临床研究 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2007. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2007-07-08; 15(19): 2120-2127
在线出版日期: 2007-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i19.2120
云南地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性
庄林, 游晶, 陈红英, 俞岚, 孔蕾, 唐宝璋, 黄俊华, 袁绍明, HutchaSriplung, VirasakdiChongsuvivatwong, AlanGeater, 袁丽芳, 王辉
庄林, 孔雷, 昆明市第三人民医院肝病科, 云南省昆明市 650041
游晶, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand; 昆明医学院第一附属医院感染病科, 云南省昆明市 650032
陈红英, 俞岚, 唐宝璋, 袁丽芳, 王辉, 昆明医学院第一附属医院感染病科, 云南省昆明市 650032
黄俊华, 中国人民武装警察部队云南总医院感染病科, 云南省昆明市 650111
袁绍明, 云南省第三人民医院内科, 云南省昆明市 650000
Hutcha Sriplung, Virasakdi Chongsuvivatwong, Alan Geater, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand
通讯作者: 游晶, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand; 云南省昆明市西昌路295号, 昆明医学院第一附属医院感染病科. jingyoukm@126.com
电话: 0871-5324888
收稿日期: 2007-01-13
修回日期: 2007-03-01
接受日期: 2007-03-23
在线出版日期: 2007-07-08

目的: 了解云南地区乙型肝炎病毒基因型分布特征, 探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平的关系.

方法: 选择云南地区慢性HBV感染者117例, 其中慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)26例、慢性乙型肝炎(CHB)55例(轻度21例、中度24例、重度10例)、慢性重型肝炎(CLF)18例、乙肝后肝硬化(LC)11例及原发性肝细胞肝癌(HCC)7例, 采用反向杂交技术(RDB)检测HBV基因型, 并对与其性别年龄、临床分型和病毒复制水平的关系进行分析.

结果: 云南地区HBV基因型以B型和C型为主, 分别为41.0%(48/117)和54.7%(64/117) , 并以C型为最多(χ2 = 4.38, P = 0.036); D型1例(0.86%), B、C混合型2例(1.71%), A、C混合型2例(1.71%). B基因型在轻度慢乙肝组所占的比例显著高于中、重度慢乙肝组(χ2 = 8.27、11.98, P = 0.004、0.001)、ASC组(χ2 = 5.46, P = 0.02)、CLF组(χ2 = 4.13, P = 0.042)和LC/HCC组(χ2 = 11.3, P = 0.001). C基因型在LC/HCC组和重度慢乙肝组所占的比例均显著高于轻度慢乙肝组(χ2 = 11.3, P = 0.001; χ2 = 8.78, P = 0.003), 与其他各临床型组间的比较则无显著性差异(P>0.05). C基因型在HBV DNA(+)组和HBeAg(-)组r所占的比例均分别显著高于HBV DNA(-)组(χ2 = 6.63, P = 0.01)和HBeAg(+)组(χ2 = 7.12, P = 0.008). B基因型在HBV DNA低水平复制组中所占的比例显著高于高水平复制组(χ2 = 4.12, P = 0.042). C基因型在HBV DNA高水平复制组中所占的比例显著高于B基因型(χ2 = 3.89, P<0.05). C基因型在年龄≥30岁组中所占的比例(63.3%)高于年龄<30岁组(45.6%)(χ2 = 3.7, P = 0.05). HBV基因型在性别间的分布无统计学差异(P>0.05)

结论: 云南地区存在HBV的B、C、D、B+C和A+C基因型, 以B型和C型为主要基因型, 并以C型为最多. B基因型在轻度慢乙肝的比例显著高于其他各临床型HBV感染者, 并且与HBV的低水平复制和低年龄有关. C基因型主要分布于重度慢乙肝和LC/HCC、HBV DNA高水平复制、年龄≥30岁的患者中. 提示C基因型与慢乙肝重度、肝硬化、肝细胞肝癌及HBV DNA高水平复制关系密切.

关键词: 乙型肝炎病毒; 基因型; 反向杂交; 分布; 临床相关性
引文著录: 庄林, 游晶, 陈红英, 俞岚, 孔蕾, 唐宝璋, 黄俊华, 袁绍明, HutchaSriplung, VirasakdiChongsuvivatwong, AlanGeater, 袁丽芳, 王辉. 云南地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性. 世界华人消化杂志 2007; 15(19): 2120-2127
Distribution and clinical significance of hepatitis B virus genotypes in patients with chronic HBV infection in Yunnan province China
Lin Zhuang, Jing You, Hong-Ying Chen, Lan Yu, Lei Kong, Bao-Zhang Tang, Jun-Hua Huang, Shao-Ming Yuan, Hutcha Sriplung, Virasakdi Chongsuvivatwong, Alan Geater, Li-Fang Yuan, Hui Wang
Lin Zhuang, Lei Kong, Department of Hepatopathy, Third Municipal People's Hospital of Kunming City, Kunming 650032, Yunnan Province, China
Jing You, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand; Department of Infectious Diseases, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032, Yunnan Province, China
Hong-Ying Chen, Lan Yu, Li-Fang Yuan, Hui Wang, Bao-zhang Tang, Department of Infectious Diseases, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, Kunming 650032, Yunnan Province, China
Jun-Hua Huang, Department of Infectious Diseases, Yunnan General Hospital of the Chinese People's Armed Police Forces, Kunming 650111, Yunnan Province, China
Shao-Ming Yuan, Department of Internal Medicine, Third People's Hospital of Yunnan Province, Kunming 650000, Yunnan Province, China
Hutcha Sriplung, Virasakdi Chongsuvivatwong, Alan Geater, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand
Correspondence to: Dr. Jing You, Epidemiology Unit, Faculty of Medicine, Prince of Songkla University, 90110 Thailand; Department of Infectious Diseases, the First Affiliated Hospital of Kunming Medical College, 295 Xichang Road, Kunming 650032, Yunnan Province, China. jingyoukm@126.com
Received: January 13, 2007
Revised: March 1, 2007
Accepted: March 23, 2007
Published online: July 8, 2007

