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世界华人消化杂志. 2003-07-15; 11(7): 1064-1067
在线出版日期: 2003-07-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i7.1064
TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究进展
刘占奎, 张超
刘占奎, 张超, 中国人民解放军第三军医大学西南医院普外科重庆市 400038
基金项目: 全军医学科学研究十五重点课题, No. 01Z069
通讯作者: 张超, 400038, 重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号, 中国人民解放军第三军医大学西南医院普外科.
电话: 023-65399044
收稿日期: 2002-10-17
修回日期: 2002-10-20
接受日期: 2002-11-16
在线出版日期: 2003-07-15

胃癌是我国人群中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤, 近年来大肠癌的发病率呈明显上升趋势. 胃肠道肿瘤的治疗以手术治疗为主, 同是辅以化疗, 但化疗对肿瘤非特异性, 敏感性低, 全身副作用大, 效果欠佳, 5 a生存率在50％左右. 肿瘤的基因治疗是近年来研究的热点, 尤其是TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究取得了令人瞩目的成就, 本文收集国内外近期文献, 就TK基因的作用机制、载体、靶向性表达、旁观者效应以及其在胃肠道肿瘤的应用进行了综述.

关键词: N/A
引文著录: 刘占奎, 张超. TK基因治疗胃肠道肿瘤的研究进展. 世界华人消化杂志 2003; 11(7): 1064-1067
N/A
N/A
Correspondence to: N/A
Received: October 17, 2002
Revised: October 20, 2002
Accepted: November 16, 2002
Published online: July 15, 2003

N/A

Key Words: N/A
0 引言

"自杀基因治疗"作为一种新兴的基因治疗方法, 是众多基因治疗策略中效果最明显、最有前途的策略之一[1-17]. 该疗法是利用基因工程技术, 将一些病毒或细菌基因组中前药转换酶基因(也叫自杀基因)导入肿瘤细胞, 该基因编码特殊的酶, 可将原先对哺乳动物细胞无毒性的前药, 在肿瘤细胞中代谢为毒性产物, 从而引起这些细胞的死亡, 所以又称为"病毒导向的酶解前药疗法"或"分子化疗". 目前应用的自杀基因前药系统主要有以下几种[18]: (1)丙氧鸟苷/胸腺嘧啶激酶系统(GCV/HSV-TK); (2)5-氟胞嘧啶/胞嘧啶脱氨酶系统(5-FC/CD); (3) 6-巯基嘌呤/黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸磷酸核糖转移酶系统(6TX/GPT); (4)丙氧鸟苷/潮霉素磷酸转移酶-胸腺嘧啶激酶融合蛋白系统(GCV/hytk); (5)6-甲基嘌呤-2-脱氧核糖核苷酸/嘌呤核苷酸磷酸酶系统(Mep-DR/PNF); (6)环磷酰胺/细胞毒素P4502B1系统(CPA/cyt P4502B1). 其中研究最深入、应用最广泛的是GCV/HSV-TK和5-FC/CD[19].

1 作用机制

TK基因编码胸苷激酶, 该酶可将核苷类似物(NA)代谢为二磷酸化物, 后者在细胞内酶的作用下生成有毒的三磷酸化物而发挥抗肿瘤作用. TK酶能选择性地使抗病毒药物GCV磷酸化成为单磷酸化产物, 并在细胞内磷酸激酶的作用下, 形成三磷酸产物, 干扰、阻断DNA的正常合成和细胞增生[20-24]. 病毒、细菌、哺乳动物细胞中均含有TK基因, 但不同来源的TK基因结构及蛋白产物的理化性质、生物功能有明显的差异. 在肿瘤的治疗中以HSV-TK和VZV-TK最为常用. 早在1979年人类就已经克隆出HSV-TK基因序列, HSV-TK编码区共1128个核苷酸, 编码376个密码子, 基因中无内含子, 其转录起始部有107个核苷酸的非翻译区. 用于HSV-TK基因治疗的前药有两类, 一是嘌呤核苷类似物, 包括ACV及其衍生物GCV、PCV、BCV. 其中GCV对转基因瘤细胞的抑制作用比ACV强100倍, 故成为目前肿瘤TK基因治疗中最常用的前药[25]. 另一类是嘧啶核苷类似物, 包括BVDU、BVFL、ZVDL等. 研究表明: BVDU对哺乳动物细胞无毒性, 而其代谢产物可引起DNA合成受阻, 导致细胞死亡.

