后分别测量两组门静脉压力; 手术时间; 动物生存率; 成模后行胃镜检查, 开腹行门静脉压力测定, 门静脉系统造影, 取食管下段距齿状线2 cm全食管冠状切片行病理检查, 每个标本取3张切片, 计数黏膜下曲张静脉数量和管径, 直径大于0.5 mm静脉纳入计数.

统计学处理 应用SPSS10.0 for windows软件进行统计学分析, 计量资料以mean±SD表示, 均数的比较采用t检验, 等级资料采用秩和检验. P<0.05有统计学意义.

2 结果

术前两组门静脉压力A组为12.3±1.8 cm H2O, B组为12.7±1.2 cm H2O (P>0.05)无显著差异. 成模后两组门静脉压力A组为16.3±2.5 cm H2O, B组为20.7±2.4 cm H2O(P<0.05)有显著差异. 成模后A, B组食管/胃底曲张静脉胃镜分级见表1, A组小于B组, 差异显著(P<0.05). 成模后门静脉造影显示, 食管/胃底周围迂曲扩张的曲张静脉数量(条)A组为3.0±1.2, B组为4.8±1.9有显著差异(P<0.05); A组管径(mm)为1.4±0.3, B组为2.1±0.8有显著差异(P<0.05). 成模后模型的全食管冠状病理切片中平均曲张静脉数量(条)A组2.7±1.0, B组4.1±1.2条, 有显著差异(P<0.05). 平均曲张静脉管径(mm)A组1.1±0.4, B组1.7±0.6, 有显著差异(P<0.05). 平均手术时间, A组49±3 min, B组93±5 min; 两组动物术后生存率均为100%.

表1 A、B组但食管/胃底曲张静脉的胃镜分级.
组别胃镜分级
Ⅰ级 (条)Ⅱ级 (条)Ⅲ级 (条)Ⅳ级 (条)
A5310
B3653
3 讨论

国内外学者根据门静脉高压症的发生机制和门脉高压性血管病变的特点[11-12], 通过增加门静脉阻力或/和增加门静脉血流量, 建立了不同的门静脉高压症食管/胃底静脉曲张模型, 如Jensen et al[4]门腔吻合加琼脂环逐渐缩窄门静脉术; Sakata et al[5]的近端脾静脉-肾动脉、远端脾静脉-肾静脉吻合术; 国内李宗芳 et al[6]的缩窄门静脉主干1/2加丝线慢性栓塞术等. 各种方法普遍存在成模不稳定, 或成模成功率低, 或所形成的食道/胃底静脉曲张非常轻微, 或模型维持时间短暂等, 影响了研究工作的顺利开展. Dennis的制作模型方法被运用较多, 但该方法制模不稳定, 且约1/3需二次手术结扎门静脉, 手术操作相对复杂, 实验动物死亡率高, 琼脂缩窄环缩窄门静脉的程度难以控制. Sakata做两个吻合口, 吻合口径较小, 易栓塞致失败, 并且需二次手术缩窄, 动物存活率低. 因此我们对Dennis的制模方法进行了改进.

食管/胃底静脉曲张破裂出血的各种治疗方法, 尤其是内镜治疗[13-15], 大多需要食管/胃底静脉曲张动物模型作为研究基础. 理想的食管/胃底静脉曲张模型应该具备制作简单、成模率高、模型维持时间长、对进一步实验耐受性好等特点, 模型的食管/胃底静脉曲张程度以及维持时间是至关重要的. 我们在Dennis制作模型的方法上进行改进, 采用可充式水囊缩窄环渐进性缩窄门静脉. 优点是: 通过注水量不同可自由控制每次缩窄门静脉程度, 在X光下注入造影剂可动态观察门静脉被分次缩窄直至完全闭塞. Dennis琼脂缩窄环靠琼脂的自然膨胀来缩窄门静脉, 不能人为控制门静脉缩窄程度, 在他的文章中就明确指出部分动物因缩窄不完全, 需二次开腹手术闭塞门静脉. 有学者采用体外丝线收紧法结扎缩窄门静脉, 缩窄程度和可控性也不够确切. 经我们改进后方法有效的保证了每个模型的门静脉均得到有效缩窄, 避免了二次手术, 提高了一次成模率.

食管/胃底静脉曲张模型的制作方法中丝线栓塞法方法简单、成模率高, 故我们将可充式水囊缩窄造模法与李宗芳提倡的丝线法做了比较. 比较后发现该法成模后门静脉压力明显高于丝线法, 食管/胃底静脉曲张的程度重于丝线法, 曲张静脉的数量也多于丝线法. 该法虽然在模型制作难度上略大于丝线法, 但在成模后门静脉压力增高程度、曲张静脉的数量和程度上均优于丝线法. 原因: 可充式水囊缩窄造模法中将门腔静脉间建立一较大吻合口, 且在吻合口上方结扎下腔静脉, 使下腔静脉血全部回流至门静脉系统, 大大增加了门静脉系统灌注量; 分次缩窄门静脉避免了突然闭塞门静脉导致回流障碍引发的死亡, 同时为侧支循环的建立提供充分的时间; 门静脉闭塞后, 门静脉系统及下腔静脉系统大量血流需通过门腔间大量开放的侧支循环回流. 丝线法仅仅缓慢闭塞门静脉而门静脉血流量并未大量增加是远远不够的; 且丝线栓塞仍有再通可能; 从解剖上看狗的肝脏有5叶之多, 门静脉分支较多, 栓塞其中两条不足以完全闭塞门静脉.

致谢

感谢邓美海、凌云彪副教授、林楠主治医师、俞中和老师等对本论文的支持和帮助.

评论
背景资料

食道/胃底静脉曲张动物模型是门静脉高压症临床与实验研究的重要平台, 国内外现存造模方法如Dennis、Sakata制模法, 丝线、白芪粉、PVA栓塞门静脉法, 丝线结扎门静脉联合门腔转流法等, 都存在一个共同缺点, 即成模不稳定, 或成模成功率低, 或所形成的食道/胃底静脉曲张非常轻微, 或模型维持时间短暂等, 影响了研究工作的顺利开展, 并对研究结果的可靠性带来了较大的负面影响. 因此, 改进现有造模方法, 制作稳定、持久、成功率高的食道/胃底静脉曲张动物模型, 对门静脉高压症的研究(尤其是治疗方法的研究)具有重要意义.

创新盘点

本研究对Dennis的"琼脂缩窄环造模法"进行改进, 自行设计了"可充式水囊缩窄造模法", 并以成年杂种犬为对象, 对该法的造模效果进行了评价.

同行评价

本文具备一定科学性和创新性, 基本反映我国胃肠病学临床研究的先进水平.

电编: 李琪 编辑: 张焕兰

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