IL-12和IL-4水平对观察和预测拉米夫定治疗乙肝病毒感染中发生YMDD变异的意义

摘要

目的: 探讨在拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染中发生YMDD变异与治疗期间血清IL-12和IL-4水平变化的关系.

方法: 慢性乙型病毒性肝炎患者给予口服拉米夫定治疗1年时发生YMDD变异和未发生YMDD变异各选择40例, 测定拉米夫定治疗后3、6、12 mo血清IL-12、IL-4水平、乙肝两对半、肝功能和HBV DNA.

结果: 在无YMDD变异组患者中, 血清IL-12和IL-4水平在治疗后各个时间点较治疗前均有统计学差异(IL-12治疗后3, 6, 12 mo vs治疗前, t = 2.691, 2.351, 2.158, P = 0.02, 0.03, 0.04; IL-4治疗后3, 6, 12 mo vs治疗前, t = 2.653, 2.107, 2.234, P = 0.02, 0.04, 0.03), 表现为IL-12水平升高, IL-4水平降低; 在YMDD变异组患者中, 血清IL-12和IL-4水平仅治疗后3 mo和治疗前相比有统计学差异(t = 2.104, 2.142, P = 0.04, 0.04), 表现为IL-12水平升高, IL-4水平降低.YMDD变异组治疗后3 mo和无变异组治疗后同一时间相比, 其变化幅度小, 且有统计学差异(IL-12: t = 2.029, P = 0.04; IL-4: t = 2.028, P = 0.04).

结论: 发生YMDD变异与治疗期间血清IL-12和IL-4水平变化有关, 治疗期间其水平变化小而短暂者有更大的机会发生YMDD变异, 动态检测血清IL-12和IL-4水平可以作为拉米夫定治疗乙型肝炎病毒发生YMDD变异的预测指标之一.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: March 9, 2005
Revised: March 16, 2005
Accepted: March 22, 2005
Published online: June 28, 2005

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

拉米夫定是一种对乙型肝炎病毒复制有很强抑制作用的核苷类似物[1].目前已被广泛应用于临床, 但长期应用会使HBV DNA聚合酶活性区发生YMDD变异[2-4].国内报道拉米夫定治疗1年后YMDD变异发生率为12.1%, 2年后变异发生率高达49.7%[5].目前认为拉米夫定治疗前HBV DNA含量和转氨酶水平可以预测YMDD变异发生率, 但临床意义有限.我们选择拉米夫定治疗1年时发生YMDD变异和未发生YMDD变异各40例, 检测拉米夫定治疗期间血清IL-12、IL-4水平的变化, 研究血清IL-12、IL-4水平与拉米夫定治疗乙肝病毒发生YMDD的关系, 以探讨检测血清IL-12、IL-4水平作为预测拉米夫定治疗乙肝病毒发生YMDD变异的可能性.

1 材料和方法

1.1 材料

慢性乙型病毒性肝炎患者给予口服拉米夫定治疗1年时发生YMDD变异和未发生YMDD变异各选择40例, 这80例患者在治疗前HBeAg和HBV DNA均阳性.YMDD变异组指治疗1年时发生YMDD变异, 但治疗前和治疗期间未发生变异; 未发生YMDD变异组指治疗前、治疗期间和治疗1年时均未发生YMDD变异, 治疗1年时检测HBV DNA阴性, 伴或不伴有HBeAg血清转换.所有病例均为华中科技大学同济医学院附属协和医院感染内科2000-2003年门诊治疗患者, 其中男54例, 女26例, 年龄19-43岁, 平均32.4±10.2岁, 病程3-10年, 平均6.5±3.4年, 其ALT均在正常范围上限2倍以上, 平均2422.2±965.2 nkat/L, 胆红素均在正常范围以内, 80例病例均非母婴传播.诊断符合2000年在西安召开的全国第10届病毒性肝炎会议所修订的《病毒性肝炎防治方案》的标准.受检者治疗之前均未行抗病毒治疗和免疫调节治疗, 并排除药物、酒精、中毒等引起肝损伤.所有受检者血象、血清肌酐、磷酸肌酸激酶、淀粉酶均正常, 抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV均阴性.

1.2 方法

1.2.1 设计方案: 采用治疗前后对照试验, 所有受选者给予拉米夫定(Haptodin, 英国Glaxo-Willian公司提供), 1次/d, 100 mg/次, 疗程1年.治疗前和治疗后3、6、12 mo分别检测IL-12、IL-4、YMDD变异、乙肝两对半、肝功能、HBV DNA.

1.2.2 标本的采集: 抽取空腹静脉血5 mL, 待血块凝固收缩后以2 000 r/min, 取血于-20℃冰箱保存.

1.2.3 检测方法: 人IL-4、IL-12采用双抗体夹心ABC-ELISA法, 购于上海森雄科技实业有限公司, 严格按说明书操作, 依标准品绘标准曲线, 再计算待测样品中细胞因子含量.YMDD是用PCR-ELISA法检测, 试剂由上海浩源生物制品有限公司生产.

统计学处理 实验资料用SAS统计软件进行分析, 采用t检验.

