中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的影响

摘要

目的: 观察中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的防治作用.

方法: 采用高浓度酒精灌胃合高脂饲料饲养制备大鼠脂肪肝模型, 同时给予不同剂量肝脂复煎剂治疗, 以二甲双胍为对照. 通过检测血清肝酶谱、肝组织匀浆甘油三脂含量和肝脏组织学变化, 观察不同剂量肝脂复煎剂对脂肪肝的防治作用.

结果: 模型组大鼠肝脏出现明显的脂肪变性, 肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量升高(ALP: 8 156±2 696 vs 4 478±2 229; GGT: 52±14 vs 24±21; TG: 615±106 vs 454±113, P<0.05; 肝TG: 53±10 vs 27±8, P<0.01). 肝脂复剂量组肝细胞脂肪变显著减轻, 肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量较模型组显著下降(ALP: 5 666±2 187 vs 8 156±2 696; GGT: 24±14 vs 52±14; TG: 442±148 vs 615±106; 肝TG: 35±4, 36±6, 38±6 vs 53±10, P<0.05-P<0.01), 二甲双胍组肝组织甘油三脂含量较模型组下降(32±1 vs 53±10, P<0.01), 其余指标无显著差异.

结论: 肝脂复煎剂对脂肪肝具有良好的防治作用.

关键词: N/A

Effect of Chinese medicine Ganzhifu decoction on murine fatty liver induced by alcohol and high fat feeding

Fu-Er Lu, Hui Dong, Zhi-Qiang Gao, Li-Jun Xu, Shi-Chao Wei, Kai-Fu Wang, Xin Zou

Fu-Er Lu, Hui Dong, Zhi-Qiang Gao, Li-Jun Xu, Shi-Chao Wei, Kai-Fu Wang, Xin Zou, Institute of Integrated Chinese and Western Medicine, Affiliated Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030 Hubei Province, China

Supported by: Key Research Projects of Hubei Province. No. 2002AA302B13.

Correspondence to: Dr Fu-Er Lu, Institute of Integrated Chinese and Western Medicine, Affiliated Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030 Hubei Province, China. felu@tjh.tjmu.edu.cn

Received: October 21, 2003
Revised: November 1, 2003
Accepted: November 19, 2003
Published online: July 15, 2004

Abstract

AIM: To explore the effects of Chinese medicine Ganzhifu decoction on fatty liver in rats.

METHODS: The fatty liver model was established by feeding with high caloric laboratory chaw and alcohol. Sixty male Wistar rats were randomized into 6 groups, i.e. a normal control group, a model group, three Ganzhifu groups treated with Ganzhifu decoction (giant knotweed 20 g, rhubarb 5 g, Bupleurum 10 g) in different concentrations and a metformin group. All the animals were killed after treatment for 8 wk. The activities of alkaline phosphatase and gamma glutamyl transferase, blood lipid, liver triglycerin and pathological changes in all groups were assayed.

RESULTS: The activities of alkaline phosphatase and gamma glutamyl transferase, blood lipid, liver triglycerin of model group increased significantly (ALP: 8 156±2 696 vs 4 478±2 229; GGT: 52±14 vs 24±21; TG: 615±106 vs 454±113, P < 0.05; Liver triglycerin: 53±10 vs 27±8, P < 0.01). Liver histology showed mild to moderate steatosis. Those indexes of Ganzhifu groups were significantly lower than those of model group (ALP: 5 666±2 187 vs 8 156±2 696; GGT: 24±14 vs 52±14; TG: 442±148 vs 615±106; Liver triglycerin: 35±4, 36±6, 38±6 vs 53±10, P < 0.05, P < 0.01). The hepatic steatosis was also improved. Liver triglycerin of metformin group was significantly reduced (32±1 vs 53±10, P < 0.01), but there was no significant difference in other indexes between metformin and model groups.

CONCLUSION: Ganzhifu decoction can protect fatty liver in rats.

Key Words: N/A

0 引言

脂肪肝是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪性变[1-6]. 流行病学调查表明主要为酒精、肥胖等引起的慢性脂肪肝[7-12]. 肝脂复煎剂治疗脂肪肝多年, 取得了满意疗效. 为进一步观察其防治实验性脂肪肝的药理作用, 特进行该复方防治脂肪肝的实验研究.

