临床研究 Open Access
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世界华人消化杂志. 2006-05-08; 14(13): 1305-1308
在线出版日期: 2006-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i13.1305
肝癌经肝动脉栓塞化疗后VEGF和CD44v6表达的意义
李兴睿, 杨志芳, 易继林
李兴睿, 杨志芳, 易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 湖北省武汉市 430030
通讯作者: 李兴睿, 430030, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科. chenwenyyy@163.com
电话: 027-83663818
收稿日期: 2006-02-17
修回日期: 2006-03-10
接受日期: 2006-03-15
在线出版日期: 2006-05-08

目的: 探讨VEGF和CD44v6在肝癌经肝动脉栓塞化疗(TACE) 术后复发和转移中的作用.

方法: 选取经TACE治疗后二期切除的肝癌标本29例, 以同期单纯手术切除的30例标本作为对照, 采用免疫组织化学和图像分析的方法检测VEGF和CD44v6的表达.

结果: TACE治疗组与单纯手术组的VEGF吸光度A值分别为0.149±0.021和0.134±0.018, 前者明显高于后者(P<0.05); TACE治疗组与单纯手术组的CD44v6表达阳性率分别为82.8% 和66.7%, 阳性细胞数分别为112.4±22.3/视野和102.4±21.2/视野, 两者间差异均无显著性(P>0.05).

结论: VEGF可能参与了TACE术后肝癌的复发和转移, 而CD44v6可能并不是TACE术后肝癌复发和转移的主要因素.

关键词: 肝细胞癌; 经肝动脉化疗栓塞术; 血管内皮生长因子; CD44v6
引文著录: 李兴睿, 杨志芳, 易继林. 肝癌经肝动脉栓塞化疗后VEGF和CD44v6表达的意义. 世界华人消化杂志 2006; 14(13): 1305-1308
Expression of CD44v6 and vascular endothelial growth factor in hepatocellular carcinoma after transcatheter hepatic arterial chemoembolization
Xing-Rui Li, Zhi-Fang Yang, Ji-Lin Yi
Xing-Rui Li, Zhi-Fang Yang, Ji-Lin Yi, Department of General Surgery, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China
Correspondence to: Xing-Rui Li, Department of General Surgery, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China. lixingrui@sina.com
Received: February 17, 2006
Revised: March 10, 2006
Accepted: March 15, 2006
Published online: May 8, 2006

AIM: To investigate the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) and CD44v6 in the recurrence and metastasis of hepatocellular carcinoma (HCC) after transcatheter hepatic arterial chemoembolization (TACE).

METHODS: The expression of CD44v6 and VEGF in 29 HCC samples obtained from the patients underwent secondary hepatectomy after TACE was examined by immunohistochemical staining and morphometric analysis. HCC samples (n = 30) obtained from the patients without TACE were used as the control group.

RESULTS: The value of VEGF absorbance in the TACE group was 0.149 ± 0.021, significantly higher than that in the controls (0.134 ± 0.018, P < 0.05). The positive rate of CD44v6 expression was 82.8% and 66.7% in the TACE group and control group, respectively, without significant difference between them (P > 0.05). The numbers of CD44v6 positive cells were also not markedly different between the two groups (112.4 ± 22.3 vs 102.4 ± 21.2, P > 0.05).

CONCLUSION: VEGF may take part in the recurrence and metastasis of HCC after TACE, while CD44v6 may not.

Key Words: Key Words: Hepatocellular carcinoma; Transcatheter hepatic arterial chemoembolization; Vascular endothelial growth factor; CD44v6
0 引言

经导管肝动脉栓塞化疗术(transcatheter hepatic arterial chemoembolization, TACE)是肝癌综合治疗中的一项重要方法. 对于不可切除的肝癌, TACE治疗可有效地延长患者生存期, 部分患者因肿瘤缩小可获得二期手术切除机会. 然而, TACE治疗具有较高的复发率, 接受TACE治疗的患者中, 肝内外转移也明显多见. 迄今为止, TACE术后复发和转移的机制尚不清楚. 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是肿瘤组织中最重要的血管生成因子, 不仅与肿瘤血管发生、增殖有关, 而且直接参与其浸润和转移[1-7]. 此外, 近来研究发现, 黏附分子CD44的一种变异体CD44v6与多种肿瘤的侵袭转移有关[8-13]. 我们采用免疫组织化学方法, 观察TACE治疗后残留肝癌组织中CD44v6和VEGF的表达情况, 探讨CD44v6和VEGF在TACE治疗后肝癌复发和转移中的作用.

