临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2005-09-28; 13(18): 2278-2281
在线出版日期: 2005-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i18.2278
全直肠系膜切除术切缘血管内皮生长因子检测的临床意义
战学雷, 田素礼
战学雷, 田素礼, 哈尔滨医科大学附属第二医院普外三科 黑龙江省哈尔滨市 150086
通讯作者: 战学雷, 150086, 黑龙江省哈尔滨市学府路246号, 哈尔滨医科大学附属第二医院普外三科. zhanxuelei@126.com
电话: 0451-86605575
收稿日期: 2005-05-28
修回日期: 2005-06-07
接受日期: 2005-06-13
在线出版日期: 2005-09-28

目的: 探讨血管内皮生长因子(VEGF)在直肠癌及其切缘的表达及其临床意义.

方法: 取实施TME的60例直肠癌患者直肠癌组织(Ⅰ)、直肠系膜远端切缘(Ⅱ)、直肠系膜周围切缘(Ⅲ)、盆筋膜壁层(Ⅳ)病理标本, 采用免疫组化SP法对标本进行VEGF检测; 并回顾性分析临床病理学资料.

结果: 直肠癌组织中VEGF高度表达(54/60), 肿瘤相对的盆筋膜脏层(直肠系膜周围切缘)中有VEGF存在(9/60), 在直肠系膜远端切缘及盆筋膜壁层标本中未见VEGF表达. VEGF在直肠癌组织中的表达有高度特异性. VEGF表达与直肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05或P<0.01).

结论: VEGF在直肠癌组织中高度表达, 直肠远端系膜切缘及直肠系膜周围切缘不表达或表达为弱阳性.

关键词: 直肠癌; 直肠系膜远端切缘; 直肠系膜周围切缘; 盆筋膜壁层; 全直肠系膜切除术; 血管内皮生长因子
引文著录: 战学雷, 田素礼. 全直肠系膜切除术切缘血管内皮生长因子检测的临床意义. 世界华人消化杂志 2005; 13(18): 2278-2281
Clinical significance of detection for vascular endothelial growth factor in resection margin following total mesorectal excision
Xue-Lei Zhan, Su-Li Tian
Xue-Lei Zhan, Su-Li Tian, the Third Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China
Correspondence to: Xue-Lei Zhan, Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China. zhanxuelei@126.com
Received: May 28, 2005
Revised: June 7, 2005
Accepted: June 13, 2005
Published online: September 28, 2005

AIM: To investigate the expression and its significance of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the resection margin following total mesorectal excision (TME) for human rectal cancer.

METHODS: VEGF was detected in the tissue specimens of cancer, distal mesorectal margin (DMM), circumferential resection margin (CRM) and outer pelvic fascia from 60 rectal cancer patients received TME. The pathological data were retrospectively analyzed.

RESULTS: VEGF expression was significantly higher in the tissues of rectal cancer than that in the normal tissues (54/60 vs2/20, P < 0.001). VEGF was also expressed in tissues of CRM (9/60). However, no VEGF expression was detected in the tissues of DMM and outer pelvic fascia. VEGF expression was closely related with the differentiation degree, Dukes staging and lymph node metastasis (P < 0.05 or P < 0.01).

CONCLUSION: VEGF is highly expressed in tissues of rectal cancer, and negatively or weakly positively expressed in DMM and CRM.

Key Words: Rectal cancer; Distal mesorectal margin; Circumferential resection margin; Outer pelvic fascia; Total mesorectal excision; Vascular endothelial growth factor
0 引言

包括直肠癌在内的实体肿瘤的生长与转移依赖血管新生的理论已被大量实验和临床研究证实, 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)作为最重要的促血管生成因子, 在肿瘤发生、发展中起重要作用[1-4]. 全直肠系膜切除术(total mesorectal excision,TME)已成为一种标准的直肠癌根治技术, 已被越来越多的外科医生应用于临床[5-7]. 国外学者的研究表明, VEGF在直肠癌组织中、癌组织侵袭前缘以及微小转移灶中的表达比率可以作为直肠癌预后的一种独立、敏感和有效的标志物[8-12]. 我们拟通过免疫组化方法对TME手术后系膜切缘VEGF的检测, 为证实TME技术在直肠癌治疗中的价值提供分子水平的依据.

1 材料和方法
1.1 材料

收集本院2004-01/2005-03行TME的60例直肠癌患者的病理标本, 术前未接受过抗肿瘤治疗. 男22例, 女38例, 平均年龄34-78岁. 所有病例均经病理诊断证实. 其中溃疡型33例(55.0%), 肿块型4例(6.7%), 浸润型26例(38.3%); 腺瘤癌变3例(5.0%), 高分化腺癌18例(30.0%), 中、低分化腺癌23例(38.3%), 黏液腺癌13例(21.7%), 印戒细胞癌3例(5.0%).Dukes A期3例(5.0%), B期27例(45.0%), C期28例(46.7%), D期2例(3.3%); 每例分别于直肠癌组织(Ⅰ)、直肠系膜远端切缘(Ⅱ)、直肠系膜周围切缘(Ⅲ)、盆筋膜壁层(Ⅳ)取病理标本(大小约1 cm×1 cm×1 cm)作为试验组; 另选取20例直肠腺瘤病例的正常肠组织(Ⅰ')及正常结肠系膜(Ⅱ')作阴性对照组. 标本置于40 g/L甲醛固定液, 常规石蜡包埋, 连续切片2张, 4 µm厚连续切片. 抗VEGF和UltraSensitiveTM S-P超敏试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司.