1 材料和方法

1.1 材料

清洁级♂Wistar大鼠60只, 体质量150±10 g, 由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供. 测血脂和肝酶的试剂盒均购自浙江东瓯生物工程有限公司; 猪油, 玉米油购自超市; 胆固醇购自郑州利伟生物化工有限公司. 肝脂复煎剂(组成: 虎杖20 g, 生大黄5 g, 柴胡10 g. 将虎杖、生大黄用乙醇回流提取2次, 合并提取液, 回收乙醇至无醇味, 得浸膏1; 另将柴胡用水煎煮2次, 将提取液合并浓缩得浸膏2; 将1、2合并即得肝脂复煎剂浸膏.)由同济医院药剂科提供, 每克浸膏含生药3.5 g, 双蒸水稀释成不同浓度备用. 盐酸二甲双胍片由法国里昂医药工业公司生产, 研制成粉末, 双蒸水溶解成含药10g/L混悬液, 其余试剂均为分析纯.

1.2 方法

♂Wistar大鼠60只, 适应性喂养1 wk后随机分为6组, 即正常组、模型组、肝脂复低、中、高剂量组(浸膏浓度依次为0.05, 0.1, 0.2 kg/L)和二甲双胍组, 每组10只. 正常组予标准饲料饲养, 生理盐水10 mL/kg灌胃, 2次/d, 其余各组均高脂饲料(835 g/kg标准饲料+15 g/kg胆固醇+50 g/kg猪油+100 g/kg玉米油)饲养, 60 mL/L酒精按10 mL/kg灌胃, 2次/d. 肝脂复各剂量组每日14: 00分别按照肝脂复低中高剂量给予灌胃, 二甲双胍组给二甲双胍混悬液10 ml/kg每日灌胃, 各组均正常饮水, 观察大鼠的食欲、体重、行为、状态、毛发及死亡情况, 连续8 wk. 末次给药24 h后, 20 g/L戊巴比妥钠(30 mg/kg)进行腹腔麻醉. 腹主动脉取血, 常规制备血清. 同时称体质量及肝质量, 摘取部分肝组织进行生化指标测试和HE染色. 用赖氏法测ALT, AST活性, 酶法GGT、ALP, 总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量. 取新鲜肝脏适量, 制成组织匀浆, 用抽提液(甲醇与氯仿1: 1, V/V)抽提脂质, 用分光光度法测定TG的含量. 将取出的肝组织用中性甲醛固定, 石蜡包埋, HE染色, 光镜下观察肝组织学的改变, 肝细胞脂肪变等情况.

统计学处理 实验数据以mean±SD表示, 组间比较采用t检验.

2 结果

模型组及实验观察组大鼠毛发光泽度差, 体重增长较缓慢, 多数大鼠食欲差. 正常组大鼠则精神状态好, 食欲佳. 体质量及肝质量/体质量均无显著性差异. 将各组死亡大鼠剔除, 最后共取得有效标本50份.

2.1 血清肝酶谱变化

模型组与正常组比较, ALT与AST有升高趋势, 但无显著性差异. 而ALP与GGT则显著升高; 与模型组比较, 肝脂复低剂量组ALP与GGT则显著降低(P<0.05, 表1); 二甲双胍组肝酶活性则无显著改善.

表1 各组大鼠酶活性的变化 (mean±SD, nkat/L).

分组	n	ALT	AST	ALP	GGT
正常组	9	347±154	970±763	4 478±2 229	24±21
模型组	8	412±168	1 157±211	8 156±2 696a	52±14a
低剂量组	10	302±137	1 102±300	5 666±2 187c	24±14c
中剂量组	9	459±134	1 498±281	8 230±2 539	46±25
高剂量组	8	386±173	1 402±329	7 251±3 215	46±9
二甲双胍组	6	560±126	1624±370	7000±4555	29±31

^aP<0.05 vs 正常组;

^cP<0.05 vs 模型组.

2.2 血清和肝组织匀浆脂质的变化

模型组血清TG较正常组显著升高(P<0.05), 但各治疗组中只有高剂量组降低血清TG作用明显(P<0.05), 并显示出剂量相关性. 模型组肝组织TG显著升高(P<0.01), 各治疗组均显示出降低肝组织TG的作用(P<0.05-P<0.01, 表2). 模型组血清TC有升高趋势, 但无显著性差异.

表2 各组大鼠血清及肝匀浆脂质的变化 (mean±SD).

分组	n	血清TG(umol/L)	血清 TC(umol/L)	肝TG(mg/g)
正常组	9	454±113	1 513±191	27±8
模型组	8	615±106a	1 857±455	53±10b
低剂量组	10	551±214	1 582±421	35±4d
中剂量组	9	527±182	1 887±329	36±6c
高剂量组	8	442±148c	1 954±488	38±6c
二甲双胍组	6	650±190	1 814±198	32±1c

^aP<0.05,

^bP<0.01 vs 正常组;

^cP<0.05,

^dP<0.01 vs 模型组.