AIM: To investigate the distribution of hepatitis B virus (HBV) genotypes in Yunnan province, China, and to explore the significance and the relationship of the HBV genotype with gender and age, clinical patterns of chronic HBV infection, and HBV replication.

METHODS: Serum samples from 117 patients with chronic hepatitis B virus infection from Yunnan province, consisting of 26 chronic asymptomatic HBV carriers (ASC), 55 chronic hepatitis B (CHB) (mild 21, moderate 24 and severe 10), 18 chronic liver failure (CLF), 11 liver cirrhosis (LC) and 7 hepatocellular carcinoma (HCC), were analyzed by Reverse dot blot (RDB) for HBV genotyping. The relationships of HBV genotype with gender and age, clinical patterns, and serological data of the patients were analyzed.

RESULTS: Genotype A, B, C and D were determined; 41.0% (48/117) were genotype B, 54.7% (64/117) genotype C, 0.86% (1/117) genotype D, 1.71% (2/117) genotype B+C and 1.71% (2/117) genotype A+C. Genotype B and C are predominant in this region of China. There was a statistically significant difference in the distribution of genotype B and C (χ2 = 4.38, P = 0.036). Genotype C was the dominant genotype and was prevalent in all patient categories. The ratio of genotype B in the mild CHB groups was significant higher than that in the moderate and severe groups (χ2 = 8.27, P = 0.004; χ2 = 11.98, P = 0.001, respectively), the ASC group (χ2 = 5.46, P = 0.02), the CLF group (χ2 = 4.13, P = 0.042) and the LC/HCC group (χ2 = 11.3, P = 0.001). The ratios of genotype C in the LC/HCC group and in severe CHB groups were significant higher than that in the mild CHB groups (χ2 = 11.3, P = 0.001; χ2 = 8.78, P = 0.003, respectively). The ratios of genotype C in the HBV DNA (+) and HBeAg () groups were higher than that in the HBV DNA (-) (χ2 = 6.63, P = 0.01) and HBeAg (+) groups (χ2 = 7.12, P = 0.008). The ratio of genotype B in the lowest-level group of HBV replication was obviously higher than that in the highest-level group of HBV replication (χ2 = 4.12, P = 0.042). The ratio of genotype C in the highest-level group of HBV replication was higher than that of genotype B (χ2 = 3.89, P < 0.05). The ratio of genotype C in the over 30-years age group was higher than that in under 30 group. By sex, there were no obvious differences (P > 0.05).

CONCLUSION: HBV genotype B, C, D and BC and AC combinations exist in Yunnan province, with genotype B and C being the major ones. Genotype C was the most prevalent in all patient categories. The ratio of genotype B in the mild CHB group was significant higher than that in any other clinical type of patients and was associated with a lower-level HBV replication and lower aged patients. Genotype C was mainly prevalent in patients with severe CHB, LC, HCC, active HBV replication and higher age. The results indicated that genotype C is associated with the development of severe liver disease and active HBV replication, while genotype B showed relatively good progress.

Key Words: Hepatitis B virus; Genotypes; Reverse dot blot; Distribution; Clinical interrelation
0 引言

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)为一双链DNA病毒, 属嗜肝DNA病毒(Hepadnaviridae). HBV感染易于慢性化, 并逐渐发展成肝硬化(LC)甚至肝细胞肝癌(HCC), 而严重威胁人类健康, 是一个全球性的健康问题[1-5]. 世界上有20亿人感染过HBV, 约占全球人口的三分之一, 目前全球大约有3.8亿HBV慢性感染者, 仅中国就有1.5亿, 其中2000万人为慢性乙肝患者, 每年因此导致大约50万人死亡[1]. 1988年Okamoto et al[6]首先提出了乙型肝炎病毒基因分型法, 近年来, 随着分子生物学技术的迅猛发展和对HBV认识的不断深入, 国内外许多学者对HBV基因分型及其与临床的相关性开展了大量的研究. HBV基因分型比血清亚型更能准确的反映原型病毒株之间的自然异质性, HBV基因分型方法有多种, 以全基因测序为HBV基因分型的金标准, 基于全基因核苷酸序列比较, HBV可分为A-H 8个基因型. 反向杂交(reverse dot blot, RDB)是Saiki et al[7]提出的一种斑点杂交技术, 该技术较正向斑点杂交和凝胶电泳印迹转移杂交具有快速、简便、高敏感性、特异性强的特点, 尤其是基因分型、基因突变检测、病原体的检测等方面有其独特的优势. HBV基因型呈地理区域性分布, 且不同基因型致病性不同, HBV基因型与乙型肝炎病情的进展、临床表现、治疗、预后有密切的关系. 我们采用RDB技术对云南地区慢性HBV感染者血清中HBV DNA进行基因分型测定, 并分析基因型分布特点, 探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平的关系.

