修回日期: 2006-01-12
接受日期: 2006-01-25
在线出版日期: 2006-04-08
目的: 探讨细菌感染对微波行脾部分切除手术后NF-κBP65表达影响及意义.
方法: 日本大耳白兔随机分为两组, 假拟手术组6只与实验组12只，即微波行脾部分切除手术组. 手术后1 mo静脉注射细菌悬浮液，观察48 h动物的生存，测定残留脾脏质量和NF-κBP65表达.
结果: 注射细菌48 h内动物均无死亡. 两组间脾脏质量无显著性差异. 镜下见脾脏残端固化处纤维化. NF-κBP65主要分布在胞浆或胞核内呈棕黄色. 实验组NF-κBP65表达计数指数与假似手术组比较无显著性差异.
结论: 微波对脾脏损伤在短期内可修复, 微波行保脾手术有一定价值.
引文著录: 鞠新华, 张宇, 姜伟国, 夏振龙. 细菌感染对微波行兔保脾术后 NF-κBP65 表达的影响. 世界华人消化杂志 2006; 14(10): 1001-1003
Revised: January 12, 2006
Accepted: January 25, 2006
Published online: April 8, 2006
AIM: To investigate effect and significance of bacterial infection on expression of NF-κBP65 after partial splenectomy of rabbits using microwave coagulation.
METHODS: Japanese white rabbits with large ears were randomly divided into two groups. There were sham group and experiment group,which was alse called partial splenectomy group of rabbits using microwave coagulation. Streptococcus pneumonia suspension was injected into ear veins 1 month after partial splenectomy of rabbits using microwave coagulation and sham operation group. During 48 hours the animal life was observed. The splenic samples weighted and NF-κBP65 count index of expression of residual spleen was detected.
RESULTS: At 48 hours after bacterial injection no rabbit died in two groups. There was no significant difference between splenic qualiyies of two groups. Under microscope the fibrosis was showed in remnant end of spleen coagulated by microwave. NF-κBP65 was mainly stained in cytoplasm or nucleolus. There was no significance difference between NF-κBP65 count index of expression in experiment group and sham group.
CONCLUSION: Splenic injury coagulated by microwave may be restored in short term. Preserved splenic operation using microwave coagulation is a certainly valuable method of operation.
- Citation: Ju XH, Zhang Y, Jiang WG, Xia ZL. Effect of bacterial infection on expression of NF-κBP65 after preserved splenic operation in rabbits using microwave coagulation. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2006; 14(10): 1001-1003
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v14/i10/1001.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v14.i10.1001
脾切除术是外科治疗重要和有效的手段, 常见于外伤性脾破裂、血液系统疾病、造血系统疾病、门静脉高压症引起脾功能亢进和脾脏疾病的治疗[1]. 近年来, 随着对脾功能的深入理解, 脾部分切除术、脾次全切除术、脾裂口缝合术、脾动脉栓塞术和自体脾移植术等保脾手术逐渐受到人们重视[2-4]. 脾部分切除术多见外伤性脾破裂或部分脾良性疾病以及血液、造血系统疾病引起脾功能亢进[5-6]. 脾次全切除术除了适合以上疾病, 部分为门静脉高压症[7-8]. 微波行肝、肾、肺等手术已在临床获得较广泛应用[9-11],然而脾脏手术较少见[12]. 我们在外伤性脾破裂微波行保脾手术的基础上, 开展微波固化行兔脾部分切除术的实验研究. 通过手术后静脉注射细菌检测NF-κBP65表达, 探讨微波保脾手术对脾功能影响及意义.
1.1.1 实验动物与分组: 健康日本大耳白兔18只, 体质量2 100-2 700 g, 雄雌不分, 随机分为2组: 假拟手术组6只与实验组12只, 即微波行脾部分切除手术组. 动物由中国医科大学第二临床学院动物实验中心提供并负责饲养.
1.1.2 试剂、菌株和仪器: NF-κBP65单克隆抗体购自北京中山生物公司, 免疫组化SP、DAB试剂盒购自福建迈新公司. 细菌肺炎链球菌为临床分离株. 仪器为大连理工大学电子工程系研制微波止血机WGZ-2型, 微波频率为2 450 MHz, 采用植入天线, 每次作用时间为20-30 s.
1.2.1 动物实验方法: 手术日晨禁食水, 手术区备皮. 200 g/L乌拉坦( 5 mL/kg) ip麻醉. 皮肤常规无菌消毒, 采用上腹正中切口和无菌手术操作技术. 实验组显露腹腔后结扎、离断拟切除侧脾韧带与血管, 并于脾中下极处行微波固化, 凝固带中间切除部分脾脏. 保留的脾脏约占全脾的2/3. 脾残端固化处大网膜覆盖. 假拟手术组切开腹壁及腹膜后, 再分别缝合腹壁各层组织. 为预防术后感染的发生, 青霉素400 000 U/d im, 连用3 d. 手术1 mo后, 5×107肺炎链球菌悬浮液0.1 mL/kg耳iv, 观察48 h后将动物处死. 切取脾脏标本, 测定质量, 常规用苏木素和伊红(HE)染色, 行病理学检查.
1.2.2 免疫组化检测: 标本经福尔马林固定, 石蜡包埋, 连续切片厚5 mm. 行免疫组化SP法染色. 常规切片脱蜡至水, 单克隆抗体进行抗原修复. 过氧化物孵育和山羊免疫血清孵育后，滴加NF-κBP65一抗, 再分别加相应的二抗, 滴加SP复合物. 经DAB显色后用苏木素稍衬染、脱水、透明、封片. 同时用PBS代替NF-κBP65单克隆抗体染色作空白对照. 实验结果评定: NF-κBP65指数的测定标准为每例切片计数5个高倍视野(×400), 每一视野数100个细胞中NF-κBP65阳性细胞数, 取均值表示计分指数.