2.3 病理学改变

正常组大鼠肝色鲜红、边缘锐利、质韧; 模型组大鼠肝外观呈奶油黄或红黄相间, 体积明显增大, 边缘变钝, 质地变软, 切面略带油腻感. 药物防治组肝外观均接近对照组. 光镜下正常组大鼠肝小叶清晰, 肝细胞索排列整齐, 模型组肝小叶中央静脉区小泡状脂肪变, 小叶内及汇管区灶性炎细胞浸润(图1); 高倍镜下, 大鼠肝小叶中心带肝细胞中出现大小不等的脂肪滴, 一些肝细胞核则被脂肪滴挤得明显偏位(图2). 肝脂复组肝病理学改变较模型组显著减轻(图3-6), 二甲双胍组较模型组亦有明显改变(图7, 8).

图1 模型组大鼠肝脏病理改变. HE×100.

图2 模型组大鼠肝脏病理改变. HE×400.

图3 肝脂复组大鼠肝脏病理改变. HE×100.

图4 肝脂复组大鼠肝脏病理改变. HE×400.

图5 肝脂复组大鼠肝脏病理改变. HE×100.

图6 肝脂复组大鼠肝脏病理改变. HE×400.

图7 二甲双胍组大鼠肝脏病理改变. HE×100.

图8 二甲双胍组大鼠肝脏病理改变. HE×400.

3 讨论

脂肪肝目前缺乏有效防治的药物[13-16]. 肝脂复煎剂成分为虎杖、大黄、柴胡, 其中虎杖、大黄苦寒, 既可清热解毒燥湿, 又可活血化瘀, 柴胡调肝理气. 现代研究也表明, 对酒精性肝病的治疗, 活血化瘀的方剂可以奏效[17]. 肝脏组织切片镜检结果表明, 肝脂复3个剂量组肝脏脂肪变性程度都比模型组明显减轻. 肝脂复高剂量是低剂量的4倍; 不同剂量肝脂复对于脂肪肝的影响有较大差异. 低剂量组改善肝功能效果较好, 而降低血脂效果不明显; 高剂量组降低血脂效果优于低剂量组, 但对肝功能改善不如低剂量组, 提示脂肪肝和高脂血症的发生并不平行[18-21]. 肝脏是药物代谢的主要器官, 尚无降脂药物有效防治脂肪肝的足够证据[22], 并且, 脂肪化的肝脏比正常肝脏更不耐受降血脂药物治疗. 在综合治疗的基础上, 酌情应用降血脂药物, 但需适当减量和监测肝功能. 因此, 脂肪肝的治疗不应滥用降脂药物[23].

实验采用文献[24]报道的造模方法, 加以改进, 成功地制造出大鼠的脂肪肝模型.模型组肝小叶中央静脉区小泡状脂肪变; 血清学指标也表明模型组GGT、ALP均高于正常组, 具有显著性差异(P<0.05), 说明本研究模型复制成功[25-26]. 其中ALT、AST未见明显差异, 有资料显示脂肪肝患者的此两项指标可仅轻度增高[27], 而GGT是反映肝细胞功能的敏感指标[28-29]. 因此, GGT常作为酒精所引起脂肪肝的重要监测指标[30-31].

肝脏是血清胆固醇的重要来源, 有极旺盛的胆固醇合成能力, 在肝细胞功能受损时, 从其处理血浆脂蛋白和合成胆固醇到组装血浆脂蛋白的全过程, 都可发生障碍, 血清胆固醇可不升高. 实验中, 大鼠长期灌入乙醇, 肝细胞功能受损, 故血清总胆固醇未见明显升高. 而血清甘油三酯显著增高, 与文献[32]报道一致. 肝脏甘油三酯明显增多、沉积, 可能与酒精灌胃和高脂喂养有关. 二甲双胍能促进肝细胞脂蛋白合成转运, 减少甘油三酯在肝脏沉积, 实验中, 二甲双胍组肝脏甘油三酯含量与模型组比较显著降低, 但未显示出明显的降低血脂和改善肝功能的作用, 与文献报道不一致, 可能与样本较少, 用药剂量及疗程不足等有关. 实验结果证明, 肝脂复煎剂对大鼠脂肪肝有良好的防治作用. 但用药组无1例能达到治愈脂肪肝的目的, 这可能与实验中用药同时仍持续高脂饮食和酒精饲养有关.

备注

编辑: N/A

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