1 材料和方法
1.1 材料

慢性HBV感染者117例均为昆明市第三人民医院和昆明医学院第一附属医院感染病科2006-01/2006-10的住院及门诊患者. 男85例, 女32例, 平均年龄34.20±13.96岁, 30岁以下57例(48.7%), 30岁以上60例(51.3%). 其中慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)26例、慢性乙型肝炎(CHB)55例(轻度21例、中度24例、重度10例)、慢性重型肝炎(CLF)18例、乙肝后肝硬化(LC)11例及原发性肝细胞肝癌(HCC)7例. 其中HBsAg(+), HBeAg(+), HBcAb(+)83例; HBsAg(+), HBeAb(+), HBcAb(+)26例; HBsAg(+), HBcAb(+)8例. HBV DNA(+)109例, HBV DNA(-)8例. 诊断符合2005-12北京公布的中华医学会肝病学分会与感染病学分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准[8]. 全部患者HCV、HDV、HEV、HIV均阴性.

1.2 方法

HBV基因分型检测应用反向杂交技术(RDB), 血清乙肝标志物(HBV M) (HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb, HBcAb, Anti-HBcAb IgM)检测用ELISA法, HBV DNA检测采用实时荧光定量PCR检测系统(RT-PCR法), 最低检测值为1000 copies/mL, 所有操作均严格按试剂盒使用说明进行. 肝功能采用全自动生化分析仪行常规检测.

统计学处理 部分结果以均值±标准差(mean±SD)表示, 部分以百分率表示. 采用 SPSS14.0统计软件进行分析, 组间均数比较用方差分析和t检验, 样本率的比较采用χ2检验.

2 结果
2.1 117例慢性HBV感染者的临床基本情况

本组患者男性(72.6%, 85/117)多于女性(27.4%, 32/117), 差异有显著性(χ2 = 48.02, P<0.0001). 30岁以下和30岁以上分别占48.7%(57/117)、51.3%(60/117), 差异无显著性(χ2 = 0.15, P>0.05). 在5组慢性HBV感染患者中, 从ASC到HCC, 女性的患病率逐渐减少, 患者的平均年龄逐渐增高. 在CHB(中、重度)和CLF组, ALT、AST水平显著高于其他各组. ASC组患者血清HBV DNA载量最高, CLF和HCC组则明显低于其他组. 在各临床分型组中, HBeAg阳性率依次分别为ASC 88.5%(23/26)、CHB 72.7%(40/55)、CLF 72.2%(13/18)、LC 45.5%(5/11)、HCC 28.6%(2/7); 而HBeAb阳性率则依次分别为ASC 11.5%(3/26)、CHB 20.0%(11/55)、CLF 27.8%(5/18)、LC 27.3%(3/11)、HCC 57.1%(4/7), 可见HBeAg阳性率逐渐降低, 而HBeAb阳性率则逐渐升高(表1).

表1 117例慢性乙型肝炎病毒感染者的临床基本情况(mean±SD).
临床分型n性别 (男/女)年龄ALT (IU)AST (IU)HBV DNA (Log, copies/mL)HBeAg (+/-)(%)HBeAb (+/-)(%)
ASC2613/1324.77±26.00±29.67±7.33±1.5123/33/23
8.643.466.39(88.5)(11.5)
CHB轻度2119/231.38±76.48±60.59±6.95±1.3416/54/17
11.145.516.03(76.2)(19)
CHB中度2416/829.79±227.62±132.43±v7.43±1.0418/64/20
7.0845.6127.76(75.0)(16.7)
CHB重度1010/026.80±398.50±182.30±7.34±1.406/43/7
5.0586.9929.78(60.0)(30.0)
CLF1811/751.22±269.24±255.44±5.18±1.7113/55/13
11.1174.1851.89(72.2)(27.8)
LC1110/141.45±89.17±104.44±6.18±1.615/63/8
18.1116.8013.54(45.5)(27.3)
HCC76/148.14±162.71±165.71±5.04±1.672/54/3
11.9447.7950.26(28.6)(57.1)
HBeAg阳性: 其中包括(1)HBsAg(＋)、HBeAg(＋)、HBcAb(＋), 余项均为阴性; (2)HBsAg(＋)、HBeAg(＋), 余项均为阴性; HBeAg阴性: 其中包括(1)HBsAg(＋)、HBeAb(＋)、HBcAb(＋), 余项均为阴性; (2)HBsAg(＋)、HBeAb(＋), 余项均为阴性.
2.2 慢性HBV感染者的基因型的分布

117例慢性HBV感染者中, HBV DNA基因分型结果为: B型48例(41.0%)、C型64例(54.7%)、D型1例(0.85%)、B+C型2例(1.71%)、A+C型2例(1.71%). 未检出其他基因型. C型显著多于B型(χ2 = 4.38, P = 0.036).

2.3 HBV基因型在不同性别、年龄中的分布

男、女性别中均以C基因型占优势, 分别为55.3%, 53.1%, 性别间无统计学差异. B基因型在年龄<30岁组中所占的比例(50.9%)高于年龄≥30岁组(31.7%)(χ2 = 4.46, P<0.05), C基因型在年龄≥30岁组中所占的比例(63.3%)高于年龄<30岁组(45.6%, 26/57)(χ2 = 3.7, P = 0.05). 不同性别、年龄患者HBV基因型分布情况见表2.

