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世界华人消化杂志. 2005-06-28; 13(12): 1452-1454
在线出版日期: 2005-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i12.1452
CD14基因C-260T多态性与溃疡性结肠炎的相关性
郭秋莎, 夏冰
郭秋莎, 夏冰, 武汉大学中南医院综合医疗科, 武汉大学中南医院消化病研究中心 湖北省武汉市 430071
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 30370638; 湖北省卫生厅重点项目(2003).
通讯作者: 夏冰, 430071, 湖北省武汉市东湖路169号, 武汉大学中南医院综合医疗科, 武汉大学中南医院消化病研究中心. bingxia2004@yahoo.com.cn
电话: 027-67812985 传真: 027-87330795
收稿日期: 2005-04-04
修回日期: 2005-04-06
接受日期: 2005-04-09
在线出版日期: 2005-06-28

目的: 研究我国湖北汉族人CD14基因C-260T多态性的分布及CD14基因C-260T位点的突变是否与溃疡性结肠炎(UC)相关.

方法: 采用PCR-RFLP方法检测114例UC患者以及160例正常对照者CD14-260基因型及等位基因频率.

结果: 对上述274份DNA标本的基因型分析, 发现CD14-260基因型在正常对照组与UC组间无显著性差异.此基因多态性与UC无相关性.

结论: CD14基因C-260T多态性与中国湖北汉族UC无明显相关性.CD14基因不是溃疡性结肠炎的易感基因.

关键词: N/A
引文著录: 郭秋莎, 夏冰. CD14基因C-260T多态性与溃疡性结肠炎的相关性. 世界华人消化杂志 2005; 13(12): 1452-1454
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: April 4, 2005
Revised: April 6, 2005
Accepted: April 9, 2005
Published online: June 28, 2005

N/A

Key Words: N/A
0 引言

CD14分子表达于成熟的单核巨噬细胞和活化的中性粒细胞表面, 他与TLR4、MD2、LPS结合蛋白(LBP)共同作用识别病原LPS并激活巨噬细胞[1-3], 产生免疫应答.膜CD14与LPS结合后激活细胞产生前炎症因子, 氧自由基, 一氧化氮和抗炎症细胞因子, 并上调共刺激分子活化特异性免疫应答[4-5].可溶性CD14(soluble CD14, sCD14)亦可以识别低浓度LPS[6].近来CD14启动子区的多态性位点被发现.在CD14-260位点可发生T→C的突变[7].研究表明携带T等位基因者较C等位基因者血浆中sCD14的浓度显著增高[8].有报道发现CD14-260基因多态性与炎症性肠病(IBD)相关[9-11].这些研究都表明了CD14在激活肠道的免疫反应及IBD的发病过程中有一定的作用.鉴于CD14在炎症反应中重要作用及其与IBD的相关性, 其启动子区的多态性位点可能对溃疡性结肠炎(UC)的基因易感性及早期预测疾病的转归有一定的影响.故我们对湖北汉族114例UC患者与160例正常对照的CD14-260位点的基因型分布进行检测, 以明确中国湖北汉族人CD14-260基因多态性的正常分布或基因型频率及与UC是否有相关性.

1 材料和方法
1.1 材料

收集2001/2003在武汉大学中南医院以及武汉市其他大型综合医院就诊的湖北汉族无亲缘关系的UC患者114例以及健康对照者160例.UC诊断标准参照中华医学会消化病学分会2001"对炎症性肠病诊断治疗规范的建议"[12].健康对照者来自正常体检者.

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA提取: 采血5 mL, EDTA抗凝, 常规蛋白酶K消化, 苯酚-氯仿提取.提取的DNA溶解于TE中, -25℃保存.

1.2.2 PCR扩增: 在25 μL的反应体系中分别加入引物P1(5'-CCTGCAGAATCCTTCCTGTT-3')和P2(5'-TCACCTCCCCACCTCTCTT-3'), 94℃预变性5 min.变性94℃, 30 s; 退火59℃, 30 s; 延伸72℃, 60 s; 共35次循环.最后彻底延伸于72℃ 7 min.PCR产物于20 g/L琼脂糖电泳, 并在紫外分析仪下分析鉴定.

1.2.3 PCR限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP): 将107 bp的PCR产物用限制性内切酶Hae Ⅲ于37℃酶切.当该多态性位点为C时, 可酶切为83 bp和24 bp; 当多态性位点为T时, 则切不开.酶切产物以80 g/L的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(100 V, 1.5 h)分离、硝酸银染色, 以检测基因突变.

