修回日期: 2004-12-29
接受日期: 2005-01-13
在线出版日期: 2005-02-15
目的: 分析幽门螺杆菌(H. pylori)感染对胃黏膜癌变过程中胃泌素及受体CCK-BR基因转录和蛋白表达的影响, 探讨H pylor在胃癌发生中的作用.
方法: 采用快速尿素酶试验、Giemsa染色及Warthin-Starry银染色检测H. pylori; 应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测萎缩性胃炎51例, 18例肠上皮化生18例, 异型增生15例和胃癌组织37例中的胃泌素及受体CCK-BR蛋白和mRNA表达情况.
结果: 胃泌素mRNA和蛋白在H. pylori阳性的萎缩性胃炎中的表达显著低于H. pylori阴性的萎缩性胃炎(0.32±0.09 vs0.51±0.12, 26.79±3.61 vs 32.80±2.24, P <0.01), CCK-BR mRNA在H. pylori阳性的萎缩性胃炎、肠化生、异型增生及胃癌中的表达与H. pylori阴性组比较无明显变化.
结论: H. pylori感染可以抑制萎缩性胃炎组织中的胃泌素mRNA和蛋白表达, 这可能是H. pylori感染导致慢性胃炎的重要机制之一. H. pylori感染在胃癌发生过程中, 主要作用于胃癌发生的早期阶段-萎缩性胃炎, 可能起着启动因子的作用.
引文著录: 唐卓斌, 唐海燕, 刘为纹. 幽门螺杆菌感染对胃癌及其癌前病变组织中胃泌素和CCK-B receptor表达的影响. 世界华人消化杂志 2005; 13(4): 551-552
Revised: December 29, 2004
Accepted: January 13, 2005
Published online: February 15, 2005
N/A
- Citation: N/A. N/A. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005; 13(4): 551-552
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v13/i4/551.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v13.i4.551
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)已被列为Ⅰ类致癌因子[1], 是慢性胃炎、胃癌的主要病因, 但其确切的致病机制尚不完全清楚. 胃癌的发生与胃泌素(gastrin)和cholecystokinin-B receptor(CCK-BR)基因有关[2-3].H. pylori感染对胃黏膜癌变过程中胃泌素及CCK-BR表达影响的研究少见[4]. 为此, 我们采用免疫组织化学染色及RT-PCR方法研究H. pylori感染对胃黏膜癌变过程中胃泌素及其受体CCK-BR基因转录和蛋白表达的影响, 并分析其在胃癌发生过程中的意义.
1998/1999年胃镜活检标本及胃癌手术切除新鲜标本共121例, 含慢性萎缩性胃炎51例, 肠上皮化生18例, 异型增生15例, 胃癌37例. 胃镜活检标本均取自胃窦部, 手术标本取自于行胃大部切除根治术的胃癌患者. 胃癌患者在手术前均未接受化放疗或免疫治疗. 所有标本均经HE染色病理诊断证实. 兔抗人胃泌素多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品, 即用型免疫组化试剂盒(Kit 9709)为迈新公司产品. 总RNA提取试剂盒(TripureTM Isolation Reagent)为德国Boehringer Mannheim(B.M)公司产品, RT-PCR检测试剂盒(Access RT-PCR system, A1250)为美国Promega公司产品, DNA marker 为上海华美公司产品, 胃泌素引物序列: F: 5' CAGCGACTATGTGTGTATGT 3' R: 5' TTCTTGGACGGGTCTGCCAC 3' 产物长度221 bp. CCK-BR引物序列: F: 5' CTCTCGCGAGCTCTACTTAG 3' R: 5' ACGATCACCAGCAACATTCG 3' 产物长度294 bp. 看家基因(GAPDH)引物序列: F: 5' CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA 3' R: 5' TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCAC 3' 产物长度598 bp. 所有引物均由上海Sangon 公司合成, PAGE纯化.
