临床经验 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2006. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2006-09-28; 14(27): 2733-2736
在线出版日期: 2006-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i27.2733
乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系
杨延敏, 王洪笑, 王桂利, 崔亚利, 梁萍
杨延敏, 王洪笑, 王桂利, 崔亚利, 梁萍, 北京丰台医院 北京市 100071
通讯作者: 杨延敏, 100071, 北京市丰台区, 北京丰台医院检验科. yyanmin2005@yahoo.com.cn
收稿日期: 2006-07-13
修回日期: 2006-07-15
接受日期: 2006-07-19
在线出版日期: 2006-09-28

目的: 检测不同模式乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)、乙肝前S1, HBV DNA以及ALT, 比较HBV-LP以及乙肝前S1的检出与HBV DNA及ALT之间的关系, 探讨HBV-LP用于乙肝患者临床诊断的意义. 

方法: 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测177例HBV患者血清HBV-LP和乙肝前S1, 荧光定量PCR方法检测患者HBV DNA, 全自动生化分析仪检测ALT. 

结果: 相同乙肝模式患者血清HBV-LP与HBV DNA检出率无显著差异; HBeAg阳性患者血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者(95.45% vs 44.36%, P<0.05; 93.18% vs 41.35%, P<0.05); 相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV DNA的检出, 两者差异显著(P<0.05); HBV-LP阳性患者的ALT明显高于HBV-LP阴性患者.

结论: 乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA有较高的符合率, 是反映乙肝患者体内病毒复制情况的可靠指标; 而且乙肝表面抗原大蛋白阳性患者ALT较阴性患者高, 表明HBV-LP同时也反映了乙肝病情的活动情况.

关键词: 乙肝病毒表面抗原大蛋白; HBV DNA; 丙氨酸转氨酶
引文著录: 杨延敏, 王洪笑, 王桂利, 崔亚利, 梁萍. 乙肝表面抗原大蛋白与HBV DNA的比较及其与ALT的关系. 世界华人消化杂志 2006; 14(27): 2733-2736
Comparison between hepatitis B virus large protein and DNA and its association with alanine aminotransferase level
Yan-Min Yang, Hong-Xiao Wang, Gui-Li Wang, Ya-Li Cui, Ping Liang
Yan-Min Yang, Hong-Xiao Wang, Gui-Li Wang, Ya-Li Cui, Ping Liang, Beijing Fengtai Hospital, Beijing 100071, China
Correspondence to: Yan-Min Yang, Department of Laboratory Medicine, Beijing Fengtai Hospital, Beijing 100071, China. yyanmin2005@yahoo.com.cn
Received: July 13, 2006
Revised: July 15, 2006
Accepted: July 19, 2006
Published online: September 28, 2006

AIM: To explore the clinical significance of hepatitis B virus large protein (HBV-LP) in the diagnosis of viral replication.

METHODS: Serum samples were collected from 177 patients with HBV infection. HBV-LP, HBV preS1 and HBV markers were examined using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). HBV DNA was quantitatively detected by real-time polymerase chain reaction. The level of alanine aminotransferase was obtained by an automated biochemistry analyzer.

RESULTS: No significant difference was found between the detectable rates of HBV DNA and HBV-LP in patient with the same HBV markers. The positive rates of HBV-LP and HBV DNA in HBeAg-positive patients were higher than those of HBeAg negative ones (95.45% vs 44.36%, P < 0.05; 93.18% vs 41.35%, P < 0.05). There was significant difference between the detectable rates of HBV DNA and HBV preS1 in patients with the same HBV markers (P < 0.05). The average level of ALT in HBV-LP-positive patients was higher than that of HBV-LP-negative ones.

CONCLUSION: There is a perfect correlation between the positive rate of HBV-LP and HBV DNA, and HBV-LP is a reliable serological marker that can reflect the replication of HBV as well as liver function.

Key Words: Hepatitis B virus large protein; HBV DNA; Alanine aminotransferase
0 引言

乙型肝炎是我国发病率较高的传染病, 已经成为危害广大人民群众健康的社会公众性问题[1], 实验室的诊断对于判断病毒复制程度、监测抗病毒治疗效果以及评估预后效果等的作用至关重要. 长期以来, 临床上检测病毒及其复制情况的方法主要有酶联免疫法测HBV血清标志物和PCR法测定HBV DNA, HBV DNA是检测HBV自身, HBV血清标志物则是检测人体对HBV的体液免疫反应状态[2]. 近年来随着对乙肝表面抗原大蛋白中前S区抗原在乙肝发病机制、感染与复制等方面研究的深入, 研究者们逐渐认识到乙肝表面抗原前S区具有越来越重要的临床意义[3-5]. 研究人员发现, HBV表面大蛋白(HBV-LP)在空间上具有两种不同的跨膜构象, 作为HBV的包装蛋白, 内侧可以和HBV核壳体膜结合, 外侧可与易感细胞受体结合, 是HBV颗粒成熟包装的关键[3]. 由于单独的前S区抗原作为乙肝表面抗原大蛋白的一部分, 无法模拟其复杂的拓扑结构, 通过此种方法制作的mAb只具有线性表位但是失去了构象型表位. 这样针对低级结构抗原制作出的mAb在实际应用中便可能导致漏检. 我们使用北京热景生物技术有限公司研制的HBV-LP酶免定量试剂盒研究乙肝表面抗原大蛋白检测用于临床的意义, 该试剂盒包被针对构象型前S区的高亲和力、高特异性的单抗来检测HBV-LP.