1.2 方法

进行常规HE染色组织学分析和VEGF免疫组化S-P法检测. VEGF采用0.01 mol/L(pH6.0)柠檬酸盐缓冲液高温、高压抗原修复, 检测时每批染色均设阴性对照(以PBS代替一抗). VEGF阳性为细胞质或细胞膜染色呈棕黄色, 在显微镜下(×400)计数至少5个随机视野, 取平均值. 阳性细胞数<10%为(-), 11-25%为(+), 26-50%为(++), ≥51%为(+++). 同时, 收集该组患者的临床病理资料, 包括患者的年龄、性别. 肿瘤的部位、类型、分化程度、分期、有无淋巴结转移以及远处转移等进行回顾性分析.

统计学处理 采用SPSS10.0统计分析软件包处理, 数据统计采用χ2检验, P<0.05有统计学意义.

2 结果
2.1 VEGF在不同组织中的表达情况

试验组直肠癌组织(Ⅰ)标本VEGF染色为阳性, 其余标本染色为阴性或弱阳性; 对照组各个标本染色均为阴性或弱阳性. VEGF在癌组织中的表达与对照组组织中的表达存在显著差异(P<0.05, 表1).

表1 VEGF的表达情况.
分组VEGF表达强度
-++++++
试验组Ⅰ615318
Ⅱ60000
Ⅲ51900
Ⅳ60000
对照组Ⅰ'53700
Ⅱ'60000
2.2 VEGF与临床病理指标的关系

经χ2检验VEGF表达与直肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05或P<0.01). 低分化腺癌VEGF阳性率高于高分化腺癌(P<0.01); Dukes分期的C和D期VEGF阳性率(93.3%)明显高于A和B期(43.3%); 有淋巴结转移的病例VEGF阳性率(93.8%)显著高于无淋巴结转移病例(85.7%). 但是VEGF表达与患者年龄、性别、浸润深度以及远处器官转移不相关(P>0.05, 表2).

表2 直肠癌组织VEGF表达与临床病理指标的关系.
nVEGF表达强度
-≥+
性别
男22220
女38434
年龄(岁)
<5016115
≥5044539
肿瘤大小
<5 cm23320
≥5 cm37324
肿瘤类型
肿块型404
溃疡型33429
浸润型26224
分化程度
腺瘤癌变330
高分化腺癌18216
中、低分化腺癌23122
黏液腺癌13013
印戒细胞癌303
浸润深度
肌层27324
全层33330
淋巴结转移
无28424
有32230
远处转移
无59653
有101
Dukes分期
A+B30426
C+D30228
3 讨论

直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一, 约占大肠癌的60%, 近年来发病率呈明显上升的趋势[13]. 手术根治性切除仍是直肠癌的主要治疗方法. Heald et al[14-16]提出切除标本的直肠系膜完整无撕裂, 在肉眼及镜下无切缘累及(circumference margin involvement,CMI)是判断根治手术是否成功的重要因素. TME的彻底与否须经病理医生严格检查后判定."彻底的"TME须做到直肠远端系膜边缘(distal mesorectal margin, DMM)和直肠系膜周围切除边缘(circumferential resection margin, CRM)阴性. 直肠系膜切除不足, CRM (+)常导致局部复发. DMM(+)及CRM(+)是肿瘤进展的预示因素. 目前病理的"R"分级已取代传统的外科医生根据手术判定所谓的"治愈切除"的概念. 直肠癌手术R0代表直肠系膜完整切除, 且CRM(-)及DMM(-); R1为镜下播散, 有癌残留; R2为肉眼播散, 有癌残留. 理想的TME应做到R0, 即直肠系膜的完整切除并且CRM(-)及DMM(-). 但是"肉眼及镜下"的观察毕竟在一定程度上对发现微小转移灶有相当局限性[17,18]. 肿瘤的浸润和转移是肿瘤瘤细胞与细胞外基质(ECM)相互作用的结果[19,20], 此过程远远早于肉眼和常规病理切片检查所见[21,22]. 肿瘤及其微小转移癌巢基质所分泌的VEGF不仅具有血管相和淋巴相作用, 还可以通过降低同质性黏附作用使肿瘤细胞容易从瘤体脱落, 并与基质的胶原纤维黏附, 有利于肿瘤细胞的运动和转移灶形成[23-25]. 而业已证实, VEGF可以通过简单、廉价的免疫组化法检出[26]. 本试验显示, VEGF在肿瘤及其累及区域表达为阳性或强阳性, 在正常组织中不表达或为弱阳性; VEGF表达强度与直肠癌的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移密切相关, 但与患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位、浸润深度以及远处器官转移没有明显相关性. 我们通过对直肠癌组织及其周围组织的VEGF检测, 证明直肠癌存在着局部的累及[27,28]. 直肠系膜远端切缘和直肠系膜周围切缘不仅在镜下未见癌细胞, 实现了R0[29], 而且在分子水平上通过VEGF的表达证明了CRM(-)及DMM(-). 由此在分子水平论证了TME在直肠癌治疗中的价值. 与既往的方法相比, 本试验快捷、检出率高, 更能说明直肠癌存在局部病变, TME彻底切除了直肠癌的局部病变. 通过精确取材、减少试验步骤, 降低了假阴性和假阳性的发生几率, 提高了试验的准确性.

然而, 在本试验中, 我们观察到, 有9例标本直肠系膜周围切缘常规病理检查为阴性, 而采用免疫组化S-P法检测VEGF时结果却为阳性. 这9例病例究竟是假阳性还是癌巢残留或仅表明其恶性程度更高, 尚需要更进一步的研究.

电编:张勇 编辑:潘伯荣 审读:张海宁

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