2 结果

拉米夫定治疗1年时未发生YMDD变异组40例患者中, HBV DNA检测均阴性, ALT均复常, 其中7例出现HBeAg血清转换, 15例HBeAg阴转但未出现抗-HBe, 18例HBeAg仍然阳性.在治疗后各个时间点可检测到血清IL-12水平升高, IL-4水平降低, 和治疗前相比均有统计学意义(IL-12治疗后3 mo、6 mo、12 mo和治疗前相比其t值分别是2.691、2.351、2.158, 其对应的P值分别是0.02、0.03、0.04, 所有P<0.05; IL-4治疗后3 mo、6 mo、12 mo和治疗前相比其t值分别是2.653、2.107、2.234, 其对应的P值分别是0.02、0.04、0.03, 所有P<0.05)(表1).拉米夫定治疗1年时发生YMDD变异组40例患者中, 治疗期间曾出现HBV DNA阴性但治疗1年时均阳性, 治疗1年时32例患者HBeAg仍然阳性, 8例患者HBeAg阴转但未出现抗-HBe.治疗后可检测到血清IL-12水平升高, IL-4水平降低, 但仅治疗后第3 mo和治疗前相比有统计学意义(IL-12和IL-4治疗后3 mo和治疗前相比其t值分别是2.104、2.142, 其对应的P值分别是0.04、0.04, 所有P<0.05).YMDD变异组治疗后3 mo和无变异组治疗后同一时间相比其变化幅度小, 有统计学意义(IL-12和IL-4在YMDD变异组治疗后3 mo和无变异组治疗后3 mo相比其t值分别是2.029、2.028, 其对应的P值分别是0.04、0.04, 所有P<0.05)(表2).

表1 变异组和无变异组拉米夫定治疗前后IL-12(ng/L)水平.

组别	n	治疗前	治疗后
			3 mo	6 mo	12 mo
无变异组	40	34.21±8.38	69.21±18.10a	63.15±17.44a	59.64±14.30a
变异组	40	35.71±10.18	53.27±14.54ac	38.58±12.62	39.35±10.91

^aP<0.05 vs 治疗前;

^cP<0.05 vs 无变异组治疗后同时间.

表2 变异组和无变异组拉米夫定治疗前后IL-4(ng/L)水平.

组别	n	治疗前	治疗后
			3 mo	6 mo	12 mo
无变异组	40	83.41±19.58	50.96±18.74a	55.29±18.87a	53.82±13.65a
变异组	40	81.24±17.67	66.25±12.17ac	79.81±14.76	76.69±16.31

^aP<0.05 vs 治疗前;

^cP<0.05 vs 无变异组治疗后同时间.

3 讨论

近年来, 众多临床研究者致力于探寻发生YMDD变异的预测因素, 但远未达成共识.所谓预测因素是指与YMDD变异有关的治疗前或治疗中的因素.一旦明确哪些因素与YMDD变异有关, 临床医师在治疗指征和治疗时机的选择上将有规可循, 从而可减少或延缓YMDD变异的出现, 提高拉米夫定的疗效.

多篇报道认为, YMDD变异的发生与基线高HBV病毒血症、HBeAg阳性、男性和高体重指数等有关[6-9], 而ALT水平与YMDD变异尚有不同的报道结果[10].我们试图从细胞因子的角度来探讨IL-12和IL-4水平作为预测拉米夫定治疗乙肝病毒发生YMDD变异的可能性.

人类CD4⁺辅助性Ｔ细胞是机体免疫应答和免疫调节的中心环节, Th细胞分为Th1/Th2两大亚群, Th1主要促进细胞免疫应答, Th2主要促进体液免疫应答.目前认为IL-12、IL-4是诱导前体细胞向Th1、Th2分化的直接刺激因子, 故IL-12、IL-4分别是Th1、Th2应答强度的重要衡量指标[10-13].

在拉米夫定治疗1年时未发生YMDD变异组患者中, 治疗后各个时间点可检测到血清IL-12水平升高, IL-4水平降低, 提示拉米夫定治疗可以纠正Th1/Th2细胞因子失衡, 恢复机体的细胞免疫, 增强机体抗HBV免疫, 与国内外报道一致[14-15].而在拉米夫定治疗1年时发生YMDD变异组患者中, 仅治疗后第3 mo血清IL-12水平升高, IL-4降低, 且变化幅度较无变异组低, 故机体增强的细胞免疫反应短暂和微弱.因此在抗病毒治疗之后机体恢复的细胞免疫并且这种细胞免疫的持久性是拉米夫定治疗乙肝病毒不发生YMDD变异的关键.血清IL-12和IL-4水平在拉米夫定治疗过程中的变化提示他们可以作为拉米夫定用药及疗效预测指标, 在治疗后的各个时间点通过检测血清IL-12和IL-4水平来评价机体Th1反应的程度, 间接反映机体抗HBV免疫功能恢复情况.在常规指标外增加合适的免疫学指标, 无疑将丰富对慢性乙型肝炎的认识, 更好的评价患者拉米夫定治疗的反应性.

备注

编辑: 张海宁

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