研究快报 Open Access
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世界华人消化杂志. 2004-08-15; 12(8): 1955-1957
在线出版日期: 2004-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i8.1955
国人P53基因CD72 Arg/Pro多态性与贲门腺癌发病相关
李湘洲, 管立学, 高丽, 胡德宏, 王敬先, 王瑞丽, 杜欣莹, 李海波
李湘洲, 潍坊医学院附属潍坊市人民医院病理科 山东省潍坊市 261041
管立学, 王敬先, 王瑞丽, 杜欣莹, 李海波, 潍坊医学院附属潍坊市人民医院医学遗传科 山东省潍坊市 261041
胡德宏, 潍坊医学院附属潍坊市人民医院胸外科 山东省潍坊市 261041
高丽, 潍坊医学院附属潍坊市人民医院肿瘤内科 山东省潍坊市 261041
通讯作者: 李湘洲, 261041, 山东省潍坊市, 潍坊医学院附属潍坊市人民医院病理科.
电话: 0536-8192314
收稿日期: 2004-07-14
修回日期: 2004-07-25
接受日期: 2004-07-31
在线出版日期: 2004-08-15

目的: 探讨P53基因CD72 Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌发病的关系.

方法: 应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72 Arg/Pro多态性进行检测.

结果: 病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413%和13.0%, x2 = 24.1, P<0.01和x2 = 29.48, P<0.01); 携带Pro/Pro基因型者患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高, P为8.30, 95%CI: 3.49-19.77(x2 = 22.49, P<0.01).

结论: P53基因Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易患因素.

关键词: N/A
引文著录: 李湘洲, 管立学, 高丽, 胡德宏, 王敬先, 王瑞丽, 杜欣莹, 李海波. 国人P53基因CD72 Arg/Pro多态性与贲门腺癌发病相关. 世界华人消化杂志 2004; 12(8): 1955-1957
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: July 14, 2004
Revised: July 25, 2004
Accepted: July 31, 2004
Published online: August 15, 2004

N/A

Key Words: N/A
0 引言

P53基因作为抑癌基因在恶性肿瘤中的研究最为广泛, 但对P53基因多态性的研究处于初步阶段. 近年来研究表明, P53基因第72位密码子具有CGT/CCT单核苷酸多态性, 使编码的精氨酸(Arg)被脯氨酸(Pro)取代, 两种基因编码的P53蛋白均为野生型, 但这两种蛋白的转录激活作用、抑制转化细胞生长、诱导细胞凋亡以及对细胞损伤的修复功能有所不同 [1-2]. Shepherd et al[3]报道, P53基因CD72 Arg/Pro多态性增加胃癌发病的危险, 且具有明显的种族差异. 我们应用PCR-RFLP法对67例贲门腺癌患者和138名正常对照组人群P53基因CD72多态性进行了检测, 旨在探讨P53基因CD72 Arg/Pro多态性与潍坊地区汉族人贲门腺癌的易患性.

1 材料和方法
1.1 材料

2000-12/2003-10我院手术治疗贲门腺癌67例: 男56例, 女11例, 平均年龄58.2±10.8岁; 所有病例均经组织病理学确诊. 正常对照组138名来自我院健康查体的正常个体, 男110名, 女28名, 平均年龄59.0±11.1岁, 并除外各种肿瘤. 用于基因分析的DNA: 均来源于手术切除的贲门癌旁正常组织或外周血淋巴细胞.

1.2 方法

组织匀浆或外周血白细胞经SDS和蛋白酶K消化, 酚/氯仿法提取基因组DNA. P53基因引物序列参照文献[4]设计, 由Sangon公司合成. P1: 5'-TTGCCGTCCCAAGCAATGGATGA-3'; P2: 5'-TCTGGGAAGGGACAGAAGATGAC-3'. PCR反应体系为25 μL, 其中包括基因组DNA 100 ng, TaqDNA聚合酶(Sangon公司)1U. PTC-100型扩增仪进行扩增. 循环参数: 94 ℃预变性2 min, 然后94 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s共35个循环, 最后72 ℃延伸5 min. 限制性内切酶消化及基因型分析: 酶切反应体系20 μL, 其中包括PCR产物5 μL, 内切酶BstU I 4.0 U (New England Biolabs公司), 混匀后置37 ℃水浴, 消化过夜. 120 g/L的中性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳, 银染显色分析基因型.