2 TK基因治疗的载体

基因治疗的关键之一是如何将外源基因导入相应靶细胞并获得安全、有效的表达. 常用的基因转移方法可分为两类, 一类是非病毒载体介导的基因转移技术, 包括电穿孔技术、离子轰击基因转移技术(基因枪)、显微注射技术、DNA直接注射术、脂质体介导的基因转移和受体介导的基因转移等.在自杀基因治疗中, 利用脂质体包裹的目的基因转导有较多的报道. 由于脂质体对人体无毒, 无致瘤性, 易于大量制备, 有望成为一种较为理想的载体. 另一类为病毒介导的基因转移技术, 相对于非病毒而言, 其转染率高, 易于改造和操作, 且病毒基因组以转座子的方式整合, 其基因组不发生重排, 外源基因不会受影响. 在自杀基因治疗中, 经常使用的有逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等.

2.1 逆转录病毒(Retrovirus)

逆转录病毒(Retrovirus)是人类基因治疗研究中使用最多的病毒, 该病毒为单链RNA病毒, 其特征是只转染处于分裂期的细胞, 且其基因能稳定地整合入宿主细胞染色体内, 逆转录病毒转染宿主细胞时, 依赖被膜蛋白与细胞表面受体结合后穿透进入细胞质内, 在胞质中, 逆转录酶被激活, 以病毒RNA为模板逆转录为互补的DNA, 再由依赖DNA的DNA聚合酶作用形成双链前病毒DNA, 后者转运进入细胞核, 最终整合人宿主细胞染色体基因组内. 有人将TK基因逆转录病毒载体的包装细胞直接注射到小鼠结肠癌肝转移灶, 辅以GCV治疗后, 瘤体明显缩小, 残余癌组织呈现大量纤维化. 逆转录病毒较突出的优势是他可以有效地整合入靶细胞基因组, 并稳定持久地表达所带的外源基因. 病毒基因组以转座子的方式整合, 其基因组不发生重排, 外源基因不会受影响. 近几年来, 人们在增强逆转录病毒的靶向性方面做了许多尝试, 并取得了一定成果. 逆转录病毒的宿主范围由病毒颗粒表面的包被蛋白(Env)决定, Env来自何种病毒, 包装出的逆转录病毒颗粒就叫该病毒的假病毒(pseudotype). 通过改变Env蛋白可以改善载体细胞靶向性. 如用水泡性口炎病毒的Ｇ蛋白包装逆转录病毒基因组产生假病毒, 可以拓展逆转录病毒的靶细胞范围并赋予病毒颗粒新的特性[9].

2.2 腺病毒载体(Adenovirus)

腺病毒载体(Adenovirus)也是转基因治疗中较常用的一种有效运载工具. 他的宿主范围广, 分裂和非分裂细胞均能感染. 与逆转录病毒家族载体不同, 腺病毒基因组不能整合到宿主细胞基因组中, 而是以附加体的形式存在, 不随宿主细胞分裂而复制, 是典型的一过性表达(transinent expression)载体, 治疗中有时需要反复转导. 这一特性对于免疫基因治疗来说是非常有利的, 用腺病毒载体将不会导致象能整合的载体那样, 使用后出现对免疫系统持久的刺激[26]. 目前人们已构建出了删除病毒基因中, 所有开放阅读框架的新型重组腺病毒第三代腺病毒载体, 他仅含有必要的顺式元件(也就是IT7R和邻近的包装信号序列). 需要在辅助病毒存在情况下, 在包装细胞中繁殖, 其安全性很高. 另外, 这种新一代腺病毒载体不但可容纳较大的外源基因(32 kb), 而且较容易获得高滴度(109 cfu/mL). 现已成功地利用这种新型重组病毒, 将治疗基因转至血友病动物的体细胞中, 活性表达已持续数月[27,28].

