研究快报 Open Access
Copyright ©The Author(s) 2004. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2004-11-15; 12(11): 2747-2749
在线出版日期: 2004-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i11.2747
乌斯他丁对急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用
李旭, 石力, 赵碧, 田伏洲, 黄大熔
李旭, 石力, 田伏洲, 黄大熔, 成都军区总医院全军普外中心 四川省成都市 610083
赵碧, 成都军区总医院临床实验科 四川省成都市 610083
通讯作者: 田伏洲, 610083, 四川省成都市, 成都军区总医院全军普外中心. lishi@mail.sc.cninfo.net
收稿日期: 2004-07-28
修回日期: 2004-09-13
接受日期: 2004-09-29
在线出版日期: 2004-11-15

目的: 观察乌斯他丁(ulinastatin, UTI)对急性胰腺炎大鼠肝脏核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)的抑制及其对肝损伤的损伤保护作用.

方法: Wistar大鼠72只, 随机分为: 急性胰腺炎组(AP), 急性胰腺炎UTI治疗组(APU)和假手术组(SO). 分别于术后3, 6, 12, 24 h检测肝组织中NF-κB活性、血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平.

结果: SO组术后未见NF-κB活化, 血浆ALT及肝脏病理无显著变化. 与SO组相比, AP组术后3, 6 h NF-κB活性(积分灰度)显著增加(3.13±0.57 vs 0.71±0.10, 1.92±0.26 vs 0.67±0.11, P<0.01), 血浆ALT在3-24 h也显著高于SO组(1.1±0.2 vs 0.7±0.09, 1.6±0.2 vs 0.7±0.1, 2.4±0.4 vs 0.7±0.09, 3.5±0.7 vs 0.8±0.1, P<0.01). APU组NF-κB活性在3, 6 h后显著低于AP组(2.26±0.41 vs 3.13±0.57, 1.56±0.23 vs 1.92±0.26, P<0.01), 血浆ALT较AP组在6, 12, 24 h后也有了显著下降(1.2±0.2 vs 1.6±0.2, 1.8±0.3 vs 2.4±0.4, 2.5±0.5 vs 3.5±0.7, P<0.01或P<0.05).

结论: UTI能够抑制NF-κB活化, 对急性胰腺炎大鼠肝损伤具有保护作用.

关键词: N/A
引文著录: 李旭, 石力, 赵碧, 田伏洲, 黄大熔. 乌斯他丁对急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用. 世界华人消化杂志 2004; 12(11): 2747-2749
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: July 28, 2004
Revised: September 13, 2004
Accepted: September 29, 2004
Published online: November 15, 2004

N/A

Key Words: N/A
0 引言

急性胰腺炎肝损伤发生过程中, 有着许多炎性因子的参与[1-2]. 而核因子κB则是一类主要参与机体炎性分子表达调控的转录因子[3-5], 他参与了急性胰腺炎肝损伤发生过程[6]. 我们观察了大鼠急性胰腺炎发生时, 乌斯他丁(UTI)对NF-κB活化的抑制作用以及由此而产生的对肝损伤的保护作用.

1 材料和方法
1.1 材料

Wistar大鼠72只, 雌雄不限, 体质量200-250 g, 随机分为3组: (1)急性胰腺炎组(AP组, 24只): 用3 g/L戊巴比妥钠ip麻醉(10 mL/kg), 上腹部正中切口入腹, 经十二指肠穿刺胆管成功后, 以无创血管夹阻断肝门部胆管, 向胰管内逆行注入50 g/L牛磺胆酸钠(1 mL/kg), 注射完毕后松开血管夹, 关腹, 皮下注射生理盐水2 mL, 以补充术中丢失水分; (2)急性胰腺炎UTI治疗组(APU组, 24只): 诱导胰腺炎前1 h ip UTI(10万u/kg); (3)假手术组(SO组, 24只): 操作方法同1, 但不向胰管内注入牛磺胆酸钠. 各组分别在术后3, 6, 12, 24 h再次开腹, 经下腔静脉采血约5 mL, 置于肝素钠抗凝瓶中, 离心(2 000 r/min, 1 min), 取上清冻存; 并取大小约0.5 cm3肝中叶组织二块, 一块浸泡于40 g/L多聚甲醛中, 另一块置于液氮中保存.

