修回日期: 2004-06-09
接受日期: 2004-06-17
在线出版日期: 2004-09-15
目的: 探讨凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况, 为保肛手术的选择提供理论依据.
方法: 应用黏液组化方法确定各种组织类型直肠癌旁移行黏膜的分布规律, 应用免疫组织化学方法检测凋亡抑制基因survivin在直肠癌旁移行黏膜中的表达情况.
结果: 直肠癌旁移行黏膜范围, 在黏液癌(平均7.83 cm)明显大于乳头状癌及管状腺癌(P <0.01), 在Dukes C期(平均5.61 cm)明显大于DukesA、B期(P <0.05). 正常黏膜(NM)、 移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达, 由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加, 四组间差别有显著意义(P<0.05).
结论: 在移行黏膜(TM)、 非典型增生及癌组织中就存在survivin基因表达上调; 在黏液癌及Dukes C期直肠癌旁移行黏膜范围明显增宽, 提示对低位黏液癌及Dukes C期直肠癌保肛手术应慎重.
引文著录: 苏琪, 吴硕东, 殷红专, 韩霞, 陈春生, 冯勇, 刘恩卿. 直肠癌旁移行黏膜中Survivin基因表达的意义. 世界华人消化杂志 2004; 12(9): 2201-2202
Revised: June 9, 2004
Accepted: June 17, 2004
Published online: September 15, 2004
N/A
- Citation: N/A. N/A. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2004; 12(9): 2201-2202
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v12/i9/2201.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v12.i9.2201
Survivin 是凋亡抑制基因(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成员. 近年来, 对survivin的分子生物学, 凋亡抑制机制及其与肿瘤发展关系的研究已取得一定进展. 随着保肛手术逐渐增加, 特别是腹腔镜等微创技术在直肠癌中的应用, 根治术后2年内局部复发有逐年增加的趋势, 其中吻合口复发者占5-15%. 所以癌旁移行黏膜(tansitional mucosa, TM)的研究更加受到重视[1-2]. 我们率先将凋亡抑制基因survivin应用于直肠癌旁TM的研究, 并与正常黏膜及癌组织进行对照如下.
2000/2003年手术切除的直肠癌标本 73例, 男41例, 女32例;年龄53.0±12.3岁. 乳头状腺癌32例, 管状腺癌23例, 黏液腺癌16例, 未分化癌2例. Survivin羊抗人多克隆抗体(sc-8806)为Santa Cruz公司产品、survivin一抗工作浓度为1:50, SP试剂盒为Zymed公司产品, 高铁双胺奥蓝(HID-AB)试剂盒购于上海虹桥医用试剂研究所.
标本经40 g/L的中性甲醛固定后, 沿肠管纵向自癌肿向两端每0. 5 cm等长取材, 近端平均距癌瘤20 cm, 远端4.5 cm, 石蜡包埋, 制成5 mm厚切片. 每例切片均作HID-AB黏液染色, 免疫组化染色, 用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照, 用已知阳性切片作为阳性对照. 直肠癌标本均由手术病例证实. 临床病理分期按Dukes分期, 组织学分类、分期参照全国大肠癌协会统一标准, 有两名病理学教授分别阅片. HID-AB黏液染色采用Filipe标准[1], 正常黏膜腺管杯状细胞内出现黑色的硫酸粘蛋白, 而TM则腺体中超过50%杯状细胞中出现蓝色唾液酸粘蛋白染色. 免疫组化S-P染色: 凡染色强度明显高于背景者为阳性表达, 将阳性细胞按数量及染色强度分为3级: 表达弱阳性(+),即阳性细胞数小于10%;表达强阳性(+++), 即阳性细胞数占60%以上; 中强度阳性(++), 即阳性细胞数介于以上二者之间; 染色强度与背景一致者为阴性.
统计学处理 计量资料采用t检验; 计数资料采用χ2分析.
73例直肠癌中有70例检出了癌旁移行黏膜, 检出率95.8%, 癌旁TM分布范围0-12.3(平均3.14) cm, 其中52例(71%)局限在癌旁3 cm范围内. 黏液腺癌旁TM分布最广, 平均7.83±1.36 cm, 明显大于乳头状腺癌(1. 08±1.36)及管状腺癌(2.13±1.91 cm P <0.01). Dukes分期越晚, 其相应癌旁TM分布越广, DukesC期(5.61±4.52 cm)明显大于DukesA、B期(1.05±0.84和2. 70±2.60 cm P <0.01, P <0.05).