2.3 腺相关病毒(adeno associated virus, AAV)

腺相关病毒(adeno associated virus, AAV)在应用上较逆转录病毒和腺病毒要晚. 他属于细小病毒科, 是动物病毒中最小的一种, 基因组长4675 kb, 两侧是145 kb长的倒转末端重复序列(ITR), 其中外侧的125个核苷酸呈发夹结构, 在复制时有弱启动子作用.

3 靶向性表达

肿瘤自杀基因治疗研究的最终目的是用于临床, 其关键的一步是要求自杀基因准确、特异地表达于肿瘤局部, 避免进人正常组织细胞中而引起不良反应. 目前所用的靶向方法主要有靶向性转导和靶向性转录两种方式. (1)靶向性转导: 普通道病毒载体和脂质体等导入外源基因的方法都缺乏组织细胞特异性, 如果使这些载体表面带上肿瘤细胞特异性的识别分子, 通过这些分子引导载体到达特定肿瘤细胞, 从而将所携带动外源基因带入细胞内, 这方面的工作正在开展, 有可能为肿瘤的基因治疗提供有效的基因靶向性载体. (2)靶向性转录: 通过肿瘤组织特异性的调控元件与自杀基因相连接, 实现自杀基因靶向性表达, 辅以前药治疗后, 使肿瘤环境中浓集毒性产物, 从而增强抗瘤效果. Tanaka et al[29]将HSV-TK基因置于CEA启动子的下游, 用重组腺病毒载体转染结肠癌细胞株MKN15及胃癌细胞株MKN28, 结果表明TK基因仅在CEA阳性细胞中表达, 增加癌细胞对GCV的敏感性, IC30从300 mmol/L(对亲本细胞)下降到2.1-5.8 mmol/L(对转基因细胞).

4 旁观者效应

早在1986年Moolten et al[30]就观察到这一效应, 他将转导TK基因的纤维肉瘤细胞和非转导细胞混合培养, 发现GCV能杀灭大部分混合细胞. 随后许多人都在体外培养细胞和活体内肿瘤实验中观察到这一效应, 并命名为旁观者效应(bystander effect). Lechanteur et al [31]用逆转录病毒携带HSV-TK基因治疗bd-ix鼠结肠癌DHD/K12细胞腹膜种植瘤, 体外发现稳定表达TK基因的DHD/K12细胞被低浓度的GCV杀死. 旁观者效应是指在肿瘤自杀基因治疗过程中, 不仅已转染自杀基因的肿瘤细胞被杀死, 并且邻近的未转染自杀基因的肿瘤细胞也被杀死. 正是由于旁观者效应, 弥补了目的基因转染效率不高的缺点, 明显增加了抗肿瘤效果. 目前研究认为, 旁观者效应的机制主要是间隙连接信息交流(GJIC)、凋亡机制和免疫机制[31]. (1)GJIH: 间隙连接是相邻细胞间由连接蛋白(connexin Cx)组成的通道, 每6个哑铃型的连接蛋白亚单位Cx组成一个连接子(connexin), 相邻两个细胞间的连接子相连形成间隙连接通道, 离子、小分子物质可通过该通道, 达到相邻细胞间的信息交流, 协调细胞间的功能[32]. (2)凋亡机制: 转基因细胞死亡后释放凋亡小体, 被周围细胞吞噬而引起凋亡, 通过阻断凋亡小体的转移可抑制旁观者效应. (3)免疫机制: 通过激活免疫机制增强抗肿瘤作用, 表达外源基因的肿瘤细胞增强了自身的免疫原性, 同时体内通过释放细胞因子(IL-6等), 或导入免疫相关因子IL-2、IL-12、IFN、TNF等, 以增强或诱发机体抗肿瘤免疫反应. 研究证实, 经基因治疗的瘤体内可见大量的CD4+、CD 8+淋巴细胞浸润[33].