表2 不同性别、年龄患者乙型肝炎病毒基因分型结果n(%).
n基因型
BCDB+CA+C
男8536(42.4)47(55.3)2(2.4)
女3212(37.5)17(53.1)1(3.1)2(6.3)
年龄<305729(50.9)a26(45.6)a1(1.8)1(1.8)
年龄≥306019(31.7)38(63.3)2(3.3)1(1.7)
其中: ≥30, <504212(28.6)28(66.7)1(2.4)1(2.4)
≥50187(38.9)10(55.6)1(5.6)
合计11748(41.0)64(54.7)1(0.85)2(1.71)2(1.71)
aP<0.05 vs 年龄≥30岁组.
2.4 HBV基因型在不同临床分型患者中的分布

2.4.1 HBV基因型在各临床型组内的构成比: 在各临床分型的慢性HBV感染者中, ASC、CHB、CLF患者组内B、C基因型所占比例均无统计学差异(χ2 = 1.23、0.04、0.11, P>0.05); LC/HCC组内C基因型所占比例显著高于B基因型(χ2 = 11.11, P = 0.001), 提示C基因型主要出现在LC/HCC患者中(表3). 在CHB患者中, CHB-轻度组内B基因型所占的比例显著高于C基因型(χ2 = 11.52, P = 0.001); CHB-中度组内C基因型所占的比例稍高于B基因型, 但无统计学差异(χ2 = 2.12, P>0.05); CHB-重度组内C基因型所占的比例显著高于B基因型(χ2 = 9.9, P = 0.005). 可见, 随着慢性肝炎程度的加重, C基因型渐占优势, 也即, C基因型主要出现在慢性肝炎重度患者中, 而B基因型主要出现在慢性肝炎轻度患者中.

表3 慢性乙型肝炎病毒感染者的病毒基因分型结果n(%).
临床分型n基因型
BCDB+CA+C
ASC2611(42.3)a15(57.7)
CHB5525(45.5)26(47.3)1(1.8)1(1.8)2(3.6)
CHB轻度2116(76.2)5(23.8)
CHB中度248(33.3)b13(54.2)1(4.2)2(8.3)
CHB重度101(10.0)b8(80.0)d1(10.0)
CLF188(44.4)a9(50.0)1(5.6)
LC/HCC184(22.2)b14(77.8)d
合计11748(41.0)64(54.7)1(0.86)2(1.71)2(1.71)
aP<0.05,
bP<0.01 vs 慢性乙型肝炎轻度组B基因型比例;
dP<0.01 vs 慢性乙型肝炎轻度组C基因型比例.

2.4.2 HBV基因型在各临床型组间的构成比: B基因型在轻度慢乙肝组(CHB-轻度组)所占的比例显著高于中、重度慢乙肝组(χ2 = 8.27, P = 0.004; χ2 = 11.98, P = 0.001)、ASC组(χ2 = 5.46, P = 0.02)、CLF组(χ2 = 4.13, P = 0.042)和LC/HCC组(χ2 = 11.3, P = 0.001). C基因型在LC/HCC组所占的比例显著高于轻度慢乙肝组(CHB-轻度组)(χ2 = 11.3, P = 0.001), 在重度慢乙肝组(CHB-重度组)所占的比例也显著高于轻度慢乙肝组(CHB-轻度组)(χ2 = 8.78, P = 0.003), 与其他各临床型组间的比较则无显著性差异(P>0.05).

2.5 HBV基因型在不同病毒复制水平患者中的分布

B基因型在HBV DNA低水平(<1.0×103 copies/mL)复制组中所占的比例(62.5%)显著高于高水平(≥1.0×105 copies/mL)复制组(40.0%)(χ2 = 4.12, P = 0.042); 也显著高于中水平(≥1.0×103, <1.0×105)复制组(33.6%), 但无统计学差异(χ2 = 1.45, P = 0.225), 估计与中水平组病例数较少有关. C基因型在HBV DNA中水平, 高水平(≥1.0×105 copies/mL)复制组中所占的比例显著高于低水平复制组, 但无统计学差异, 估计与病例数较少有关(表4).

表4 不同HBV复制水平患者乙型肝炎病毒基因分型结果n(%).
病毒载量(copies/mL)n基因型
BCDB+CA+C
HBV DNA:<1.0×10385(62.5)2(25.0)1(12.5)
HBV DNA:≥1.0×103,
<1.0×10593(33.6)6(66.7)
HBV DNA:≥1.0×105,
<1.0×1074213(31.0)29(69.0)
HBV DNA:≥1.0×1075827(46.6)27(46.6)1(1.7)1(1.7)2(3.4)
合计11748(41.0)64(54.7)1(0.86)2(1.71)2(1.71)
2.6 HBV基因型在HBV DNA/HBeAg阳性和阴性患者中的分布

在HBeAg阳性组患者中C基因型比例(50.6%)稍高于B基因型(44.6%), 但无显著性差异(χ2 = 0.6, P>0.05). 而在HBeAg阴性组患者中C基因型比例(64.7%)显著高于B基因型(32.4%), 具有显著性差异(χ2 = 7.12, P = 0.008). 在HBV DNA阳性组患者中, C基因型(56.9%)显著高于B基因型(39.4%)(χ2 = 6.63, P = 0.01); 而在HBV DNA阴性组患者中, B基因型比例(62.5%)显著高于C基因型(25.0%), 但却无统计学差异(χ2 = 2.29, P>0.05), 考虑可能与例数较少有关(表5).