1.2 方法

1.2.1 肝组织NF-κB活性: 参照文献介绍的方法对肝组织进行核蛋白提取, 并用考马斯亮蓝测定蛋白浓度, 调蛋白浓度为0.5 μg/L后置于-70 ℃保存. 以γ-32P在T4激酶的作用下标记NF-κB探针, 探针序列为5'-AGTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3'. 将标记的探针同肝组织核蛋白进行结合后, 置于非变性聚丙稀酰胺凝胶中电泳并进行放射自显影, 用凝胶扫描分析仪对显影结果进行分析, 以积分灰度值表示NF-κB的活性变化.

1.2.2 血浆丙氨酸氨基转移酶: 用自动生化分析仪(Bckman CX7)进行ALT检测.

统计学处理 结果以mean±SD表示, 组间行t检验, P<0.05为差异有显著意义; P<0.01为差异有极显著意义.

2 结果
2.1 肝组织NF-κB活性

除SO组外, 其余2组在术后3 h, 肝组织中NF-κB存在显著活化, 6 h后活化程度下降, 但仍显著高于SO组(P<0.01), 术后12 h NF-κB活化程度则明显下降, 同SO组相比无显著差异(P>0.05), 至24 h活化消失. 其中AP组NF-κB活化程度在3-6 h均显著高于APU组(P<0.01, 表1).

表1 急性胰腺炎大鼠肝组织NF-κB活性的积分灰度值(mean±SD, n = 24).
分组t(术后)/h
3612
AP3.13±0.571.92±0.260.8±0.12
APU2.26±0.41b1.56±0.23b0.75±0.10
SO0.71±0.100.67±0.110.69±0.11
bP<0.01 vs AP, SO组.
2.2 血浆ALT

SO组ALT术后无明显变化, AP及APU组ALT在术后3-24 h均呈持续性上升, 显著高于SO组(P<0.01). 但6 h后APU组ALT明显低于AP组(P<0.05或P<0.01, 表2).

表2 急性胰腺炎大鼠血浆ALT(mean±SD, n = 24, kat/L).
分组t(术后)/h
361224
AP1.1±0.21.6±0.22.4±0.43.5±0.7
APU1.2±0.11.2±0.2c1.8±0.3d2.5±0.5d
SO0.7±0.09 b0.7±0.1b0.7±0.09b0.8±0.1b
bP<0.01 vs AP和APU组;
cP<0.05,
dP<0.01 vs AP组.
3 讨论

急性胰腺炎常合并全身多脏器功能损害, 而肝脏则是最常受累的器官之一, 急性胰腺炎所引起的肝损害不但可以加重胰腺炎病情, 肝功能的好坏还直接关系到其他脏器并发症的出现与否. 核因子κB是一类能与某些基因启动子及增强子区的κB序列结合的蛋白质, 他能启动或增强这些基因的转录[7-9]. 在静息的细胞中, NF-κB以无活性的形式存在于细胞质之中, 当受到一定的刺激后, NF-κB发生活化, 活化的NF-κB于是发生核易位, 同靶基因启动子或增强子上的κB结合位点, 从而启动或增强这些基因的转录[10-13]. 研究表明, NF-κB可以促进与炎症有关的多种基因的转录[14-19], 从而参与多种原因引起的组织损伤过程[20-25], 在急性胰腺炎发生过程中, 肝组织中NF-κB发生了显著活化, 活化的NF-κB参与了肝损伤的发生[6].

乌斯他丁是一种从人的尿液中提取出来的蛋白多肽, 他具有抑制多种酶活性、清除氧自由基、抑制炎症递质释放的作用. Itabashi et al[26]发现, 乌斯他丁能够抑制肝脏ICAM-1以及CNCI表达, 降低血浆TNF-α浓度. Aosasa et al[27]则证明乌斯他丁可以抑制LPS刺激下的单核细胞NF-κB的激活, 降低TNF-α表达. 本实验结果显示, APU组在术后3-6 h NF-κB活化程度显著低于AP组, 与此同时, 血浆ALT在术后6-24 h也显著低于AP组. 这就说明UTI对急性胰腺炎肝损伤具有保护作用, 其产生作用的机制可能与抑制NF-κB活化有关.