5 TK基因应用于胃肠道肿瘤治疗

自从1986年Moolten首先应用TK基因进行肿瘤治疗研究以来, 该基因已被广泛用于各系统肿瘤治疗研究. 美国等国家正式批准该基因进入临床治疗肿瘤, 包括肝癌、黑色素瘤、前列腺癌、脑胶质瘤等. 现将TK基因在胃肠道肿瘤方面的研究综述如下.

5.1 胃癌

王毅et al[35]应用PA 317 细胞包装的逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统, 转染MKN28人胃癌细胞株, 并观察GCV对转染TK基因的MKN28胃癌细胞的杀死作用, 结果显示: 逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞有较高的转染率, GCV对转染阳性的胃癌细胞有显著的杀死作用. Yoshida et al [36]用逆转录病毒携带HSV-TK基因经脂质体包裹后转导人胃癌细胞株TMK-1, 给于不同浓度(0.1-100 mg/Ｌ)的GCV治疗, 转基因癌细胞(TMK TK)均有死亡, 并呈现时间剂量依赖关系, 将1×106个TMK TK细胞接种到Bal b/c裸小鼠皮下, 2 wk后腹腔注射GCV(20 mg/kg.d×14ｄ), 结果实验组中13只动物有12只瘤体直径由治疗前平均65 mm减少到<1 mm, 取得了满意的疗效. Tanaka et al[29,37]将癌胚抗原(CEA)启动子与TK基因相接, 构建特异性嵌合基因pCEA/Tk, 用腺病毒载体将其导入CEA分泌型胃癌细胞株MKN28及MKN45和CEA非分泌型细胞MKN1, 发现GCV对前两种细胞的半数抑瘤浓度(IC50)分别为21 mg及58 mg, 并发现有明显的旁观者效应(bystander effect), 而对MKN1的IC50则大于300 mg. 随后将2×106个MKN45细胞接种到裸鼠皮下, 第3天瘤体直径达3-4 mm, 将腺病毒载体直接注入瘤体, 经GCV作用后, 发现TK基因选择性表达于30%左右CEA阳性癌细胞, 瘤体生长明显受限. 郭善禹et al[32]应用逆转录病毒转导自杀基因TK, 应用脂质体方法转导细胞因子基因Mgm-CSF. 结果显示, 20％的转TK基因可以杀伤70-80％以上的肿瘤细胞, 即表现了强大的"旁观者效应".

5.2 大肠癌

于波et al[38]用腺病毒介导HSV-TK基因和人野生型p53基因共转染SW837直肠癌细胞, 该细胞p53基因第248密码子发生了突变, 结果显示, 突变的p53可促进肿瘤细胞的增生, 对抗HSV-TK/GCV的杀伤作用, 转染野生型p53, 一方面发挥正常p53的癌功能, 对抗突变p53, 同时也增强了HSV-TK/GCV的效能, 还表现了强大的"旁观者效应".

6 联合基因治疗

将自杀基因与其他的目的基因联合应用以求增强疗效, 获得最佳抗肿瘤效果, 其中以自杀基因与细胞因子基因、放射线联合应用最为常见. Chen et al [39]用携带TK基因及mIL-2基因的重组腺病毒载体直接注射入小鼠结肠癌的肝转移灶, 同时辅助以GCV治疗, 发现联合HSV-TK/ mIL-2基因或HSV-TK/Mgm-CSF与单独使用HSV-TK比较, 残留瘤体明显缩小(P<0.05). 并诱导出对远处接种瘤块显著的系统免疫反应, 抑制野生型细胞继发接种时的成瘤能力, 此免疫力与肿瘤细胞特异性CD8+细胞的存在有关. 并且发现小鼠体内产生的抗肿瘤免疫更持久, 明显延长荷瘤动物的生存期. 顾琴龙et al[40]用TK基因联合mIL-2/mGM-CSF基因治疗小鼠模型胃癌, 得出了同样的结果.