表5 HBVDNA/HBeAg阳性和阴性患者基因分型结果n(%).
n基因型
BCDB+CA+C
HBV DNA(-)85(62.5)2(25.0)1(12.5)
(<1.0×103 copies/mL)
HBV DNA(+)10943(39.4)62(56.9)1(0.9)1(0.9)2(1.8)
(>1.0×103 copies/mL)
HBeAg(-)3411(32.4)22(64.7)1(2.9)
HBeAg(+)8337(44.6)42(50.6)2(2.4)2(2.4)
3 讨论

最早Okamaoto et al[6]通过对HBV全基因序列测定, 奠定了基因分型的基础. 根据HBV核苷酸全序列异质性≥8%, 已发现的HBV基因型有A-H型8种. HBV基因型的分布具有一定的地域性[9-18], A型主要分布于西欧、北欧、北美洲及非洲地区; B型和C型是亚洲和大洋洲的特征性基因型, B型主要见于中国、日本、印度尼西亚、越南和巴西, 其中Bj基因型在日本被发现, 而Ba基因型则分布在整个亚洲; C型主要见于中国、韩国、日本、越南和玻利尼西亚; D型分布最为广泛, 主要分布于中东、北非和南欧, 亦是地中海地区HBV的主要基因型, 还发现于亚洲少数地区; E型主要分布于非洲撒哈拉沙漠地带; F型主要分布于美国、南美洲的土著居民; G型在法国、美国、德国、英国和意大利被发现; H型已在尼加拉瓜、墨西哥及美国加利弗尼亚地区被发现. Chu et al[19]报道A-G 7种基因型均在美国被发现. 有研究[20]表明基因分布还受种族背景的影响, 基因A、D型主要在白种人中被发现, 而亚洲的感染者主要是基因型B和C. 大量研究[11-15,21-26]表明, 我国HBV基因型南方以B型为主, 北方以C型为主, D型仅见于西部及少数民族地区, A、F型偶有发现, 还未发现其他型别. 也有学者研究发现D基因型在我国宁夏地区、广东地区和香港地区约占感染者的15%, 因而HBV基因型在我国的确切分布状况仍不十分清楚[14]. 本研究结果显示, B型48例, C型64例, D型1例, BC混合型和AC混合型各2例, 没有发现其他基因型, 表明云南地区存在HBV的B、C、D、B+C和A+C基因型, 以B型(41.0%)和C型(54.7%)为主要基因型, 并以C型为最多.

HBV感染不仅可以引起急、慢性病毒性肝炎, 而且还与肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)的发生、发展有密切关系. HBV感染的临床转归一方面决定于患者的年龄和免疫能力, 另一方面也与感染病毒株的基因型种类密切相关. 人类感染HBV基因型的不同类型, 与感染后的临床疾病谱及疾病预后有一定的相关性, 提示不同的基因型有致病性差异. 近年研究[17,27-31]发现HBV基因型是影响慢性乙型肝炎的临床转归的主要决定因素之一, 在以B、C为优势的地区, C型具有较强的致病能力, 预后差; 在以A、D为优势的地区, D型具有较强的致病性, 肝病严重, 预后不良; 基因型C在乙肝后肝硬化的发病中起一定的作用, 然而基因型B与年轻无肝硬化患者肝癌的发生有关. Mayerat et al[20]和Akuta et al[28]报道, HBV急性感染后, A型易成为慢性持续感染, 而D型在急性肝炎中最常见. Kao et al[32]报道, 我国台湾地区以B、C 型为优势株, 50岁以上HCC和LC患者中以C型为优势基因型, 而50岁以下以B型为主, 提示C型与严重肝病有关, 而B型似乎与年轻人肝癌有关. Chan et al[33]报道, C型患者炎症坏死指数分值高于B型. Sakugawa et al[34]报道, 日本冲绳地区以B型为优势基因型, 而该地区是乙型肝炎高发区, 但因肝病死亡的比例却最低, 提示B型预后良好. Thakur et al[35]对印度慢性肝病患者的研究发现, 印度以A、D两型为主, 基因型D和许多严重的肝病密切相关, 可能预示着在印度年轻患者中肝细胞癌的发生率高. Sanchez-Tapias et al[36]报道, 基因型F引起的肝病的死亡率要比基因型A或D高. Yotsuyanagi et al[37]则报道急性乙肝中以基因型A最常见, A型较C型有较低的最高ALT水平, 且较C型有较长及较轻的临床经过.

我们的研究结果显示, 男、女性别中均以C基因型占优势, 分别为55.3%和53.1%, 性别间无统计学差异. 年龄<30岁组中以B基因型占优势, 年龄≥30岁组, 则以C基因型占优势; 且年龄<30岁组的B基因型比例高于年龄≥30岁组(P<0.05), 年龄≥30岁组的C基因型比例高于年龄<30岁组(P = 0.05). 在各临床分型的慢性HBV感染者中, B基因型在轻度慢乙肝组所占的比例显著高于中、重度慢乙肝组(P<0.001)、ASC组(P<0.05)、CLF组(P<0.05)和LC/HCC组(P<0.001). C基因型在LC/HCC组和重度慢乙肝组所占的比例均显著高于轻度慢乙肝组(P<0.01). 研究结果表明, C基因型主要分布于重度慢乙肝和LC/HCC、年龄≥30岁的患者中, 提示C基因型与慢乙肝重度、肝硬化、肝细胞肝癌关系密切.