1 材料和方法
1.1 材料

血清标本均来自2005-06/2005-10, 北京丰台医院门诊或是住院患者, 共计177例, 其中男92例, 女85例, 年龄15-81(平均47.3)岁, 所有标本均于-20℃保存以备用. Roche公司生产LightCycler自动荧光PCR仪; 日本奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪; 高速台式离心机(Sigma公司); 恒温加热器(美国Type17600Dr Bath); 酶标仪(DENLEY DRAGON MK2); 洗板机(DENLEY DRAGON WellWash4). 乙肝表面抗原大蛋白、乙肝两对半以及乙肝前S1检测采用酶联免疫方法, 乙肝表面抗原大蛋白酶免定量试剂由北京热景生物技术有限公司提供; 乙肝两对半检测为上海实业科华生物技术有限公司的酶联免疫法试剂, 其中HBsAg检测试剂盒为中国药品生物制品检定所批检产品; 乙肝前S1试剂购自上海阿尔法生物技术有限公司.

1.2 方法

HBV DNA检测采用荧光定量方法, 检测试剂盒购自深圳匹基生物工程有限公司, 灵敏度为5.0×102 copies/mL, 取≥1×103 copies/mL为阳性, 阴性时取实测拷贝值, 低于灵敏度以下作零拷贝处理. 肝功能检测, 血清ALT测定采用全自动生化分析仪, ALT>666.8 nkat/L视为异常.

统计学处理 计量资料采用χ2检验.

2 结果
2.1 不同乙肝两对半模式患者血清HBV-LP, HBV DNA以及乙肝前S1检出情况比较

相同乙肝两对半模式组中HBV-LP的阳性率与HBV DNA的阳性率经过χ2验证没有显著性差异(P>0.05); 在所有HBsAg阳性患者中乙肝表面抗原大蛋白的阳性率明显高于乙肝前S1的阳性率, 经过χ2验证均有显著性差异(P<0.05); 不同的乙肝两对半模式组中乙肝表面抗原大蛋白的阳性率经过χ2验证组间均有显著性差异(P<0.05, 表1).

表1 不同乙肝模式患者中HBV-LP, HBV DNA与乙肝前S1检测比较.
HBV M模式HBV DNA
HBV-LP
乙肝前S1
n阳性阳性率(%)阳性阳性率(%)阳性阳性率(%)
HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)353497.143394.292262.86
HBsAg(+)HBeAg(+)9777.789100333.33
HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)634571.434876.191422.22
HBsAg(+)HBcAb231043.481147.83417.39
HBsAb(+)HBeAb(+)HBcAb(+)30000026.67
HBsAb(+)HBcAb(+)17000000
合计1779654.2410157.064525.42
2.2 HBeAg阳性和阴性患者中HBV-LP, HBV DNA以及乙肝前S1的检出情况比较

在HBeAg阳性中乙肝表面抗原大蛋白的阳性率明显高于和HBeAg阴性组, 经过χ2验证两者有显著性差异(P<0.05, 表2).

表2 HBeAg阳性和阴性中HBV-LP, HBV DNA以及乙肝前S1的检测比较.
HBV DNA
HBV-LP
乙肝前S1
阳性阳性率(%)阳性阳性率(%)阳性阳性率(%)
44例HBeAg阳性4193.18a4295.45a2556.82
133例HBeAg阴性5541.35a5944.36a2015.04
合计9654.24a10157.06a4225.42
aP<0.05 vs 乙肝前S1组.
2.3 HBV-LP与ALT之间的关系

HBV-LP阳性患者转氨酶(ALT)水平明显高于与HBV-LP阴性患者, 经过t检验有显著性差异(P<0.05, 表3).

表3 HBV-LP与ALT检出的关系.
HBV-LPnALT(nkat/L)
阳性991133.56±716.81a
阴性78516.77±283.39
aP<0.05 vs HBV-LP阴性患者.
3 讨论