编辑:N/A

1.  Jaffray C, Yang J, Norman J. Elastase mimics pancreatitis-induced hepatic injury via inflammatory mediators. J Surg Res. 2000;90:95-101.  [PubMed]  [DOI]
2.  Hori Y, Takeyama Y, Ueda T, Shinkai M, Takase K, Kuroda Y. Macrophage-derived transforming growth factor-beta1 induces hepatocellular injury via apoptosis in rat severe acute pancreatitis. Surgery. 2000;127:641-649.  [PubMed]  [DOI]
3.  Li YY, Gao ZF. Acute pancreatitis and NF-κB. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2001;9:420-421.  [PubMed]  [DOI]
4.  Suk K, Yeou Kim S, Kim H. Regulation of IL-18 production by IFN gamma and PGE2 in mouse microglial cells: involvement of NF-?B pathway in the regulatory processes. Immunol Lett. 2001;77:79-85.  [PubMed]  [DOI]
5.  Izumi T, Saito Y, Kishimoto I, Harada M, Kuwahara K, Hamanaka I, Takahashi N, Kawakami R, Li Y, Takemura G. Blockade of the natriuretic peptide receptor guanylyl cyclase-A inhibits NF-kappaB activation and alleviates myocardial ischemia/reperfusion injury. J Clin Invest. 2001;108:203-213.  [PubMed]  [DOI]
6.  Shi L, Huang DR, Tian FZ, Wang Y, Ma JX, Li XJ, Yin ZL. The relationship between hepatic NF-κB activation and liver injury in rats with acute pancreatitis. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2002;10:554557.  [PubMed]  [DOI]
7.  Antonelli A, Bianchi M, Crinelli R, Gentilini L, Magnani M. Modulation of ICAM-1 expression in ECV304 cells by macrophage-released cytokines. Blood Cells Mol Dis. 2001;27:978-991.  [PubMed]  [DOI]
8.  Ginis I, Jaiswal R, Klimanis D, Liu J, Greenspon J, Hallenbeck JM. TNF-alpha-induced tolerance to ischemic injury involves differential control of NF-kappaB transactivation: the role of NF-kappaB association with p300 adaptor. J Cereb Blood Flow Metab. 2002;22:142-152.  [PubMed]  [DOI]
9.  Wright G, Singh IS, Hasday JD, Farrance IK, Hall G, Cross AS, Rogers TB. Endotoxin stress-response in cardiomyocytes: NF-kappaB activation and tumor necrosis factor-alpha expression. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002;282:H872-H879.  [PubMed]  [DOI]
10.  Lakshminarayanan V, Lewallen M, Frangogiannis NG, Evans AJ, Wedin KE, Michael LH, Entman ML. Reactive oxygen intermediates induce monocyte chemotactic protein-1 in vascular endothelium after brief ischemia. Am J Pathol. 2001;159:1301-1311.  [PubMed]  [DOI]
11.  Moine P, McIntyre R, Schwartz MD, Kaneko D, Shenkar R, Le Tulzo Y, Moore EE, Abraham E. NF-kappaB regulatory mechanisms in alveolar macrophages from patients with acute respiratory distress syndrome. Shock. 2000;13:85-91.  [PubMed]  [DOI]
12.  Valen G, Yan ZQ, Hansson GK. Nuclear factor kappa-B and the heart. J Am Coll Cardiol. 2001;38:307-314.  [PubMed]  [DOI]
13.  Omoya T, Shimizu I, Zhou Y, Okamura Y, Inoue H, Lu G, Itonaga M, Honda H, Nomura M, Ito S. Effects of idoxifene and estradiol on NF-kappaB activation in cultured rat hepatocytes undergoing oxidative stress. Liver. 2001;21:183-191.  [PubMed]  [DOI]
14.  Altavilla D, Saitta A, Guarini S, Galeano M, Squadrito G, Cucinotta D, Santamaria LB, Mazzeo AT, Campo GM, Ferlito M. Oxidative stress causes nuclear factor-kappaB activation in acute hypovolemic hemorrhagic shock. Free Radic Biol Med. 2001;30:1055-1066.  [PubMed]  [DOI]