在HBV DNA阳性组患者中, C基因型(56.9%)显著高于B基因型(39.4%)(P = 0.01). HBV DNA低水平复制组中, B基因型所占比例(62.5%)显著高于C基因型(25.0%), HBV DNA中水平复制组中, C基因型所占比例(66.7%)显著高于B基因型(33.6%), 统计学无显著性差异可能与此组病例数少有关. HBV DNA高水平复制组(≥1.0×105 copies/mL)中, C基因型所占比例(45.3%)显著高于B基因型(27.1%), 具有显著性差异(P<0.05). 结果表明: 随着HBV DNA复制水平的增加, 在慢性HBV感染者中, B基因型所占比例逐渐减少, 而C基因型所占比例则逐渐增加. 提示, C基因型与HBV DNA高水平复制关系密切. 在HBeAg阳性组患者中C基因型比例(50.6%)稍高于B基因型(44.6%), 但无显著性差异(P>0.05). 而在HBeAg阴性组患者中C基因型比例(64.7%)显著高于B基因型(32.4%), 具有显著性差异(P<0.01), 提示C基因型与HBV高复制有关并可能存在病毒变异. 有研究表明, HBV基因型与病毒复制水平及病毒标志物的表达有一定的相关性. Watanabe et al[27]研究报道, 基因C型的HBeAg阳性率高于B型和A型, 而B型HBeAg阴性率高于C型, 同时B型血清HBeAg清除率较C型显著常见且较早发生[28-29,32,38]; 基因C型血清HBV DNA水平显著高于B型; A型的HBV DNA自然清除率高于D型和F型, 同时A型的HBsAg自然清除率也比D型高; 以上均提示C型HBV复制较活跃, 易形成持续病毒血症, 不易发生e系统血清转换, 而B型血清转换发生快, 免疫清除HBV较C型早.

总之, HBV基因型与病毒复制与清除、病毒变异、临床表现、治疗应答和预后均有一定的关系, 提示不同基因型具有不同的致病性. 基因分型的研究为乙肝病毒变异的研究、发病机制的探讨、病情评估、治疗药物的选择和预后判定以及分子流行病学研究提供了有力工具. 本研究对云南地区HBV基因型进行了分析, 并对基因型分布特点及其与临床疾病的关系进行了探讨, 但是尚缺少对HBV基因型与治疗相关性等方面的研究, 对HBV基因型分布情况、与临床疾病谱及与抗病毒治疗的疗效等有待进一步深入研究和探索.

评论
背景资料

HBV感染是一个全球性的健康问题. 近年来, 随着分子生物学技术的迅猛发展和对HBV认识的不断深入, 国内、外许多学者对HBV基因分型及其与临床的相关性开展了大量的研究.HBV基因分型比血清亚型更能准确地反映原型病毒株之间的自然异质性, 根据HBV核苷酸全序列异质性≥8%, 已发现的HBV基因型有A-H型8种.HBV基因型的分布具有一定的地域性.HBV基因型与乙型肝炎病情的进展、临床表现、治疗、预后有着密切的关系.

研发前沿

HBV基因型的研究是目前乙型肝炎国内、外研究的热点.HBV基因型呈地理区域性分布, 并与致病性密切相关;HBV基因型与病毒复制与清除、病毒变异、临床表现、治疗应答和预后均有一定的关系.HBV基因型与疾病的关系及其相关机制需要深入研究, 以便将HBV基因型包括在对慢性HBV感染患者的临床评价和治疗预测中.

相关报道

Miyakawa及Enomoto分别在文ClassifyinghepatitisBvirusgenotypes(Intervirology2003;46(6):329-338)和HepatitisBvirusgenotypesandresponsetoantiviraltherapy(ClinLab2006;52(1-2):43-47)中对HBV基因分型及其与病毒复制与清除、病毒变异、临床表现、治疗应答和预后的关系进行了较为详细的阐述, 有助于对该方面进行较为全面的了解.

创新盘点

我国是乙肝高流行区, 云南省为一有着特殊地理环境的多民族聚居地区, 生活风俗习惯各不相同而又相互影响, HBV感染途径也不尽相同, 各民族均见有患病, HBV基因型在云南人群中的分布及其与临床的相关性方面的研究目前尚处于空白. 本文采用RDB技术对云南地区慢性HBV感染者血清中HBVDNA进行基因分型测定, 并分析基因型分布特点, 探讨其与慢性HBV感染者的性别和年龄、不同临床疾病谱、病毒复制水平的关系.

应用要点

本文发现, 云南地区存在HBV的B、C、D、B+C和A+C基因型, 以B型和C型为主要基因型, 并以C型为最多.C基因型与慢乙肝重度、肝硬化、肝细胞肝癌及HBVDNA高水平复制关系密切.HBV基因分型的研究为乙肝病毒变异的研究、发病机制的探讨、病情评估、治疗药物的选择和预后判定以及分子流行病学研究提供了有力工具.