总之, 肿瘤自杀基因治疗作为一种全新的肿瘤治疗手段, 已经进行了大量的细胞学和动物实验研究, 并且取得了可喜的成绩, 但要将自杀基因用于临床治疗, 还有大量的工作要做, 今后的研究应寻找更多、更有效的自杀基因、构建更为有效的靶向性载体、提高基因靶向转染效率、选择简便实用的治疗策略、建立合理搭配的联合基因治疗方案等. 相信随着关键技术和一些问题的逐步解决, 我们将能从各个方面更加精确地调控自杀基因的治疗, 自杀基因可以在治疗胃肠道肿瘤以及其他恶性肿瘤方面作出特殊的贡献.

1.  Wadhwa PD, Zielske SP, Roth JC, Ballas CB, Bowman JE, Gerson SL. Cancer gene therapy: scientific basis. Annu Rev Med. 2002;53:437-452.  [PubMed]  [DOI]
2.  Otsu M, Wada T, Candotti F. Gene therapy for primary immune deficiencies. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2001;1:497-501.  [PubMed]  [DOI]
3.  Cupp CL, Bloom DC. Gene therapy, electroporation, and the future of wound-healing therapies. Facial Plast surg. 2002;18:53-57.  [PubMed]  [DOI]
4.  Yamaoka T, Itakura M. Gene therapy for diabetes mellitus. Curr Mol Med. 2001;1:325-327.  [PubMed]  [DOI]
5.  Seto M, Yamazaki T, Sonoda J, Matsumine A, Shinto Y, Uchida A. Suppression of tumor growth and pulmonary metastasis in murine osteosarcoma using gene therapy. Oncol Rep. 2002;9:337-340.  [PubMed]  [DOI]
6.  Enlgemann C, Heslan JM, Fabre M, Lagarde JP, Klatzmann D, Panis Y. Importance, mechanisms and limitations of the distant bystander effect in cancer gene therapy of experimental liver tumors. Cancer Lett. 2002;179:59-69.  [PubMed]  [DOI]
7.  Okada Y, Okada N, Nakagawa S, Mizuguchi H, Kanehira M, Nishino N, Takahashi K, Mizuno N, Hayakawa T, Mayumi T. Fiber-mutant technique can augment gene transduction efficacy and anti-tumor effects against established murine melanoma by cytokine-gene therapy using adenovirus vectors. Cancer Lett. 2002;177:57-63.  [PubMed]  [DOI]
8.  Ruiz J, Mazzolini G, Sangro B, Qian C, Prieto J. Gene therapy of hepatocellular carcinoma. Dig Dis. 2001;19:324-332.  [PubMed]  [DOI]
9.  Li S, Xia X, Zhang X, Suen J. Regression of tumors by IFN-alpha electroporation gene therapy and analysis of the responsible genes by cDNA array. Gene Ther. 2002;9:390-397.  [PubMed]  [DOI]
10.  Manninen HI, Makinen K. Gene therapy techniques for peripheral arterial disease. Cardiovasc. Intervent Radiol. 2002;25:98-108.  [PubMed]  [DOI]
11.  Adachi O, Nakano A, Sato O, Kawamoto S, Tahara H, Toyoda N, Yamato E, Matsumori A, Tabayashi K, Miyazaki J. Gene transfer of Fc-fusion cytokine by in vivo electroporation: application to gene therapy for viral myocarditis. Gene Ther. 2002;9:577-582.  [PubMed]  [DOI]
12.  Johnson-Saliba M, Jans DA. Gene therapy: optimising DNA delivery to the nucleus. Curr Drug Targets. 2001;2:371-399.  [PubMed]  [DOI]
13.  Baum BJ, Kok M, Tran SD, Yamano S. The impact of gene therapy on dentistry: a revisiting after six years. J Am Dent Assoc. 2002;133:35-44.  [PubMed]  [DOI]
14.  Havlik R, Jiao LR, Nicholls J, Jensen SL, Habib NA. Gene therapy for liver metastases. Semin Oncol. 2002;29:202-208.  [PubMed]  [DOI]
