修回日期: 2003-11-06
接受日期: 2003-12-08
在线出版日期: 2004-03-15
目的: 研究生长抑素类似物奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的作用.
方法: 取人胃癌细胞株SGC-7901, 体外培养后以处于对数生长的细胞制成单细胞悬液, 加入不同浓度的奥曲肽, 以MTT法进行细胞增生试验, 并以不含药物的培养液为阴性对照; 通过HE染色和电子显微镜观察细胞形态, 通过流式细胞仪测定SGC-7901细胞周期和凋亡率.
结果: 奥曲肽在一定浓度范围内(160-480 mg/L)对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用(与对照组比较, 均P<0.001), 并存在量效关系和饱和性, 最大抑制率为25.4% (奥曲肽浓度400 mg/L). 奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡, HE染色见奥曲肽作用48 h, 细胞开始出现凋亡的形态学改变, 72 h凋亡细胞明显增多, 电镜下见有典型的凋亡小体出现. 流式细胞仪分析可见G1峰前出现亚二倍体峰, 凋亡率为 9.42%±5.29% (P<0.05).
结论: 奥曲肽在体外能抑制人胃癌细胞株SGC-7901细胞的生长, 其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
引文著录: 吕宾, 徐毅, 丁志山. 奥曲肽对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的影响. 世界华人消化杂志 2004; 12(3): 527-529
Revised: November 6, 2003
Accepted: December 8, 2003
Published online: March 15, 2004
AIM: To observe the effects of somatostatin analog (octreotide) on the growth and apoptosis of gastric cancer cell line.
METHODS: The proliferation of gastric cancer cell line SGC-7901 was determined in octreotide groups and control group by MTT. The cell morphology was observed under HE staining and electron microscopy. The cell cycle and apoptosis ratio were measured using flow cytometry analysis.
RESULTS: The growth of gastric cancer cell line SGC-7901 was significantly inhibited by octreotide with 160-480 mg/L (vs controls, P < 0.001), and the maximal inhibitory rate was 25.4%. Morphological variations of apoptosis were observed at 48 hours treated with octreotide by HE staining and apoptosis body was observed under electron microscope. Apoptotic rate was 9.42%±5.29% (P < 0.05).
CONCLUSION: Octreotide can suppress the growth of gastric cancer cell line SGC-7901 and induce apoptosis of the cells.
- Citation: Lu B, Xu Y, Ding ZS. Effect of octreotide on growth and apoptosis of human gastric cancer cell line SGC-7901. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2004; 12(3): 527-529
- URL: https://www.wjgnet.com/1009-3079/full/v12/i3/527.htm
- DOI: https://dx.doi.org/10.11569/wcjd.v12.i3.527
生长抑素对机体几乎所有分泌功能起抑制作用[1-4], 生长抑素类似物奥曲肽能抑制多种肿瘤的生长[5-7], 胃癌细胞有生长抑素受体表达[8], 因此在理论上生长抑素能通过受体对胃癌细胞发挥相应作用. 为了探讨奥曲肽治疗胃癌的可能性, 我们通过体外实验研究奥曲肽对胃癌细胞生长和凋亡的影响.
人胃癌细胞株SGC-7901(中科院上海细胞所), 维护于含100 ml/L小牛血清和3 g/L谷氨酰胺的PRMI 1640培养液中, 另加青、链霉素各100 ku/L, 置于37 ℃、50 ml/L CO2及饱和湿度的培养箱中培养. 实验用药为生长抑素类似物-奥曲肽(北京诺华制药公司).
