胃淋巴瘤组织Survivin表达与幽门螺杆菌感染的关系

摘要

目的: 探讨Survivin基因在胃淋巴瘤中的表达及其与幽门螺杆菌(H. pylori)感染的关系.

方法: 用免疫组化法检测30例胃淋巴瘤和30例正常胃组织Survivin的表达, 同时用碱性品红染色法检测30例胃淋巴瘤及30例对照组H. pylori感染情况.

结果: 30例胃淋巴瘤中14例Survivin表达阳性, 而正常胃组织均无表达(46.67% vs 0%, P = 0.0002). Survivin表达与淋巴瘤分化程度、淋巴结转移及预后相关. 胃淋巴瘤组织中H. pylori阳性检出率11例, 正常胃组织7例(36.7% vs 23.33%, P = 0.26). 胃MALT型淋巴瘤Survivin阳性表达与H. pylori感染有显著相关性(r =0.644, P = 0.04).

结论: Survivin基因在胃淋巴瘤中表达上调, 而且与分化程度、淋巴结转移及预后有关. H. pylori感染与胃MALT型淋巴瘤和Survivin表达有关.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: November 23, 2004
Revised: December 9, 2004
Accepted: December 16, 2004
Published online: February 15, 2005

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

Survivin是1997年由Ambrosini et al[1]用效应细胞蛋白酶受体cDNA在人类基因库的杂交筛选中分离出来的, 是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成员. 胃淋巴瘤是淋巴结外恶性淋巴瘤较多见的一类淋巴瘤, 以往报道胃MALT淋巴瘤与幽门螺杆菌(H. pylori)感染相关[2], 但并未明确. 我们采用免疫组化法检测30例胃淋巴瘤组织Survivin表达, 并通过检测H. pylori感染情况, 探讨Survivin基因在胃淋巴瘤发病机制中的作用以及与H. pylori 感染的关系.

1 材料和方法

1.1 材料

收集胃淋巴瘤30例, 均为1998/2003年右江民族医学院第一附属医院及第二附属医院病理科存档蜡块, 男性19例, 女性11例, 年龄38-72岁, 平均年龄58岁, 所有病例诊断前均未治疗. 参照欧洲血液病理学会关于原发性胃肠道淋巴瘤的分类标准[2]分类, 并行白细胞共同抗原(LCA)、CD45RO、CD20、CD3免疫组化染色, 30例胃淋巴瘤均为B细胞性淋巴瘤, 其中低度恶性胃淋巴瘤16例(胃黏膜相关淋巴样组织型(MALT型)低度恶性淋巴瘤11例, 中心细胞性淋巴瘤2例, 套细胞性淋巴瘤3例), 高度恶性胃淋巴瘤14例(MALT型高度恶性淋巴瘤7例, 间变性大细胞性淋巴瘤4例, 免疫母细胞性淋巴瘤3例). 按照胃肠道恶性淋巴瘤临床分期标准[2], 30例胃淋巴瘤分期: Ⅰ期12例, Ⅱ期5例, Ⅲ期7例, Ⅳ期6例. 本组实验中有淋巴结转移者18例, 无淋巴结转移者12例. 此外, 取30例胃非恶性肿瘤的正常胃黏膜组织作为对照组. 标本均经40 g/L甲醛固定, 常规石蜡包埋.

1.2 方法

1.2.1 免疫组化方法检测Survivin表达: Elivision试剂盒购自福州迈新公司, 第一抗体为兔抗人Survivin多克隆抗体. 主要实验步骤: 切片、脱蜡、水化后, 高温高压修复1次, 时间90 s, 滴加H₂O₂消除切片中过氧化物酶对自身阳性的干扰, 滴加一抗, 37 ℃水浴1 h, 滴加二抗, 37 ℃水浴30 min, DAB显色, 苏木精复染, 低度酒精脱水, 干燥, 二甲苯透明封固. 用已知的乳腺癌切片作为阳性对照, 用PBS替代一抗作为阴性对照.

1.2.2 碱性品红染色法检测H. pylori: 主要实验步骤: 切片、脱蜡、水化后, 将切片置入0.25%碱性品红液5 min, 蒸馏水冲洗1次, 950 mL/L乙醇脱水, 最后二甲苯透明和中性树胶封固.

1.2.3 结果判定: 由病理科医师负责结果判定. Survivin阳性染色在胞质或胞核均有表达, 其中主要在胞质中表达, 为淡黄至黄棕色颗粒. Survivin染色结果按阳性细胞所占百分率分为: 阳性率<10%, 为阴性(-); 10-24%, 为弱阳性(+); 25-50%, 为阳性(++); >50%, 为强阳性(+++). 用碱性品红染色法检测出的H. pylori呈红色, 凡胃组织切片中找到H. pylori, 则认为H. pylori检测阳性.

统计学处理 运用SPSS11.5统计软件进行数据处理, 率的比较用χ²检验或精确概率法检验, 等级相关分析用Spearman方法检验, P<0.05为差异有显著性.

2 结果

2.1 Survivin表达

30例胃淋巴瘤中, 14例Survivin表达阳性(图1), 30例正常对照标本均无阳性表达 (46.7% vs 0%, P = 0.0 002<0.01, A = 36.03, 95% CI: 1.995-650.56). 低度恶性组Survivin表达2例, 而高度恶性组中表达12例(12.5% vs 85.71%, P =0.00 008<0.01, A = 42, 95%CI: 5.112-345.103). 临床分期: Ⅲ+Ⅵ期13例, Survivin表达阳性10例; Ⅰ+Ⅱ期17例, Survivin表达阳性4例, Ⅲ+Ⅵ期与Ⅰ+Ⅱ期患者阳性率差异有显著性(76.9% vs 25.5%, P = 0.009<0.01, A = 10.833, 95% CI: 1.96-59.83). 淋巴结转移情况: 有淋巴结转移者18例, Survivin表达阳性12例; 无淋巴结转移者12例, Survivin表达阳性2例(66.7% vs16.67%, P = 0.011<0.05, A = 10, 95% CI: 1.641-60.921). 胃MALT淋巴瘤组与非MALT淋巴瘤组Survivin表达无显著性差别(38.89% vs 58.33%, P = 0.457).