统计学处理 采用χ2检验分析. P<0.05为统计学具有显著性差异.
手术1 mo经静脉注射肺炎链球菌48 h, 实验组与假拟手术组均无死亡. 微波行脾部分切除组术后残留的脾脏颜色及血运良好, 断端被网膜包裹. 脾脏质量分别为2.043±0.62 g和2.051±0.46 g, 组间无显著性差异(P>0.05). 显微镜下见微波固化的脾残端呈纤维化. NF-κBP65阳性细胞染色呈棕黄色, 主要分布在胞质或胞核内(图1). NF-κBP65表达计分指数在实验组与假拟手术组分别为21.03±5.76和18.22±3.18, 实验组NF-κBP65表达计分指数略高于假拟手术组, 但无显著性差异(P>0.05).
NF-κBP65是一种多功能转录因子, 在细胞信号传导中参与特异基因的转录调节, 是炎性因子基因表达的关键转录因子之一. 作为具有多项调节作用的蛋白质, 它通过细胞因子、炎性介质、黏附分子等的转录过程控制生物合成. 在各种刺激因素作用下, 激活的 NF-κBP65参与机体的免疫应答、炎症反应、细胞增殖和相关基因凋亡[13-14]. TNF-a、IL-1b等细胞因子、DNA损害和外源性刺激使NF-κBP65激活. 而地塞米松、蛋白酶等能够抑制NF-κBP65活性[15]. 脾脏是细胞因子来源的重要场所. 组织损伤时致炎介质、TNF、IL-1、IL-6等释放, 活化的NF-κBP65发生核内转移,导致淋巴细胞增殖.
脾切除术后脓毒症是切脾手术的一种严重并发症. 最多见的致病菌是肺炎链球菌. 它通过高分子多糖体的夹膜侵袭而致病. 细菌毒素激活巨噬细胞, 使炎性介质释放增加. 脾脏作为机体的免疫器官, 在细菌感染中对内源性介质起调控作用. 脾切除术后循环中的毒素滞留量显著增加, 肝枯否细胞吞噬能力下降, 脾巨噬细胞成为毒素清除的主要器官. 在细菌的刺激作用下, 促进多种免疫细胞的分化、增殖以及细胞因子的释放. 细菌感染机体清除自由基的能力减弱. 脾切除术后组织对介导的炎症反应敏感性增强, 合成和分泌TNF-a水平也升高. 诱发促炎性因子大量产生，过量的TNF-a造成组织的损害. NF-κBP65可调节TNF-a基因转录或 翻译, 阻止脾切除术后细菌毒素的攻击. 有报道, 烧伤后NF-κBP65和脾细胞分属的增殖活性存在差异性调节. NF-κBP65的调节可能与烧伤后脾细胞的增殖变化相关[16]. 我们采用微波固化止血行兔脾部分切除, 微波辐射的热效应使组织产生凝固性坏死, 脾断面的毛细血管形成血栓, 手术止血迅速, 操作简单, 减少了术中和术后脾创面的出血. 此外由于手术保留大部分脾脏, 术后残留脾组织代偿性增生，提高抗感染免疫功能.
本组实验组与假拟手术组细菌注射48 h均无动物死亡. 而我们以前的报告, 在相同实验条件下, 全脾切除组有50%动物死亡[17]. 此外, NF-κBP65表达计分指数在以上两组间无显著性差异, 实验组NF-κBP65表达接近正常对照. 微波固化炎症反应对脾功能有一定损害, NF-κBP65调控使组织细胞增殖与修复. NF-κBP65的低表达说明保脾手术后增强了对肺炎链球菌的耐受力, 减轻了炎性介质的组织损伤. 以上提示, 微波行兔保脾手术在短期可修复脾功能, 是一种有价值的治疗方法.
以前人们缺乏脾功能的了解, 对于外伤性脾破裂多采用全脾切除手术. 随着脾切除术后脓毒症的增加, 脾破裂修补术、脾部分切除术、脾次全切除术、自体脾移植和脾动脉栓塞等保脾手术受到人们的重视.目前, 保脾手术有逐渐替代全脾切除的趋势.
开展腹腔镜手术、血管介入的栓塞以及氩气刀、冷冻技术, 特别是微波固化止血, 在肝脏、肾脏、肺脏等许多领域的应用, 成为人们关注的热点. 通过微波行兔脾部分切除术后细菌感染检测NF-κBP65的表达, 可成为判断与研究脾功能的重要课题.
本研究通过微波行兔脾部分切除手术, 细菌注射后观察和免疫组化检测脾 NF-BP65计数指数表达以及与对照组比较提示, 微波对脾脏损伤在短期内可修复. 从而为微波在保脾手术的应用提供了依据.
微波固化行保脾手术, 手术操作简单、止血迅速可靠、术后并发症少. 除了用于外伤性脾破裂和脾脏良性肿瘤等疾病外, 也可应用于血液、造血系统以及门静脉高压症等脾功能亢进等疾病的治疗, 具有良好的临床应用前景.
脾切除术后脓毒症(postsplenec-tomy sepsis syn-drome):早在上世纪初, 人们发现脾切除术后, 易发生肺炎链球菌败血症, 特别是儿童发生率较高. 因其发病突然，病情凶险, 如不及时治疗, 常导致死亡. 死亡率高达50%-70%. 1969年, Diamond将由于创伤行脾切除术后偶然发生严重败血症综合征的特征称为脾切除术后暴发性感染, 也有人称为脾切除术后脓毒症.
电编:李琪 编辑:王瑾晖
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