1.2.1 细胞增生试验MTT法: 取状态良好、处于对数生长期的SGC-7901细胞, 用2.5 g/L trypin+0.1 g/L EDTA消化后制成1×107 /L的单细胞悬液, 以每孔200 L接种于96孔平底培养板中, 置于37℃、50 ml/L CO2及饱和湿度的培养箱中, 24 h后加入不同浓度的奥曲肽(浓度分别为80, 160, 280, 400, 480 g/L, 由无血清PRMI1640培养液将奥曲肽母液稀释而成). 50 ml/L小牛血清, 以不含药物的培养液为阴性对照. 实验组及对照组均设8个复孔, 培养48 h后, 每孔加入新配制的MTT液(5 g/L)20 L, 置于孵育箱内4 h后, 吸去培养液, 每孔加入DMSO 150 L, 用酶标仪于492 nm波长测吸光度(A)值, 细胞存活率=实验组A值/对照组A值×100%.
1.2.2 HE染色和电子显微镜观察: 取状态良好的处于对数生长期的细胞, 2.5 g/L trypin消化后, 制成1×108 /L的单细胞悬液, 每瓶3 mL接种于含玻片的培养瓶中, 置于37 ℃、50 ml/L CO2及饱和湿度的培养箱, 24 h后加入奥曲肽, 分别于48 h和72 h后乙醇固定5 min, 苏木精染液染色1 min, 自来水冲洗, 晾干, 封片, 油镜下观察. 细胞培养24 h后加入奥曲肽, 72 h后取5×106个细胞, PBS洗涤细胞2遍, 30 ml/L戊二醛固定4 h, 10 g/L锇酸固定1 h, 梯度丙酮脱水, 树脂包埋, LKB-NOVa热膨胀式超薄切片机, 厚度500 nm, 醋酸铀、枸橼酸铅双染色法染色, JEM100CX-Ⅱ透射式电子显微镜下观察.
1.2.3 流式细胞仪测定: 细胞培养24 h后加入奥曲肽, 48 h后, 弃去培养液, 2.5 g/L trysin+0.1 g/L EDTA消化, 收集细胞, 制成单细胞悬液, PBS洗2次(5 000 r/min)调节细胞密度为1×109/L, 700 ml/L冰乙醇固定24 h后取单细胞悬液100 L置试管中, 加PI溶液50 L, 室温避光30 min, 加PBS溶液400 L, 上机行流式细胞仪测定SGC-7901细胞DNA含量, 并以流式细胞仪随机软件分析, 以加入二甲基亚砜的细胞组为阴性对照, 试验和对照组各设4个样本.
统计学处理 应用SPSS10.0统计软件包统计, 结果以平均值±标准差(mean±SD)表示, 采用t检验进行统计学分析.
奥曲肽对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用, 其抑制率随着药物浓度的增高而增大, 最大抑制率可达25% (表1). 提示奥曲肽对胃癌SGC-7901细胞的体外抑制作用存在量效关系.
奥曲肽作用后48 h细胞开始出现凋亡的形态学改变, 72 h凋亡细胞明显增多, 通过HE染色, 可看到较为典型的细胞凋亡形态学改变: 细胞核固缩, 染色质凝集, 呈新月形紧贴于核膜周边, 核破裂, 染色质片断化, 凋亡小体形成(图1). 电镜下见凋亡细胞的核染色质浓聚成颗粒状或条索状, 聚集在核膜下, 内质网扩张, 出现空泡, 有典型的凋亡小体形成(图2).
流式细胞仪检测显示, 当奥曲肽浓度达到160 g/L时, DNA直方图上可见G1峰前出现亚二倍体峰(凋亡峰), 浓度升至280和480 g/L, 凋亡峰更为明显. 奥曲肽对细胞周期和凋亡均有影响(表2).