图1 胃淋巴瘤Survivin表达, Elivision×400.

2.2 H. pylori检测

30例胃淋巴瘤中H. pylori检测阳性(图2)共11例, 对照组阳性7例, 两组对比差异无显著性(36.7% vs23.33%, P = 0.26, A = 1.902, 95% CI: 0.617-5.863). 胃MALT淋巴瘤组18例, H. pylori检出10例; 非MALT淋巴瘤组12例, H. pylori检出1例, 两组H. pylori感染率对比有显著性差别(55.6% vs 8.3%, P = 0.018<0.05, A = 13.75, 95% CI: 1.45-130.24).

图2 胃淋巴瘤H. pylori感染(箭头指向为H. pylori ), 碱性品红染色×400.

2.3 Survivin表达与H. pylori的关系

30例胃淋巴瘤同时出现Survivin表达及H. pylori感染者8例(其中MALT型占有7例), 同时阴性者13例, 胃淋巴瘤Survivin表达与H. pylori感染有显著相关性(ｒ= 0.404, P = 0.027<0.05). 胃MALT淋巴瘤同时出现Survivin表达及H. pylori感染者7例, 非胃MALT淋巴瘤同时出现者只有1例, 胃MALT型淋巴瘤Survivin阳性表达与H. pylori 感染有显著相关性(ｒ= 0.691, P = 0.001<0.01).

3 讨论

人体细胞凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein, hIAP)是抑制细胞凋亡的重要成分, 其作用大于Bcl-2家族[3], 在肿瘤的发病机制中起重要作用. Survivin是hIAP家族的新成员, 由42个氨基酸构成, 含有一个N末端的杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列区. 近来认为Survivin基因的抗凋亡功能在于直接抑制了半胱氨酸蛋白酶caspase-3和caspase-7的活性. Survivin只是在胚胎组织中表达, 成人分化组织则表达下降或不表达. 在人体各种肿瘤中, Survivin在肿瘤的阳性表达率为34.5-92%, 而且Survivin阳性表达已提示肿瘤预后不良[4-8]. 我们的研究发现, 胃B细胞淋巴瘤组织中Survivin基因表达阳性率为46.67%, 而正常胃黏膜组织中未见表达, 说明Survivin基因在胃淋巴瘤组织中表达上调, 这与Ambrosini et al[1], Li et al[9]对淋巴瘤Survivin阳性表达率的检测结果一致. 本实验Survivin的表达上调提示Survivin基因可能通过抑制胃淋巴瘤细胞凋亡, 对胃淋巴瘤的发生发展起重要作用. 此外, 我们的实验显示高度恶性胃淋巴瘤Survivin基因表达明显高于低度恶性胃淋巴瘤, 这一结果与Mazur et al[10]一致, 同时Survivin基因表达与胃淋巴瘤组织的分化程度、临床分期及淋巴结转移有明显相关性, 说明Survivin基因的表达预示胃淋巴瘤有较高的侵袭性和预后不良. 因此, 检测Survivin基因表达对胃淋巴瘤的临床分型以及预后判断具有一定的价值.

我们检测胃淋巴瘤组织H. pylori感染率, 30例胃淋巴瘤的总检出率为36.67%, 其中MALT型占55.56%, 这与许良中[2]的研究试验结果(58%)相接近, 而胃MALT型淋巴瘤组与非MALT型组H. pylori感染率对比, 差异有显著性, 这一结果与Yin et al[11]报道的相符, 说明H. pylori感染与胃MALT型淋巴瘤的发生、发展有密切联系, 此结果为指导胃MALT型淋巴瘤抗H. pylori治疗提供了一定的理论依据. 我们的研究还发现, 胃MALT型淋巴瘤Survivin的表达与H. pylori 感染呈显著相关, 提示H. pylori感染除了在胃MALT型淋巴瘤的发病可能起到促进的作用以外, 同时也可能进一步抑制了胃淋巴瘤细胞的凋亡过程. Mera[12]的研究发现, 凡Survivin表达阳性且H. pylori检测阳性的胃MALT型患者, 给予H. pylori根治性治疗以后, 胃淋巴瘤并未获得满意的治疗效果, 而Survivin阴性但H. pylori阳性的胃MALT型淋巴瘤, 单纯给予H. pylori根治性治疗后取得满意的疗效, 说明H. pylori感染也可能只是MALT型胃淋巴瘤的诱因或启动因素, Survivin表达及其通路对胃淋巴瘤的发生与发展起到重要作用. 我们的研究显示正常组无Survivin表达, 但H. pylori感染率达23.33%, 进一步提示Survivin与淋巴瘤有密切关系, 而H. pylori仅是伴随关系, 对肿瘤起到促进作用. 我们还发现, 非MALT型胃淋巴瘤与H. pylori感染的关系不大, 这与目前国内外的报道的结果一致(Burkitt淋巴瘤除外[13-15]). 总之, 我们的研究提示Survivin在胃淋巴瘤组织表达上调, 而且与分化程度、淋巴结转移及预后有关. 胃MALT淋巴瘤Survivin表达与组织H. pylori感染有关, 其作用尚待进一步研究.

备注

编辑:张海宁

参考文献

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