名词解释

HBV的复制特点:以mRNA为中间体的逆转录复制, 由于这一过程中HBVDNA聚合酶缺乏校正功能, 而容易发生碱基配对错误, 因而HBV基因突变十分频繁.HBV变异的不断积累也使HBV的基因组核苷酸序列产生了较大的变化, 在此基础上形成了不同的基因型. 到目前为止, 根据HBV全基因系列异源性≥8%(同源性<92%)或者S基因系列核苷酸差异度≥4%(同源性<96%), 已将乙型肝炎病毒株分为A-H8种基因型.

同行评价

本文分析了云南地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性, 选题为目前研究热点, 所做的研究有一定的学术价值, 值得参考.

编辑:王晓瑜 电编:何基才

1.  WHO Fact Sheets. Available from: www.sho.int.September 24, 2004. .  [PubMed]  [DOI]
2.  Pol S. Natural history of hepatitis B infection. Presse Med. 2006;35:308-316.  [PubMed]  [DOI]
3.  Hu KQ. A Practical Approach to Management of Chronic Hepatitis B. Int J Med Sci. 2005;2:17-23.  [PubMed]  [DOI]
4.  Mahoney FJ. Update on diagnosis, management, and prevention of hepatitis B virus infection. Clin Microbiol Rev. 1999;12:351-366.  [PubMed]  [DOI]
5.  Chen CJ, Yang HI, Su J, Jen CL, You SL, Lu SN, Huang GT, Iloeje UH. Risk of hepatocellular carcinoma across a biological gradient of serum hepatitis B virus DNA level. JAMA. 2006;295:65-73.  [PubMed]  [DOI]
6.  Okamoto H, Tsuda F, Sakugawa H, Sastrosoewignjo RI, Imai M, Miyakawa Y, Mayumi M. Typing hepatitis B virus by homology in nucleotide sequence: comparison of surface antigen subtypes. J Gen Virol. 1988;69:2575-2583.  [PubMed]  [DOI]
7.  Saiki RK, Walsh PS, Levenson CH, Erlich HA. Genetic analysis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes. Proc Natl Acad Sci U S A. 1989;86:6230-6234.  [PubMed]  [DOI]
8.  中华医学会肝病学分会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南. 医药导报. 2006;25:Ⅰ-Ⅴ.  [PubMed]  [DOI]
9.  Stuyver L, De Gendt S, Van Geyt C, Zoulim F, Fried M, Schinazi RF, Rossau R. A new genotype of hepatitis B virus: complete genome and phylogenetic relatedness. J Gen Virol. 2000;81:67-74.  [PubMed]  [DOI]
10.  Jazayeri MS, Basuni AA, Cooksley G, Locarnini S, Carman WF. Hepatitis B virus genotypes, core gene variability and ethnicity in the Pacific region. J Hepatol. 2004;41:139-146.  [PubMed]  [DOI]
11.  范 金水, 庄 辉, 李 远贵, 朱 晓洁, 徐 德忠, 马 为民, 王 跃民, 陈 雅洁, 娄 国强, 马 廷贤. 我国8城市HBsAg阳性和阴性乙肝患者的病毒血清型和基因型分析. 中华微生物学和免疫学杂志. 1998;18:88-92.  [PubMed]  [DOI]
12.  刘 兴, 唐 红, 何 芳. 乙型肝炎病毒基因型研究新进展. 世界华人消化杂志. 2006;14:2211-2216.  [PubMed]  [DOI]
13.  黄 晶, 高 志良. 乙型肝炎病毒基因型研究现状. 中华传染病杂志. 2002;20:251-253.  [PubMed]  [DOI]
14.  阎 丽, 侯 金林, 郭 亚兵, 王 战会, 林 裕龙, 骆 抗先. 乙型肝炎病毒基因型S基因PCR-RFLP分型方法的建立. 中华传染病学杂志. 2001;19:224-228.  [PubMed]  [DOI]
15.  宋 淑静, 何 忠平, 庄 辉, 闫 杰, 董 庆鸣. 中国北方5城市慢性乙型肝炎患者的基因分型. 中国公共卫生. 2004;20:166-167.  [PubMed]  [DOI]
16.  Lindh M, Andersson AS, Gusdal A. Genotypes, nt 1858 variants, and geographic origin of hepatitis B virus--large-scale analysis using a new genotyping method. J Infect Dis. 1997;175:1285-1293.  [PubMed]  [DOI]
17.  Yuen MF, Sablon E, Tanaka Y, Kato T, Mizokami M, Doutreloigne J, Yuan HJ, Wong DK, Sum SM, Lai CL. Epidemiological study of hepatitis B virus genotypes, core promoter and precore mutations of chronic hepatitis B infection in Hong Kong. J Hepatol. 2004;41:119-125.  [PubMed]  [DOI]
18.  Kato H, Orito E, Gish RG, Sugauchi F, Suzuki S, Ueda R, Miyakawa Y, Mizokami M. Characteristics of hepatitis B virus isolates of genotype G and their phylogenetic differences from the other six genotypes (A through F). J Virol. 2002;76:6131-6137.  [PubMed]  [DOI]
19.  Chu CJ, Lok AS. Clinical significance of hepatitis B virus genotypes. Hepatology. 2002;35:1274-1276.  [PubMed]  [DOI]
20.  Mayerat C, Mantegani A, Frei PC. Does hepatitis B virus (HBV) genotype influence the clinical outcome of HBV infection? J Viral Hepat. 1999;6:299-304.  [PubMed]  [DOI]