所有病例均进行快速尿素酶试验、Giemsa染色及Warthin-Starry银染色. 尿素酶试验均阳性, Giemsa染色和Warthin-Starry银染色两项中至少一项阳性者判为H. pylori感染阳性; 三项检查均为阴性者判为H. pylori感染阴性. 免疫组化染色采用SP法, 染色程序按SP法操作常规进行. 抗体以1:50稀释. 最后常规DAB显色, 苏木素复染、脱水、透明、封固. 以PBS代替一抗为阴性对照, 用已知gastrin蛋白阳性的正常胃组织为阳性对照. 光镜下观察5个以上高倍视野, 计数500个细胞中gasrin染色阳性细胞数, 结果以均数±标准差(mean±SD)表示. 胃组织总RNA抽提严格按照试剂盒说明书进行, 并行甲醛变性胶电泳, DU640紫外分光光度仪测A值, 以确定完整性及其含量. 反应体系如下: 5×Buffer 5 mL, MgSO4 1 mL, dNTP 0.5 mL, Primer mix 1.5 mL, AMV 0.5 mL, Tf1 0.5 mL, 模板RNA 1 mL, 加灭菌水至终体积25 mL. 在PCR扩增仪(Perkin Elmer 480)上48 ℃ 45 min将RNA逆转录成cDNA, 然后94 ℃预变性2 min, 均扩增35个循环, 反应条件为94 ℃变性30 s, 58 ℃退火40 s, 68 ℃延伸1 min, 最后68 ℃延伸7 min. 取目的基因5 mL和各自相应的GAPDH的PCR产物5 mL在15 g/L琼脂糖凝胶上进行电泳. 电泳结果经Gel Doc 100型成像仪输入电脑, 应用四星SX-100图像分析软件(上海四星生物技术实业有限公司产品), 对条带进行吸光度峰值下面积积分, 各个目的基因与其相应的GAPDH积分之比, 即为该目的基因mRNA相对水平.
统计学处理 所有数据均采用SPSS10.0统计软件进行t检验. P<0.05为有统计学意义.
在51例萎缩性胃炎组织中, H. pylori阳性41例, H. pylori阴性10例, H. pylori感染率为80.4%.18例肠化生组织中, H. pylori阳性11例, H. pylori阴性7例, H. pylori感染率为61.1%.15例异型增生组织中, H. pylori阳性9例, H. pylori阴性6例, H. pylori感染率为60.0%. 37例胃癌组织中, H. pylori阳性23例, H. pylori阴性14例, H. pylori感染率为62.2%.萎缩性胃炎、肠化生、异型增生和胃癌组织中H. pylori感染率均无显著性差异. 胃泌素蛋白阳性反应物质呈棕黄色, 位于细胞内. 胃泌素基因在不同胃黏膜病变中有不同程度的表达. H. pylori阳性组萎缩性胃炎组织中的gastrin mRNA和蛋白表达显著低于H. pylori阴性组(P<0.01), H. pylori阳性组肠化生、异型增生和胃癌组织中的gastrin mRNA和蛋白表达与H. pylori阴性组比较均无显著性差异(表1).CCK-BR mRNA在H. pylori阳性的萎缩性胃炎、肠化生、异型增生及胃癌组织中的表达与H. pylori阴性组比较无明显变化(表1).