15.  Li YM, Okegawa T, Lombardi DP, Frenkel EP, Hsieh JT. Enhanced transgene expression in androgen independent prostate cancer gene therapy by taxane chemotherapeutic agents. J Urol. 2002;167:339-346.  [PubMed]  [DOI]
16.  Rieger PT. The role of oncology nurses in gene therapy. Lancet Oncol. 2001;2:233-238.  [PubMed]  [DOI]
17.  Ohana P, Bibi O, Matouk I, Levy C, Birman T, Ariel I, Schneider T, Ayesh S, Giladi H, Laster M. Use of H19 regulatory sequences for targeted gene therapy in cancer. Int J Cancer. 2002;98:645-650.  [PubMed]  [DOI]
18.  范 应方, 黄 宗海. 结直肠癌基因治疗研究进展. 世界华人杂志. 2001;9:427-430.  [PubMed]  [DOI]
19.  徐 克成, 吴 建文. 消化系统癌肿的自杀基因疗法. 世界华人消化杂志. 1997;7:679-684.  [PubMed]  [DOI]
20.  Princen F, Lechanteur C, Lopez M, Gielen J, Bours V, Merville MP. Similar efficiency of DNA-liposome complexes and retrovirus-producing cells for HSV-tk suicide gene therapy of peritoneal carcinomatosis. J Drug Target. 2000;8:79-89.  [PubMed]  [DOI]
21.  Floeth FW, Shand N, Bojar H, Prisack HB, Felsberg J, Neuen-Jacob E, Aulich A, Burger KJ, Bock WJ, Weber F. Local inflammation and devascularization--in vivo mechanisms of the "bystander effect" in VPC-mediated HSV-Tk/GCV gene therapy for human malignant glioma. Cancer Gene Ther. 2001;8:843-851.  [PubMed]  [DOI]
22.  Freeman SM, Abboud CN, Whartenby KA, Packman CH, Koeplin DS, Moolten FL, Abraham GN. The "bystander effect: " tumour regression when a fraction of the tumor mass is genetically modified. Cancer Research. 1993;53:5274-5283.  [PubMed]  [DOI]
23.  Huber BE, Austin EA, Good SS, Knick VC, Tibbels S, Richards CA. In vivo antitumor activity of 5-fluorocytosine on human colorectal carcinoma cells genetically modified to express cytosine deaminase. Cancer Research. 1993;53:4619-4626.  [PubMed]  [DOI]
24.  Crystal R, Hirschowitz E, Lieberman M, Daly J, Kazam E, Henschke C, Yankelevitz D, Kemeny N, Silverstein R, Ohwada A. Phase I study of direct administration of a replication deficient adenovirus vector containing the E. coli cytosine deaminase gene to metastatic colon carcinoma of the liver in association with the oral administration of the pro-drug 5-fluorocytosine. Human Gene Therapy. 1997;8:985-1001.  [PubMed]  [DOI]
25.  Carrio M, Mazo A, Lopez-Iglesias C, Estivill X, Fillat C, Retrovirus-mediated transfer of the herpes simplex virus thmidine kinase and connexin 26 genes in pancreatic cells results in variable efficiency on the bystander killing: implications for gene therapy.  Int J Cancer. 2001;94:81-88.  [PubMed]  [DOI]
26.  Addison C, Brociak T, Ralston R, Muller WJ, Gauldie J, Graham FL. Intratrumoural injection of an adenovirus expressing interleukin 2 induces regression and immunity in murine breast cancer model. Proc Natl Acad Sci USA. 1995;92:8522-8526.  [PubMed]  [DOI]
