热休克蛋白-抗原肽复合物疫苗对肝癌术后患者细胞免疫功能的影响

摘要

目的: 探讨热休克蛋白(HSP)-抗原肽复合物疫苗对肝癌术后患者细胞免疫功能的影响.

方法: 回顾性分析57例应用HSP疫苗的原发性肝癌患者, 并检测治疗前后T细胞亚群、NK细胞活性和血清白介素(IL)-2受体水平的变化, 并与对照组比较.

结果: 治疗组术后3 mo CD₃⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺水平分别为62.8±12.4, 46.5±11.2, 0.61±0.17与术前和对照组比较有显著性差异(P<0.05), NK细胞活性治疗后升高41.3±7.1, 较治疗前明显升高(P<0.01). 血清IL-2受体水平治疗后略升高7.8±1.0mg/L, 与治疗前对比无显著性差异.

结论: 肝癌术后应用热休克蛋白-抗原肽复合物疫苗能明显提高患者免疫功能.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: May 19, 2005
Revised: May 28, 2005
Accepted: June 8, 2005
Published online: August 15, 2005

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

恶性肿瘤的免疫疗法已经成为继手术、放化疗之后的又一重要综合治疗手段, 随着特异性肿瘤抗原的发现和研究的发展, 应用肿瘤特异性抗原进行人类恶性肿瘤的治疗已成为一个重要方向. 大量研究证明, 肿瘤来源的热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)有明显的抗肿瘤作用. 我们对2000-10/2001-03我院外科住院肝癌患者57例进行了追踪研究.

1 材料和方法

1.1 材料

2000-10/2001-03我院外科住院肝癌患者57例, 治疗组共32例, 男22例, 女10例, 年龄54.5±13.2岁, Ⅰ期10例, Ⅱ期17例, Ⅲ期5例; 对照组共25例, 男18例, 女7例, 年龄51.8±14.7岁, Ⅰ期7例, Ⅱ期12例, Ⅲ期6例. 全组肝功能Child A级21例、B级36例, HBsAg阳性31例, AFP≥400 ng/mL 16例, 伴轻度腹水7例. 诊断及分期标准参照"第四届全国肝癌学术会议".所有患者随机分为治疗和对照组, 两组均衡性比较在年龄、肿瘤大小、肿瘤分期和肝功能上无差别.

1.2 方法

两组患者均择期手术, 术式均为不规则肝叶切除术, 手术完整切除肿瘤, 肿瘤大小4-13 cm, 术中未发现肿瘤转移, 病理证实均为肝细胞癌. HSP-肽复合物疫苗由第四军医大学肿瘤研究所惠赠. 术后第1 mo每周1次, 每次10 mg, 连续4次; 第2 mo每10 d 1次, 连续3次; 以后每半个月1次, 持续1年. 对照组注射生理盐水, 方法同治疗组. 观察指标: (1)全身及注射局部反应; (2)患者3年生存率、复发率; (3)T淋巴细胞亚群检测(CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/ CD₈⁺): 术前、术后3 mo分别抽取外周静脉血采用碱性磷酸酶桥联免疫酶标法(APAAP)测定(军事医学科学院生物制剂发展中心提供试剂); (4)血清IL-2受体测定采用双抗体夹心法, 试剂盒由广西医科大学免疫室供给, 操作按说明书; (5)Cr51释放试验测定自然杀伤细胞(NK)活性(中国原子能研究所产品).

统计学处理 采用SPSS11.0统计软件包, 计量资料比较应用t检验, P<0.05为有统计学意义.

2 结果

2.1 术后3 mo HSP-抗原肽复合物对患者T淋巴细胞免疫功能的影响

可见治疗组CD₃⁺、CD₈⁺均明显升高(P<0.05), CD₄⁺/CD8+比值下降(P<0.05); 对照组治疗前后无明显变化(表1). 治疗组术后6 mo、1年、3年CD₈⁺分别为48.3±12.6, 45.1±11.5, 45.8±12.1, 与3 mo比较均无明显差异; 对照组分别为27.5±9.2, 26.0±8.8, 24.3±8.1, 与治疗组比较有显著性差异(P<0.05).CD₃⁺, CD₄⁺, CD₄⁺/CD₈⁺治疗组与对照组术后6 mo, 1年, 3年比较均无显著性差异.

表1 两组治疗前, 治疗后3 mo T淋巴细胞免疫功能变化(%).

免疫指标	治疗组(n = 32)		对照组(n = 25)
	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
CD3+	50.4±13.1a	62.8±12.4a	52.0±11.7	53.1±14.4
CD4+	24.5±9.6	25.7±8.8	21.2±6.9	22.8±6.5
CD8+	26.4±9.5b	46.5±11.2b	24.2±7.7	23.6±7.4
CD4+/CD8+	0.92±0.23a	0.61±0.17a	0.96±0.21	0.97±0.30

^aP<0.05,

^bP<0.01 vs 治疗前.