统计学处理 基因型频率和等位基因频率比较用x2检验, 相对风险度以参与风险的比数比(odds ratio, OR) 表示, 95%可信区间(95%CI)计算采用Miettinen法.

2 结果

P53基因PCR产物为199 bp的片段, 经BstU 1酶切后产生3种基因型, 分别为: Pro/Pro基因型, 因突变使酶切位点丢失而只有199 bp的扩增片段; Arg/Arg基因型, 存在酶切点, 产生113 bp, 86 bp 2条带; Arg/Pro为杂合基因型, 同时具有199 bp, 113 bp和86 bp 3条带(图1). 两组人群基因型分布符合Hardy-weinberg平衡(正常对照组x2 = 3.44, P>0.05; 病例组x2 = 0.97, P>0.05). 病例组P53基因Pro等位基因频率(0.672)和Pro/Pro基因型频率(47.8%)都显著高于正常对照组(0.413%和13.0%)(x2 = 24.1, P<0.01和x2 = 29.48, P<0.01); 而Pro/Arg基因型频率和Arg/Arg基因型频率低于对照组(x2 = 5.66, P<0.05; x2 = 6.98, P<0.01). 携带Pro/Pro基因型者易患贲门腺癌的风险比携带Arg/Arg基因型者显著升高, P为8.30, 95%CI: 3.49-19.77(x2 = 22.49, P<0.01); Arg/Pro基因型与贲门腺癌的易患性无关(表1).

表1 P53基因型及等位基因频率与贲门腺癌风险的关系.
基因型病例组n(%)对照组n(%)P(95%CI)P值
Pro/Pro32 (47.8)18 (13.0)8.30 (3.49-19.77)<0.01
Arg/Pro26 (38.8)78 (56.5)1.56 (0.55-3.63)>0.05
Arg/Arg9 (13.4)42 (30.5)1.0
图1
图1 P53基因酶切片段12%PAGE电泳结果 . 1, 3: Pro/Pro型; 2, 7: Arg/Arg型; 4, 5, 6: Arg/Pro型; 8: PUC19 DNA/Msp I marker.
3 讨论

P53基因是调控细胞周期和保护细胞染色体免受损伤的基因, 有3个多态位点与肿瘤有关[5]: (1)位于第4外显子中的CD72 Arg/Pro多态; (2)第3内含子区16 bp (5'-gacctggagggctggg-3')的插入/缺失多态; (3)第6内含子的MSPI 限制性酶切位点多态. 近年来研究发现P53基因CD72 Arg/Pro多态与食管鳞癌及人乳头瘤病毒(HPV)感染相关肿瘤的易感性有关联[6-7]. Shepherd et al[3]对217例胃癌P53基因外显子4的测序结果表明, 突变率为3.2%, 发现2个多态性位点, CD36多态较罕见(仅在2例患者中发现), 相反CD72多态频率较高, 而且具有种族差异, Arg/Arg基因型频率白种人为64%, 而黑种人为24%; 认为Arg/Arg基因型白种人易患贲门癌, 携带Pro等位基因的黑种人易患胃窦癌, 基因型与地理位置、性别和肿瘤组织学类型无统计学差异(P = 0.067). 本结果表明, 潍坊地区汉族正常人群P53基因CD72 Arg/Pro多态以Arg/Pro基因型频率最高, 与其他种族人群有明显差异, 携带Pro/Pro基因型个体比携带Arg/Arg基因型者患贲门腺癌的风险增加8倍, 95%CI: 3.49-19.77(P<0.01). 提示Pro/Pro基因型是贲门腺癌的遗传易感因素.

编辑: N/A

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