1 材料和方法
1.1 材料

我院1990-01/2000-01行TACE治疗后, 接受二期切除术的肝癌患者34例, 成功回访29例(85.3%); 选取同期仅接受手术切除治疗, 并有完整资料的肝癌患者30例(单纯手术组)作为对照. 各组病例均按照全国肝癌防治协会制定的标准或病理诊断为原发性肝癌. 两组年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤结节数目、AFP值、肿瘤包膜有无等临床资料间均无显著性差异. TACE方法采用Seldinger技术, 常规做肠系膜上动脉间接门脉造影及腹腔动脉造影, 再做肿瘤供血动脉选择性和超选择性插管. 经导管注入丝裂霉素(MMC)10-16 mg, 5-氟脲嘧啶(5-FU)1500-2000 mg或顺铂(CDPP)100 mg/m2, 再灌注含药碘化油, 最后用明胶海绵颗粒(8 mm3, 100-300粒)栓塞肝动脉血管近端.

1.2 方法

标本于我院病理科经40 g/L甲醛液固定后, 常规脱水, 石蜡包埋, 分别于癌旁正常组织, 肿瘤区和坏死组织取材切片, 作4 µm连续切片. HE染色并经病理诊断证实. 采用SABC法进行免疫组织化学染色, 兔抗人CD44v6购自北京中山生物技术有限公司, 兔抗人VEGF单克隆抗体及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司, 具体方法按试剂盒说明书操作. VEGF表达以肿瘤细胞及血管内皮细胞胞质内出现棕黄色颗粒为VEGF阳性, 选取阳性细胞密集区域, 在高倍显微镜(×400)下选取4个视野, 应用高清晰度彩色病理图像分析系统(HPIAS-1000)测定平均吸光度值(A), 代表阳性胞质单位面积内VEGF相对含量. CD44v6表达以细胞质及细胞膜呈棕黄色为阳性细胞, 首先于低倍视野下选取阳性细胞较集中的5个区域, 再于200倍视野下计数阳性细胞数并取其平均值.

统计学处理 数据采用SAS软件V6.4进行分析, 数据mean±SD形式表示, 计量数据统计处理采用t检验, 计数数据统计处理采用χ2检验.

2 结果

TACE组5例(17.2%)肿瘤发生完全坏死, 其余24例(82.8%)均为不完全坏死. 镜下可见, 坏死肿瘤为大片凝固性坏死改变, 呈红染无结构坏死物. 坏死肿瘤周边可见残存癌巢, 被纤维隔膜包绕成大小不等的岛状肿瘤结节. 残存的肿瘤细胞有不同程度的变性, 如透明样变、气球样变等. 肿瘤周边有纤维结缔组织包绕, 有大量炎性细胞浸润.

2.1 VEGF在肝癌组织中的表达

VEGF阳性颗粒定位于肿瘤细胞的胞质内. VEGF阳性的肿瘤细胞分布呈异质性, 强阳性染色的肿瘤细胞多位于肿瘤浸润边缘及肿瘤包膜附近. TACE治疗后肿瘤坏死区周围的残留癌巢内可见强阳性的肿瘤细胞分布(图1A). 图像分析显示, TACE治疗后残留癌组织内VEGF的表达明显强于单纯手术组(t = 2.587, P<0.05, 表1).

表1 VEGF和CD44v6在肝癌组织的表达.
分组nVEGF表达值CD44v6阳性例数(%)CD44v6阳性细胞数
单纯手术300.134±0.01820(66.7)102.4±21.2
TACE290.149±0.021a24(82.8)112.4±22.3
aP<0.05, TACE vs 单纯手术.
图1
图1 VEGF和CD44v6在TACE后癌组织的表达. A: VEGF(SP); B: CD44v6(SABC).
2.2 CD44v6在肝癌组织中的表达

肝癌组织内可见CD44v6的强阳性表达, 主要集中于细胞质和细胞膜上. 在TACE治疗后的残留癌中也可见CD44v6的表达(图1B). 30例单纯手术切除组的肝癌组织中, CD44v6阳性者20例, 阳性率为66.7%; 29例TACE治疗后的残留癌中, CD44v6阳性者24例, 阳性率为82.8%, 高于前者, 但两者间无显著性差异. 细胞计数结果发现, TACE治疗后肝癌组织中CD44v6的阳性细胞数为112.4±22.3, 多于单纯手术组的CD44v6阳性细胞数, 但是两者间亦无显著性差异(P>0.05, 表1).