统计学处理 通过SPSS11.0软件包, 采用χ2检验, P<0.05为有统计学意义.

2 结果

对274份DNA(160名正常对照者、114例UC患者)进行基因型分析, 发现在正常组与UC组中, CC基因型的频率分别为15.6%和8.8%, 而CT基因型的分布频率分别为48.1%和54.4%.但无显著性差异(P = 0.2 267, 表1).将UC患者根据性别和病变部位进行分组比较, 在UC组各亚型间亦未发现明显差异(表2).

表1 CD14-260等位基因与基因型频率在健康对照组与UC组的分布.
基因型健康对照组(n = 160)n(%)UC(n = 114)n(%)
T/T58(36.3)42(36.8)
C/T77(48.1)62(54.4)
C/C25(15.6)10(8.8)
等位基因%%
T60.364.0
C39.736.0
表2 CD14-260的等位基因频率与基因型频率在UC患者性别组与病变部位组中的分布.
基因型频率(%)
等位基因频率(%)
TTCTCCTC
性别
男性(n = 64)23(35.9)37(57.8)4(6.3)83(64.8)45(35.2)
女性(n = 50)19(38.0)25(50.0)6(12.0)63(63.0)37(37.0)
部位
左半结肠炎(n = 51)6(11.8)25(49.0)20(39.2)37(36.3)65(63.7)
直肠炎(n = 19)2(10.5)10(52.6)7(36.9)14(36.8)24(63.2)
全结肠炎(n = 44)2(4.5)27(61.4)15(34.1)31(35.2)57(64.8)
3 讨论

CD14, 作为TLR4对LPS的协同受体, 以两种形式存在-膜型和可溶型[13-14].膜型CD14(mCD14)表达于单核/巨噬细胞表面, 可被TLR4活化; sCD14则促进LPS结合蛋白与不表达mCD14的细胞结合.CD14基因位于5号染色体长臂(5q23-31), 该区包含一个位于5q22-32区的细胞因子基因簇和位于CD14启动子区-260位点的单个碱基的替换[15].该等位基因的突变可通过调节单核细胞表面CD14的表达激活单核细胞识别LPS, 分泌炎性细胞因子如TNF-α等[7].

目前发现T等位基因与循环中的mCD14的表达增加有关[7], 故CD14-260位点的C到T的突变可能导致CD14基因启动子区的活性增强, 促进CD14基因的转录, 使单核细胞高表达CD14, 从而使炎症应答增强.此外, 携带T等位基因者较携带C等位基因者, sCD14的水平明显增高[8].Zareie et al[16]发现克罗恩病(CD)患者的肠固有层单核细胞(LPMC)在内毒素LPS的作用下自发被激活.处于活动期的IBD患者其LPMC的CD14表达明显升高[17-18].因此, 肠上皮细胞或LPMC的CD14通路的活化可能是由炎症反应导致的前炎症细胞因子过度分泌及黏膜损伤的最初的触发机制.因此, CD14-260可能是导致个体在对肠道炎症的免疫应答中不同的CD14表达水平及免疫应答程度的基因方面的因素.目前已有关于CD14的基因多态性与IBD的相关性研究.在德国人群中的研究显示, CD与CD14基因的等位基因T、TT基因型有明显相关性[10].而对日本、加拿大人群及犹太人家庭[9,11,19]的研究发现该基因与UC而不是与CD相关.

我们通过PCR限制性片段长度多态性分析的方法对160名正常人、114例UC患者的CD14-260位点的基因多态性进行了检测, 发现该多态性位点的CC基因型在正常人群中(15.6%)高于UC患者(8.8%), 而TC基因型在UC患者中(54.4%)高于正常人群(48.1%), 但其无显著性差异.我们也未发现在UC组各亚型间存在显著差异.提示CD14基因与中国汉族UC患者无关.将中国、日本[9]及德国[10]人群的CD14-260位点的等位基因频率及基因型频率进行比较发现存在显著差异(P<0.01), 提示存在种族差异性.CD14基因C-260T等位基因频率及基因型频率分布的不同, 将有助于阐明不同种族和不同地区人群在疾病发生机制上的差异.

编辑: 王谨晖 审读: 张海宁

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