胃癌的生长受许多因素影响, 有研究显示, 五肽胃泌素能促进胃癌细胞株HGC808、HGC823的生长, 增加氨基己糖的含量, 而生长抑素则能抑制胃癌细胞的生长和分泌胃泌素、胰高糖素, 降低氨基己糖的含量[9]. 我们的实验显示, 奥曲肽对胃癌细胞SGC-7901的体外生长具有抑制作用, 随剂量增大抑制作用增强, 最大抑制率达25%. 建立裸鼠人胃癌原位移植瘤模型, 以奥曲肽皮下注射8 wk, 发现抑瘤率达62.3%, 凋亡指数为18.3%±2.7%, 而且胃癌组织及胃癌细胞株均有生长抑素受体SSTR-2、SSTR-3 基因的表达, 结果提示奥曲肽通过SSTR-2和SSTR-3介导有效地抑制胃癌生长[10].
生长抑素可诱导乳腺癌细胞、大肠癌细胞、肝癌细胞凋亡. 在我们的实验中, 经HE染色和电子显微镜检查, 肿瘤细胞在生长抑素作用下, 48 h开始出现凋亡的形态学改变, 72 h凋亡细胞明显增多. HE染色和电子显微镜均可看到较为典型的细胞凋亡形态学改变. 流式细胞仪检查在DNA直方图上G1峰前出现凋亡峰, 细胞周期分析表明, SGC-7901细胞经生长抑素作用后, 细胞被阻滞于G0/G1期, S期和G2/M期细胞明显减少, 细胞凋亡率为9.4%±5.3%, 表明生长抑素可以通过诱导凋亡的途径抑制肿瘤细胞的生长. 有研究显示, 在高、中分化胃癌组织中生长抑素高表达, 凋亡指数高, 而在低分化腺癌和黏液腺癌中生长抑素呈低表达, 提示生长抑素具有抗增生促凋亡作用[11].
生长抑素通过肿瘤表面的生长抑素受体直接抑制肿瘤增生. 生长抑素受体有1-5型, 在不同的肿瘤细胞中表达不同, 在胃癌表面有生长抑素受体的表达. 伴有腹腔淋巴结转移的胃癌, 其癌组织生长抑素Ⅱ型受体基因表达低下, 提示生长抑素在胃癌的发生发展过程中起一定的作用, 而Ⅱ型生长抑素受体表达减少可能与胃癌的转移有关[12]. 通过免疫组化研究胃癌组织中生长抑素和表皮生长因子的表达, 并对预后进行随访, 发现生长抑素阳性胃癌其表皮生长因子受体的表达明显减少, 而生长抑素阴性表达的表皮生长因子阳性胃癌预后差, 提示生长抑素可能通过干扰生长因子的合成而抑制胃癌生长[13]. 总之, 生长抑素抑制肿瘤细胞生长的机制尚不明确, 可能的机制有诱导肿瘤细胞凋亡和内分泌途径等一系类机制抑制肿瘤生长.
编辑: N/A
| 2. | Li YY. Mechanisms for regulation of gastrin and somatostatin release from isolated rat stomach during gastric distention. World J Gastroenterol. 2003;9:129-133. [PubMed] [DOI] |
| 3. | Yao YL, Xu B, Zhang WD, Song YG. Gastrin, somatostatin, and experimental disturbance of the gastrointestinal tract in rats. World J Gastroenterol. 2001;7:399-402. [PubMed] [DOI] |
| 4. | Zhang ZF, Wang ZL, Lu GQ. Peripheral mechanism of inhibitory effect of centrally administrated histamine on gastric acid secretion. World J Gastroenterol. 1998;4:222-224. [PubMed] [DOI] |
| 5. | de Herder WW, Lamberts SW. Somatostatin and somatostatin analogues: diagnostic and therapeutic uses. Curr Opin Oncol. 2002;14:53-57. [PubMed] [DOI] |
| 6. | Froidevaux S, Eberle AN. Somatostatin analogs and radiopeptides in cancer therapy. Biopolymers. 2002;66:161-183. [PubMed] [DOI] |
| 7. | Wang CH, Tang CW, Liu CL, Tang LP. Inhibitory effect of octreotide on gastric cancer growth via MAPK pathway. World J Gastroenterol. 2003;9:1904-1908. [PubMed] [DOI] |