| 分组 | H. pylori (-) | H. pylori (+) | H. pylori (-) | H. pylori (+) | H. pylori (-) | H. pylori (+) | ||||||
| n | Gastrin蛋白 | n | Gastrin蛋白 | n | Gastrin mRNA | n | Gastrin mRNA | n | CCK-BR mRNA | n | CCK-BR mRNA | |
| 萎缩性胃炎 | 10 | 32.80±2.24 | 41 | 26.79±3.61b | 10 | 32.80±2.24 | 41 | 26.79±3.61b | 10 | 32.80±2.24 | 41 | 26.79±3.61 |
| 肠化生 | 7 | 24.00±2.50 | 11 | 25.20±2.20 | 7 | 24.00±2.50 | 11 | 25.20±2.20 | 7 | 24.00±2.50 | 11 | 25.20±2.20 |
| 异型增生 | 6 | 21.50±2.00 | 9 | 20.22±2.47 | 6 | 21.50±2.00 | 9 | 20.22±2.47 | 6 | 21.50±2.00 | 9 | 20.22±2.47 |
| 胃癌 | 14 | 39.21±2.96 | 23 | 40.90±3.05 | 14 | 39.21±2.96 | 23 | 40.90±3.05 | 14 | 39.21±2.96 | 23 | 40.90±3.05 |
在胃黏膜癌变过程中, H. pylori的毒素和有毒性作用的酶以及H. pylori诱导的黏膜炎症反应均能造成胃黏膜屏障的损伤, 使胃上皮细胞的不稳定性增加, 从而增加患胃癌的危险性[5-6]. 但H. pylori致胃癌的确切发病机制尚不完全清楚. 胃癌的发生与gastrin和CCK-BR基因有关[2-3].H. pylori感染是否通过影响gastrin及其受体CCK-BR基因的表达参与胃癌的发生和发展尚不清楚. 因此, 我们对胃癌前病变及胃癌组织中H. pylori感染与gastrin及其受体CCK-BR基因的关系进行了研究. 研究发现gastrin mRNA和蛋白在H. pylori阳性的萎缩性胃炎中的表达显著低于H. pylori阴性组. 而gastrin mRNA和蛋白在H. pylori阳性的肠化生、异型增生和胃癌中的表达与H. pylori阴性组比较无明显变化. CCK-BR mRNA在H. pylori阳性的胃癌前病变和胃癌组织中的表达与H. pylori阴性组比较无明显变化. 这种变化规律表明, H. pylori只在胃黏膜癌变的早期阶段-萎缩性胃炎, 抑制gastrin mRNA和蛋白表达, 而对胃黏膜癌变过程中的胃泌素受体CCK-BR mRNA表达无明显作用. H. pylori感染可能通过抑制gastrin mRNA和蛋白表达, 使gastrin对胃黏膜和壁细胞的营养作用减弱, 从而导致腺体萎缩加重, 泌酸功能下降, 形成恶性循环, 从而增加胃癌发生的危险性. Kuipers et al[7]发现长期的H. pylori感染会导致萎缩和肠化生的发生, 即肠化生和黏膜萎缩病变以在H. pylori阳性者多见, 提示H. pylori感染在胃癌发生的早、中期起着促使黏膜固有腺体萎缩、上皮肠化, 继而发生上皮异型增生的启动作用. 这与我们的研究结果基本一致.
我们的研究表明H. pylori感染可以抑制萎缩性胃炎组织中的胃泌素mRNA和蛋白表达, 这可能是H. pylori感染导致慢性胃炎的重要机制之一. H. pylori感染在胃癌发生过程中, 主要作用于胃癌发生的早期阶段-萎缩性胃炎, 可能起着启动因子的作用.
编辑:潘伯荣 审读:张海宁
| 1. | Kuipers EJ, Meuwissen SG. Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis. Scand J Gastroenterol Suppl. 1996;218:103-105. [PubMed] [DOI] |
| 2. | Okada N, Kubota A, Imamura T, Suwa H, Kawaguchi Y, Ohshio G, Seino Y, Imamura M. Evaluation of cholecystokinin,gastrin, CCK-A receptor, and CCK-B/gastrin receptor gene expressions in gastric cancer. Cancer Lett. 1996;106:257-262. [PubMed] [DOI] |
| 4. | Konturek PC, Hartwich A, Zuchowicz M, Labza H, Pierzchalski P, Karczewska E, Bielanski W, Hahn EG, Konturek SJ. Helicobacter pylori, gastrin and cyclooxygenases in gastric cancer. J Physiol Pharmacol. 2000;51:737-749. [PubMed] |