正常黏膜(NM)、移行黏膜(TM)、非典型增生及癌组织中均有survival基因产物表达, 由正常直肠黏膜到癌组织表达率逐渐增加, 4组间差别有显著意义(P <0.05). 在癌组织及癌旁组织, survival基因产物均位于细胞质, 未见细胞核及细胞膜阳性, 阳性细胞成弥漫性、局灶性或散在性分布. 60例survivin阳性的直肠癌病例中, TM平均范围3.8 cm, 13例survivin阴性的直肠癌病例中TM平均范围1.2 cm, 二者间差异有显著意义(P <0.05)(表1).
| 上皮类型 | n | 阴性 | 弱阳性 | 阳性 | 强阳性 | 阳性率% |
| 正常粘膜 | 32 | 29 | 2 | 1 | 0 | 9.38 |
| 移行粘膜 | 70 | 47 | 12 | 8 | 3 | 32.86 |
| 非典增生 | 21 | 12 | 4 | 3 | 2 | 42.86 |
| 癌 | 73 | 15 | 20 | 18 | 20 | 79.45 |
Survivin 是凋亡抑制基因(inhibitor of apoptosis protein ,IAP)家族的新成员. Survivin 的结构较为独特, 他仅含有单一的BIR功能区, 没有指环结构, 是一个142个氨基酸的蛋白. Survivin 和EPR-1位于染色体(17q25)的同一基因组, 长度范围在75-130 kb, 他们分别由不同的mRNA(1.9 kb和1.3 kb)所编码. Survivin表达于人与鼠的胚胎发育组织, 但在正常成人组织很少表达[3-5]. 研究表明survivin 是迄今发现最强的凋亡抑制因子[5]. Caspase 是细胞凋亡的核心机制, 其级联式激活并溶解蛋白质, 决定了凋亡形态的变化[7]. Survivin直接作用于Caspase,主要抑制Caspase-3, Caspase-7的活性, 阻断细胞的凋亡过程. 另外survivin也可以通过p21间接抑制Caspase, 其机制是survivin与细胞周期调控因子CDK4形成survivin-CDK4复合体, 使得p21从CDK4的复合体中释放出来, p21进一步与线粒体Caspase3结和, 抑制其活性, 阻止细胞凋亡[3-5].
近几年来, 对survivin的分子生物学, 凋亡抑制机制及其与肿瘤发展, 血管形成, 细胞周期关系的研究正引起国外学者的广泛关注. 但目前尚未见到将其用于癌旁移行黏膜的研究. 我们应用黏液组织化学方法观察了直肠癌旁TM的分布情况. 应用免疫组织化学的方法研究人原发性直肠癌旁 TM中survivin 基因产物的表达, 此方法具有简便、快速等特点且能够观察survivin 基因产物在良恶性细胞中的定位. 结果显示在癌旁正常黏膜survivin基因产物阳性表达最低(9.38%), 在移行黏膜、非典型增生、癌组织(79.45%)逐渐增高, 4组间差异有显著意义(P <0.05). 提示该基因对直肠癌的发生发展起重要作用, survivin基因有望成为直肠癌基因治疗的新靶点.
在survivin基因产物表达阳性的直肠癌病例中, TM范围大于survivin阴性的病例 (P <0.05), 表明survivin基因的增加可能是导致癌旁移行性变化的因素之一. 在直肠癌的发生过程中, 从TM开始就有survivin基因产物的表达上凋, 表明survivin基因增加与直肠癌的发生有关, 可作为判断肿瘤发生可能性的有用标志物, 并提示TM具有一定的恶性潜能. 为此, 在直肠癌微创及保肛门手术时, 应该彻底切除癌旁TM, 以减少局部复发率, 提高生活质量. 直肠癌survivin基因产物表达上调与TM的范围之间存在一定相关性, 其具体机制有待分子生物学深入研究.
| 3. | Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, Altieri DC. Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin gene targeting. J Biol Chem. 1998;273:11177-11182. [PubMed] [DOI] |
| 4. | Adida C, Crotty PL, McGrath J, Berrebi D, Diebold J, Altieri DC. Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation. Am J Pathol. 1998;152:43-49. [PubMed] |