不同消化道癌对化疗药物敏感性的应用研究

摘要

目的: 通过常见消化道癌对不同抗癌药物以及不同联合用药方案的敏感性作比较, 以期寻找各自的合理的化疗用药方案, 从而指导不同消化道癌的化疗.

方法: 通过肿瘤细胞体外药敏试验(即四甲基偶氮唑盐着色法. MTT), 对97例食管癌、116例胃癌、34例肝癌以及169例大肠癌新鲜标本进行化疗药物敏感性检测, 并对其结果作比较.

结果: 除对丝裂霉素(mitomycin C, MMC)、顺氯氨铂(cisplatin, DDP)、5-氟尿嘧啶(5-flurouracil, 5-FU) 加DDP的敏感性无差异外(P>0.05), 对其余所有药物的敏感性均有显著性差异(P<0.01), 其中, 食管癌、胃癌及大肠癌均对5-FU加羟基喜树碱(hydroxycamptothecine, HCPT.OPT) 、5-FU加MMC最敏感, 其敏感率分别为79.4%和73.2%、78.4%和62.7%、60.4%和55.6%,肝癌则对5-FU加MMC及5-FU加柔红霉素(aunorubicin, DNR)最敏感, 其敏感率分别为70.5%和79.4%.

结论: 不同的消化道肿瘤对不同抗癌药物的敏感性存在差异, 且联合药物的敏感性优于单药.

关键词: N/A

N/A

N/A

Correspondence to: N/A

Received: June 5, 2003
Revised: July 1, 2003
Accepted: July 8, 2003
Published online: April 15, 2004

Abstract

N/A

Key Words: N/A

0 引言

如何选择对某一种具体肿瘤有效的抗癌药物, 提高术后化疗效果, 并寻找用药规律, 一直是临床肿瘤化疗界关注的问题. 我们采用MTT法对416例不同消化道癌进行体外原代细胞培养和药物持续作用法, 检测其对化疗药物的敏感性, 并进行比较, 以期指导消化道肿瘤患者的临床化疗用药.

1 材料和方法

1.1 材料

消化道恶性肿瘤(均经病理学证实, 且术前、术中未使用抗癌药物)416例, 食管癌97例, 男71例, 女26例, 年龄29-77岁; 胃癌116例, 男85例, 女31例, 年龄25-73岁; 原发性肝细胞癌34例, 男25例, 女9例, 年龄28-69岁; 大肠癌169例, 男97例, 女72例, 年龄20-79岁. CO₂细胞培养箱(美国Forma Sicentific生产); 96孔细胞培养板(丹麦Nunc公司生产); 100 mL/L小牛血清(购自杭州四季青公司); MTT(美国Sigma公司); 二甲亚砜(dimethlysulfoxide, DMSO购自重庆东风试剂厂); RPMI1640(美国GIBCO公司); 5-FU(上海旭东海普药业公司); MMC(日本协和发酵工业株式会社), HCPT(湖北美尔雅美升药业有限公司提供); 阿霉素(doxorubicin, 浙江海正药业股份有限公司); CDDP (山东齐鲁制药厂).

1.2 方法

术中切除消化道恶性肿瘤后, 自癌细胞生长旺盛的肿瘤边缘处切取约1.5 cm³瘤组织, 放入适量的双抗液(含青霉素100 kU/mL、链霉素100 mg/L)中, 常规修剪去除肿瘤周围坏死组织及非肿瘤组织, 尔后剪碎肿瘤组织并用200目不锈钢滤网制成肿瘤单细胞悬液, 离心后弃上清夜(1 000 r/min, 10 min, 以下同), 用含100 mL/L小牛血清的RPMI1640液调整细胞浓度为5×10^7-8/L, 种植于无菌96孔培养板上, 每孔200 L(重庆医科大学学报, 1992; 17(2): 103). 癌细胞药敏试验设试剂对照(含100 mL/L小牛血清的RPMI1640液各200 L分别加入培养板第1列的8个平行孔, 在结果判断时以排除试剂对实验的影响), 肿瘤细胞阴性对照(未加抗癌药物的肿瘤单细胞悬液各200 L 分别加入培养板第2列的8个平行孔), 各种抗癌药物试验组(每种药物有3个平行孔), 每孔加药量为20 L, 终浓度为各抗癌药物血峰浓度的1/10. 将培养板置于37 ℃ 100 mL/L CO₂及饱和湿度的细胞培养箱中培养68 h后, 取出离心弃上清夜,每孔加入不完全培养液200 L, MTT (5 g/L) 20 L, 继续培养4 h, 取出再离心弃上清液, 每孔加DMSO 200 L, 微量振荡器振荡5 min, 在578 nm波长自动酶标仪上进行比色、读数, 测出每孔吸光度(A)值. 药物对肿瘤细胞抑制率=[1-(药物孔平均A值/肿瘤细胞阴性对照孔平均A值)]×100%, 大于70%为敏感, 50%-70%为中度敏感, 小于50%为不敏感(耐药); 中度敏感和敏感归为阳性, 不敏感归为阴性, 敏感率(%)则为阳性病例与该组总病例相除的百分率.

统计学处理 采用SAS统计软件对本组计数资料进行χ²检验.