21.  李 朝霞, 施 云珍, 宋 亚军, 杜 素萍, 厉 景南, 陈 翔. HBV基因型的检测及其临床意义的探讨. 浙江临床医学. 2004;6:839-840.  [PubMed]  [DOI]
22.  李 天一, 陈 青锋, 肖 萍, 郭 振华, 杨 彦一, 高 评. 兰州地区乙肝病毒基因亚型的感染情况. 临床消化病杂志. 2002;14:99-100.  [PubMed]  [DOI]
23.  戴 建宜, 石 之麟, 戴 勇, 杜 珙, 陈 德珩, 王 沙燕. 深圳地区乙型肝炎病毒DNA基因分型与临床的关系. 中华肝脏病杂志. 2004;12:199-120.  [PubMed]  [DOI]
24.  徐 红, 张 跃新, 魏 来, 肖 琳, 鲁 晓擘. 新疆汉族人群HBV基因型与临床病情的关系. 实用肝脏病杂志. 2005;8:11-15.  [PubMed]  [DOI]
25.  黄 晶, 高 志良. 乙型肝炎病毒基因型及其临床意义的研究. 世界华人消化杂志. 2002;10:1362-1364.  [PubMed]  [DOI]
26.  徐 龙, 车 达平, 吕 定英, 谢 南, 张 志成, 鲁 纯腾, 钱 刚, 万 影青, 吴 国伟, 涂 相林. 江西地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性. 中华肝脏病杂志. 2006;14:147-148.  [PubMed]  [DOI]
27.  Watanabe K, Takahashi T, Takahashi S, Okoshi S, Ichida T, Aoyagi Y. Comparative study of genotype B and C hepatitis B virus-induced chronic hepatitis in relation to the basic core promoter and precore mutations. J Gastroenterol Hepatol. 2005;20:441-449.  [PubMed]  [DOI]
28.  Akuta N, Suzuki F, Kobayashi M, Tsubota A, Suzuki Y, Hosaka T, Someya T, Kobayashi M, Saitoh S, Arase Y. The influence of hepatitis B virus genotype on the development of lamivudine resistance during long-term treatment. J Hepatol. 2003;38:315-321.  [PubMed]  [DOI]
29.  Lindh M, Hannoun C, Dhillon AP, Norkrans G, Horal P. Core promoter mutations and genotypes in relation to viral replication and liver damage in East Asian hepatitis B virus carriers. J Infect Dis. 1999;179:775-782.  [PubMed]  [DOI]
30.  Kao JH. Hepatitis B virus genotypes and hepatocellular carcinoma in Taiwan. Intervirology. 2003;46:400-407.  [PubMed]  [DOI]
31.  Chen CH, Lee CM, Lu SN, Changchien CS, Eng HL, Huang CM, Wang JH, Hung CH, Hu TH. Clinical significance of hepatitis B virus (HBV) genotypes and precore and core promoter mutations affecting HBV e antigen expression in Taiwan. J Clin Microbiol. 2005;43:6000-6006.  [PubMed]  [DOI]
32.  Kao JH, Chen PJ, Lai MY, Chen DS. Hepatitis B genotypes correlate with clinical outcomes in patients with chronic hepatitis B. Gastroenterology. 2000;118:554-559.  [PubMed]  [DOI]
33.  Chan HL, Tsang SW, Liew CT, Tse CH, Wong ML, Ching JY, Leung NW, Tam JS, Sung JJ. Viral genotype and hepatitis B virus DNA levels are correlated with histological liver damage in HBeAg-negative chronic hepatitis B virus infection. Am J Gastroenterol. 2002;97:406-412.  [PubMed]  [DOI]
34.  Sakugawa H, Nakasone H, Nakayoshi T, Orito E, Mizokami M, Yamashiro T, Maeshiro T, Kinjo F, Saito A, Miyagi Y. Preponderance of hepatitis B virus genotype B contributes to a better prognosis of chronic HBV infection in Okinawa, Japan. J Med Virol. 2002;67:484-489.  [PubMed]  [DOI]
35.  Thakur V, Guptan RC, Kazim SN, Malhotra V, Sarin SK. Profile, spectrum and significance of HBV genotypes in chronic liver disease patients in the Indian subcontinent. J Gastroenterol Hepatol. 2002;17:165-170.  [PubMed]  [DOI]
36.  Sanchez-Tapias JM, Costa J, Mas A, Bruguera M, Rodes J. Influence of hepatitis B virus genotype on the long-term outcome of chronic hepatitis B in western patients. Gastroenterology. 2002;123:1848-1856.  [PubMed]  [DOI]
37.  Yotsuyanagi H, Okuse C, Yasuda K, Orito E, Nishiguchi S, Toyoda J, Tomita E, Hino K, Okita K, Murashima S. Distinct geographic distributions of hepatitis B virus genotypes in patients with acute infection in Japan. J Med Virol. 2005;77:39-46.  [PubMed]  [DOI]
38.  Kobayashi M, Arase Y, Ikeda K, Tsubota A, Suzuki Y, Saitoh S, Kobayashi M, Suzuki F, Akuta N, Someya T. Clinical characteristics of patients infected with hepatitis B virus genotypes A, B, and C. J Gastroenterol. 2002;37:35-39.  [PubMed]  [DOI]