15.  Shames BD, Barton HH, Reznikov LL, Cairns CB, Banerjee A, Harken AH, Meng X. Ischemia alone is sufficient to induce TNF-alpha mRNA and peptide in the myocardium. Shock. 2002;17:114-119.  [PubMed]  [DOI]
16.  Wang Z, Castresana MR, Detmer K, Newman WH. An IkappaB-alpha mutant inhibits cytokine gene expression and proliferation in human vascular smooth muscle cells. J Surg Res. 2002;102:198-206.  [PubMed]  [DOI]
17.  Theuer J, Dechend R, Muller DN, Park JK, Fiebeler A, Barta P, Ganten D, Haller H, Dietz R, Luft FC. Angiotensin II induced inflammation in the kidney and in the heart of double transgenic rats. BMC Cardiovasc Disord. 2002;2:3.  [PubMed]  [DOI]
18.  Helin E, Vainionpää R, Hyypiä T, Julkunen I, Matikainen S. Measles virus activates NF-kappa B and STAT transcription factors and production of IFN-alpha/beta and IL-6 in the human lung epithelial cell line A549. Virology. 2001;290:1-10.  [PubMed]  [DOI]
19.  Zhang XY, Shimura S, Masuda T, Saitoh H, Shirato K. Antisense oligonucleotides to NF-kappaB improve survival in bleomycin-induced pneumopathy of the mouse. Am J Respir Crit Care Med. 2000;162:1561-1568.  [PubMed]  [DOI]
20.  Ross SD, Kron IL, Gangemi JJ, Shockey KS, Stoler M, Kern JA, Tribble CG, Laubach VE. Attenuation of lung reperfusion injury after transplantation using an inhibitor of nuclear factor-kappaB. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2000;279:L528-L536.  [PubMed]  [DOI]
21.  Jaffray C, Yang J, Carter G, Mendez C, Norman J. Pancreatic elastase activates pulmonary nuclear factor kappa B and inhibitory kappa B, mimicking pancreatitis-associated adult respiratory distress syndrome. Surgery. 2000;128:225-231.  [PubMed]  [DOI]
22.  Kono H, Rusyn I, Yin M, Gäbele E, Yamashina S, Dikalova A, Kadiiska MB, Connor HD, Mason RP, Segal BH. NADPH oxidase-derived free radicals are key oxidants in alcohol-induced liver disease. J Clin Invest. 2000;106:867-872.  [PubMed]  [DOI]
23.  Kono H, Wheeler MD, Rusyn I, Lin M, Seabra V, Rivera CA, Bradford BU, Forman DT, Thurman RG. Gender differences in early alcohol-induced liver injury: role of CD14, NF-kappaB, and TNF-alpha. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2000;278:G652-G661.  [PubMed]  [DOI]
24.  Kono H, Rusyn I, Bradford BU, Connor HD, Mason RP, Thurman RG. Allopurinol prevents early alcohol-induced liver injury in rats. J Pharmacol Exp Ther. 2000;293:296-303.  [PubMed]  [DOI]
25.  Okada K, Marubayashi S, Fukuma K, Yamada K, Dohi K. Effect of the 21-aminosteroid on nuclear factor-kappa B activation of Kupffer cells in endotoxin shock. Surgery. 2000;127:79-86.  [PubMed]  [DOI]
26.  Itabashi K, Ito Y, Takahashi T, Ishii K, Sato K, Kakita A. Protective effects of urinary trypsin inhibitor (UTI) on hepatic microvasculature in hypotensive brain-dead rats. Eur Surg Res. 2002;34:330-338.  [PubMed]  [DOI]
27.  Aosasa S, Ono S, Mochizuki H, Tsujimoto H, Ueno C, Matsumoto A. Mechanism of the inhibitory effect of protease inhibitor on tumor necrosis factor alpha production of monocytes. Shock. 2001;15:101-105.  [PubMed]  [DOI]