2 结果

本组4种不同的消化道癌除对DDP, MMC及5-FU加DDP的敏感性差异无统计学意义外(P>0.05), 对其余所有药物的敏感性差异均有显著性统计学意义(P<0.01). 其中, 食管癌、胃癌及大肠癌对单药组的敏感性均以HCPT和MMC为好, 其敏感率分别为61.9%和57.7%、59.5%和53.4%、48.5%和51.0%, 对联合药物组的敏感性均以5-FU加HCPT和5-FU加MMC为好, 其敏感率分别为79.4%和73.2%、78.4%和62.7%、60.4%和55.6%; 而肝癌对单药组的敏感性则以MMC和DNR为好, 其敏感率分别为50.0%和55.9%, 对联合药物组的敏感性则以5-FU加HCPT, 5-FU加MMC和5-FU加DNR为好, 其敏感率分别为70.5%、79.4%、79.4%(表1).

表1 消化道癌416例对化疗药物的敏感性(n,%).

测试药物	食管癌(n =97)		胃癌(n =116)		肝癌 (n =34)		大肠癌(n =169)		χ2值	P值
	敏感数	敏感数	敏感数	敏感数	敏感数	敏感数	敏感数	敏感数
5-FU	25	25.77	48	41.38	7	20.59	64	37.87	12.48	0.006
HCPT	60	61.86	69	59.48	11	32.35	82	48.52	16.67	0.001
DDP	39	40.21	32	27.59	13	38.24	58	34.32	4.06	0.255
MMC	56	57.73	62	53.45	17	50.00	86	50.89	1.31	0.728
DOX	15	15.46	26	22.41	16	47.06	40	23.67	14.13	0.003
DNR	24	24.74	46	39.66	19	55.88	51	30.18	15.82	0.001
5-FU+HCPT	77	79.38	91	78.45	24	70.59	102	60.36	16.71	0.001
5-FU+DDP	45	46.39	50	43.10	14	41.18	85	50.30	1.95	0.582
5-FU+MMC	71	73.20	72	62.07	27	79.41	94	55.62	13.98	0.003
5-FU+DOX	23	23.71	39	33.62	23	67.65	46	27.22	25.00	0.001
5-FU+DNR	31	31.96	57	49.14	27	79.41	79	46.75	23.37	0.001

3 讨论

消化道癌是人类最常见的恶性肿瘤[1-5], 在我国不同地区食管癌[6]、胃癌[7-8]、原发性肝癌[9-10]、大肠癌[11-12]的发病率尚在逐年增加, 其死亡率仍居高不下; 治疗原则仍是以手术为主的综合治疗, 而化疗疗效并不甚理想. 研究表明[13-15], 肿瘤细胞体外药敏试验结果与体内疗效的符合率高达80%以上, MTT试验结果为阴性者, 用药不敏感(耐药), 我们采用MTT法实验, 结合近年临床消化道肿瘤常用的以5-FU, HCPT 等为代表的6种抗癌药物及其各种组合方案, 对我院近年收治的416例临床消化道癌实施肿瘤细胞体外药敏筛选, 并将不同种类的消化道肿瘤对同一种药物或方案的敏感性差异进行比较, 结果显示: 本组4种不同的消化道肿瘤除对DDP, MMC及5-FU加DDP的敏感性无差异外(P>0.05), 对其余所有药物的敏感性均有显著性差异(P<0.01); 其中, 食管癌、胃癌及大肠癌对单药组的敏感性均以HCPT和MMC为好, 其敏感率分别为61.9%和57.7%, 59.5%和53.5%, 48.5%和51.0%, 对联合药物组的敏感性均以5-FU加HCPT和5-FU加MMC为好, 其敏感率分别为79.4%和73.0%, 78.5%和62.7%, 60.4%和55.6%, 而肝癌对单药组的敏感性则以MMC和DNR为好, 其敏感率分别为50.0%和55.9%, 对联合药物组的敏感性则以5-FU加HCPT, 5-FU加MMC和5-FU加DNR为好, 其敏感率分别为70.5%, 79.4%, 79.4%; 本结果表明: 不同的消化道肿瘤对同一种化疗药物或同一种化疗药物组合方案的敏感性存在差异, 单药组间, 食管癌及胃癌均以对HCPT的敏感性最好, 肝癌以对DNR的敏感性最好, 大肠癌以对MMC的敏感性最好; 联合药物组间, 食管癌、胃癌及大肠癌均以对5-FU加HCPT的敏感性最好, 肝癌以对5-FU加MMC和5-FU加DNR的敏感性最好; 联合药物组的敏感性均明显优于单药组的敏感性, 表明对消化道肿瘤患者进行化疗时应尽量选择联合用药的方案; 单一使用5-FU、DDP及DOX的敏感性均低, 与唐亚辉et al[15]的结果差异较大, 是否与实验操作方法、选择肿瘤细胞浓度甚至肿瘤患者的地区差异(肿瘤耐药性的个体差异)等因素有关尚不清楚, 应引起临床消化道肿瘤医师的重视; 有3例食管癌、5例胃癌、2例肝癌及6例大肠癌对所有受试药物均不敏感(耐药), 具体原因不清楚, 尚待深入研究.

备注

编辑: N/A

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