2.2 HSP-肽复合物对肝癌切除术后患者生存率及肿瘤复发率的影响

术后3年治疗组总生存率升高, 总复发率明显降低, 与对照组比较有显著性差异(P<0.05)(表2). 术后1, 2年治疗组总生存率分别为94%, 81%, 总复发率分别为9%, 22%, 对照组总生存率分别为92%, 76%, 总复发率分别为8%, 28%, 两组比较均无显著性差异.

表2 两组肝癌切除术后3年生存率、肿瘤复发率比较(%).

分期	治疗组			对照组
	n	生存率	复发率	n	生存率	复发率
Ⅰ	10	90.0	20.0	7	71.4	42.9
Ⅱ	17	64.7	35.3	12	50.0	58.3
Ⅲ	5	40.0	80.0	6	33.3	83.3
总计	32	68.8a	37.5b	25	52.0a	60.0b

^aP<0.05,

^bP<0.01 vs 对照组.

2.3

NK细胞活性治疗后升高41.3±7.1, 与治疗前比较有显著性差异(P<0.05). 血清IL-2受体水平治疗后略升高7.8±1.0mg/L, 治疗组与对照组, 治疗前后对比均无显著性差异.

2.4 不良反应

全组患者无明显头痛, 胸闷, 恶心, 血液学毒性, 肝功能受损等不良反应发生, 仅治疗组1例于注射后1 d出现轻度发热, 未予治疗自行缓解.

3 讨论

原发性肝癌的治疗一直是肝脏外科的难题. 虽然近年来已经取得了许多进展, 但患者预后仍不理想, 国内报道直径小于4 cm的肝癌术后5年复发率仍高达60%左右[1-2], 其中一个重要原因是: 肝脏血流丰富, 40-60%的病例手术时肝内已经存在未被发现的微小转移灶, 因此, 如何控制肝癌术后的复发和转移是提高生存率的关键[3]. 近来肝癌肿瘤疫苗的研制对于提高患者特异性免疫功能来预防和治疗术后复发起到了积极的作用. HSP-肽复合物疫苗是HSP结合了多态性肿瘤多肽片段的复合物, 其诱导免疫特异性由其结合的多肽特异性决定, 可诱导机体产生对其来源细胞具有杀伤活性的CD₈⁺细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应, 且可激活多个CTL克隆株, 因此可以实现对同一肿瘤内的所有细胞产生杀伤效果[4].

原发性肝癌患者的免疫功能低下已为多数研究和临床观察所证实, 而原发性肝癌术后患者的免疫功能由于手术和麻醉的影响更低[5]. 多数实验研究表明, CD₈⁺细胞不仅参与了对肿瘤的直接杀伤作用, 而且也参与了肿瘤杀伤的免疫调节、传递抗肿瘤信息、稳定免疫细胞表面受体, 起到调动机体多种免疫功能、促进免疫细胞的协同抗肿瘤作用. NK细胞是一种自然细胞毒杀伤细胞, 对体内多种细胞, 特别是T、B淋巴细胞有调节作用, 在肿瘤免疫调节中起重要作用, 可作为监测肿瘤细胞免疫功能的指标. 其水平低下, 易导致肿瘤的发生和发展. 本研究表明, HSP疫苗在注射3 mo后即可明显诱导CD₈⁺T淋巴细胞产生CTL反应, 而对照组则未见CD₈⁺升高(P<0.05). 术后6 mo, 1年, 3年复测发现CD₈⁺及NK活性无明显变化, 证明HSP疫苗可产生持久的特异性免疫反应[6-7]. 本研究还发现, 患者注射HSP疫苗后血清IL-2R受体水平并不升高, 说明HSP疫苗的机制是激活抗肿瘤的CTL反应. 另外, 本组部分病例术后的肝脏穿刺病理结果也证实, 治疗组复发肿瘤灶周围存在大量淋巴细胞浸润, 说明HSP疫苗有针对肿瘤细胞产生特异性杀伤免疫细胞的作用.

总之, 在临床应用中, 经肝癌HSP疫苗激活的CD8+T淋巴细胞能提高原发性肝癌患者NK细胞活性, 并能在一定程度上发挥对肿瘤细胞的杀伤效应, 预示HSP疫苗在原发性肝癌患者的治疗方面具有一定的价值和应用前景, 尤其在免疫功能低下的原发性肝癌术后患者, 能明显提高其杀伤性T淋巴细胞活性, 对预防复发和提高远期疗效可能起到一定作用.

备注

编辑:王谨晖 审读:张海宁

参考文献

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