3 讨论

TACE是肝癌综合治疗中的一项重要方法, 一部分不可切除的肝癌患者经TACE治疗后, 获得了二期切除的机会. 然而在20多年的临床应用中, TACE也暴露出了其缺点和局限性. TACE不能根治性治疗肝癌患者, 而且经TACE治疗后, 肝癌具有很高的复发和转移率. 关于TACE治疗后肝癌高复发和转移的机制目前尚不清楚. VEGF是一个Mr为46 000的高度糖基化碱性蛋白, 可由正常细胞及肿瘤细胞产生和分泌[14-17]. 作为肿瘤组织中最主要的血管生成因子, VEGF不仅与肿瘤血管的发生、增殖有关, 而且直接参与其浸润和转移[18-22]. 我们发现, 在肝癌组织内有VEGF的表达, 而且VEGF的表达水平明显高于邻近正常组织, 强阳性染色的肿瘤细胞多位于肿瘤浸润边缘或肿瘤包膜附近, 而且TACE治疗后残留癌巢内VEGF表达明显高于单纯手术组. 残留癌巢高表达VEGF的原因目前尚不清楚, 可能是TACE治疗造成的缺血、缺氧环境以及化疗药物的作用, 杀死了恶性程度较低的肿瘤细胞, 而残留的恶性程度较高的肿瘤细胞表现出更高的VEGF表达状态; 或者缺血、缺氧促进了肿瘤细胞自身分泌更多的VEGF[23-26]. VEGF在TACE治疗后残留癌组织中的高表达可能是引起肝癌高复发和转移的一个重要原因. VEGF的高表达可以促进新生血管的形成, 一方面可促使肿瘤发生转移; 另一方面可使得肿瘤组织无法完全坏死而残留癌巢, 为以后的复发和转移奠定基础.

人类CD44基因定位于11号染色体短臂上,全长约50 kb, 由20个高度保守的外显子组成. 含有变异性拼接外显子的CD44转录子称为CD44v, CD44v6是CD44的一种变异体, 具有v6外显子编码的功能区[27]. 近来研究发现, CD44v6参与了多种肿瘤的转移. 作为一种细胞黏附因子, CD44v6在细胞外基质中与透明质酸结合, 促进细胞浸润和介导细胞迁移[28]; 此外, CD44v6高表达的癌细胞可能获得淋巴细胞的"伪装", 逃避人体免疫系统的识别和杀伤, 产生免疫逃避, 因而更易进入淋巴管, 形成转移[29]. 对肝癌组织的研究发现, 肝癌组织中CD44v6的阳性表达明显高于癌旁组织, 提示CD44v6参与了肝癌的发生[30]. 然而关于CD44v6与TACE术后肝癌复发转移的关系, 尚未见文献报道. 我们发现, 虽然TACE治疗后的肝癌组织中CD44v6表达阳性的例数和细胞数多于未经TACE治疗的肝癌, 但是两者间无显著性差异, 提示CD44v6可能并不是TACE术后肝癌的复发和转移的主要因素, 其表达并不受TACE治疗所造成的缺血、缺氧等因素的影响. 但由于本组样本量不多, 关于CD44v6在TACE术后肝癌复发和转移中的确切作用还需进一步大样本的研究. 

评论
背景资料

经导管肝动脉栓塞化疗术(TACE)是肝癌综合治疗中的一项重要方法. 然而, TACE治疗具有较高的复发率. 迄今为止, TACE术后复发和转移的机制尚不清楚.

创新盘点

本文将VEGF和CD44v6与TACE术后肿瘤转移复发联系起来, 研究其发生机制, 结果证实VEGF可能参与了TACE术后肝癌的复发和转移, 而CD44v6可能并不是TACE术后肝癌复发和转移的主要因素.

应用要点

VEGF可能参与了TACE术后肝癌的复发和转移, 可作为TACE术后肝癌复发转移的检测指标.

同行评价

本文立题依据较好, 创新性强, 研究方法可行, 试验结果可靠, 是一篇学术价值较高的论文.

电编:李琪 编辑:潘伯荣

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