酶联免疫法(ELISA)一直是临床上用于乙肝病毒感染的血清检测手段, 传统认为乙肝两对半中HBeAg阳性表明HBV复制活跃、传染性较强[2]. 我们的研究显示, 在44例HBeAg阳性患者中HBV-LP阳性率(95.45%)与HBV DNA的阳性率(93.18%)一致, 经过χ2验证无显著差异; 该组中乙肝前S1的阳性率(56.82%)明显低于HBV-LP和HBV DNA的阳性率. 结果表明, HBV-LP与HBV DNA的检出具有良好的一致性, 能够准确的反映出乙肝患者体内病毒的复制情况, 同时结果还表明HBV-LP的检出由于使用针对构象型前S区的mAb, 因而其检出率明显高于目前临床上使用乙肝前S1指标[6]. 过去临床上认为乙肝患者出现HBeAg阴转是HBV复制减弱、传染性降低和预后良好的象征, 但是我们的研究显示, 在133例HBeAg阴性患者中HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为41.35%和44.16%, 可能是免疫清除不全或是HBV基因前C区变异所致[7], 多为慢性乙肝, 而且此类患者发生肝硬化、肝癌的风险较大. 转氨酶(ALT)是判断肝内炎症活动度的可靠指标, 临床上通常将血清转氨酶水平变化作为乙肝患者病情转归的一个重要指标. 我们的研究显示, HBV-LP阳性的ALT水平明显高于与阴性患者(P<0.05), 说明HBV-LP阳性患者较阴性患者肝组织损伤严重, 这与HBV-LP阳性代表存在HBV复制相符合, 同时国外研究表明, 乙肝表面抗原大蛋白是导致肝细胞病变及凋亡的主要原因[8-9], 这个结果表明, HBV-LP可用于观察临床疗效和估计预后.

目前HBV DNA的检测是HBV复制最直接的指标, 但此方法对实验室条件要求严格, 不易推广, 特别是广大基层医疗单位还难以开展. 乙肝两对半的血清免疫学标志物, 可反映乙肝患者的病情和传染性, 现已作为常规检查项目开展, 不过由于其方法的灵敏度、特异性的限制以及HBV为逃避宿主的免疫反应常发生变异, 导致检测结果的失真. 而使用酶联免疫定量方法检测HBV-LP与HBV DNA的检测有良好一致性, 是反映HBV复制活跃的可靠指标, 可以做为HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的重要标志物, 具有较高的临床应用价值, 适于在广大基层医院开展. 

评论
背景资料

近年来临床将乙肝前S1指标多用于乙肝患者的检测, 但是应用结果表明乙肝前S1指标与HBVDNA的相关性不高.

研发前沿

乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)在乙肝病毒侵入、组装成熟过程中起到非常关键的作用, 与HBVDNA复制水平密切相关, 而且HBV-LP的过量表达是导致肝细胞凋亡以及病变的主要原因.

相关报道

解放军302医院在HBV-LP与HBVDNA的相关性上进行了研究, 浙江湖州中心医院对HBV-LP在抗病毒治疗患者中的检测意义进行了研究.

创新盘点

本研究阐述了HBV-LP反映HBeAg阴性患者病毒复制水平的临床意义.

应用要点

HBV-LP在临床的广泛应用, 可以更加真实的了解患者的病情, 指导治疗.

名词解释

乙肝表面抗原大蛋白: 是乙肝病毒包膜蛋白中的一种, 和病毒的复制密切相关, 由HBV基因中的S, preS1以及preS2基因共同表达.

电编: 张敏 编辑:王晓瑜

1.  骆 抗先. 乙型肝炎基础和临床. 第2版. 北京, 人民卫生出版社. 2001;.  [PubMed]  [DOI]
2.  谢 志贤, 谭 爱国, 何 美懿, 董 莹. 血清中乙型肝炎5项标志表现模式与乙型肝炎病毒-DNA含量的关系. 中华医院感染学杂志. 2002;12:81-83.  [PubMed]  [DOI]
3.  Bruss V, Vieluf K. Functions of the Internal Pre-S Domain of the Large Surface Protein in Hepatitis B Virus Particle Morphogenesis. J Virol. 1995;69:6652-6657.  [PubMed]  [DOI]
4.  Bruss V. Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsid. Virus Res. 2004;106:199-209.  [PubMed]  [DOI]
5.  Lambert C, Mann S, Prange R. Assessment of determinants ffecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins. Journal of General Virology. 2004;85:1221-1225.  [PubMed]  [DOI]
6.  孙 颖, 辛 绍杰, 雷 厉, 侯 俊, 貌 盼勇. 乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义. 世界华人消化杂志. 2006;14:354-357.  [PubMed]  [DOI]
7.  Hamasaki K, Nakata K, Nagayama Y, Ohtsuru A, Daikoku M, Taniguchi K, Tsutsumi T, Sato Y, Kato Y, Nagataki S. Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B. Hepatology. 1994;20:8-14.  [PubMed]  [DOI]
8.  Foo NC, Ahn BY, Ma X, Hyun W, Yen TS. Cellular Vacuolization and Apoptosis Induced by Hepatitis B Virus Large Surface Protein. Hepatology. 2002;36:1400-1407.  [PubMed]  [DOI]
9.  Roingeard P, Sureau C. Ultrastructural analysis of hepatitis B virus in HepG2-transfected cells with special emphasis on subviral filament morphogene-sis. Hepatology. 1998;28:1128-1133.  [PubMed]  [DOI]