27.  Gallo-Penn AM, Shirley PS, Andrews JL, Kayda DB, Pinkstaff AM, Kaloss M, Tinlin S, Cameron C, Notley C, Hough C. In vivo evaluation of an adenoviral vector encoding canine factor VIII: high-level, sustained expression in hemophiliac mice. Hum Gene Ther. 1999;10:1791-1802.  [PubMed]  [DOI]
28.  Sandig V, Youil R, Bett AJ, Franlin LL, Oshima M, Maione D, Wang F, Metzker M, Savino R, Caskey CT. Optimization of the helper-denpedent adenovirus system for production and potency in virvo. Proc Natl Acad Sci. 2000;97:1002-1007.  [PubMed]  [DOI]
29.  Tanaka T, Kanai F, Lan KH, Ohashi M, Shiratori Y, Yoshida Y, Hamada H, Omata M. Adenovirus-mediated gene therapy of gastric carcinoma using cancer-specific gene expression in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 1997;231:775-779.  [PubMed]  [DOI]
30.  Moolten FL. Tumor chemosensitivity conferred by inserted herpes thymidine kinase genes: paradigm for a prospective cancer control strategy. Cancer RES. 1986;46:5276-5281.  [PubMed]  [DOI]
31.  Lechanteur C, Princen F, Lo Bue S, Dertoz B, Fillet G, Gielen J, Bours V, Merville MP. HSV-1 thymidine kinase gene therapy for colorectal adenocarcinoma-derivec peritoneal carcinomatosis. Gene Ther. 1997;4:1189-1194.  [PubMed]  [DOI]
32.  郭 善禹, 顾 琴龙, 朱 正纲, 尹 浩然, 林 言箴. TK基因/9-丙氧鸟苷联合mGm-CSF基因治疗胃癌. 中华实验外科杂志. 2000;17:297-299.  [PubMed]  [DOI]
33.  Tanaka T, Yamasaki H, Mesnil M. Stimulation of intercellular communication of poor-communicating cells by gap-junction-competent cells enhances the HSV-TK/GCV bystander effect invitro. Int J Cancer. 2001;91:538-542.  [PubMed]  [DOI]
34.  Agard C, Ligeza C, Dupas B, Izembart A, El Kouri C, Moullier P, Ferry N. Immune-dependent distant bystander effect after adenovirus-mediated suicide gene transfer in a rat model of liver colorectal matastasis. Cancer Gene Ther. 2001;8:128-136.  [PubMed]  [DOI]
35.  王 毅, 胡 志前, 徐 学俊, 王 元和, 王 强, 孔 宪涛. 逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用. 第二军医大学学报. 2001;22:328-330.  [PubMed]  [DOI]
36.  Yoshida K, Kawami H, Yamagnchi Y, Kuniyasu H, Nishiyama M, Hirai T, Yanagihara K, Tahara E, Toge T. Retrovirally transmitted gene therapy for gastric carcinoma using herpes simplex virus thymidine kinase gene. Cancer. 1995;75:1167-1471.  [PubMed]  [DOI]
37.  Tanaka T, Kanai F, Okabe S, Yoshida Y, Wakimoro H, Hamada H, Shiratori Y, LanK I, Shitobi M, Omata M. Adenovirus mediated prodrug gene therpy for carcinoe mbryonic antigen producing human gastric carcinama cells in vitro. Cancer Res. 1996;56:1341-1345.  [PubMed]  [DOI]
38.  于 波, 李 世拥, 安 萍, 陈 钢, 蔡 惠云, 郭 文华. 腺病毒介导HSV-tk联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2001;8:69.  [PubMed]  [DOI]
39.  Chen SH, Kosai K, Xu B, Pham-Nguyen K, Contant C, Finegold MJ, Woo LC. Combinationsuicide and cytokine gene therapy for hepatic metastases of colon carcinoma: sustained antitumor immunity prolongs animal surivial. Cancer Res. 1996;56:3758-3762.  [PubMed]  [DOI]
40.  顾 琴龙, 郭 善禹, 朱 正纲, 尹 浩然, 林 言箴. TK基因联合白介素-2/粒、巨噬细胞集落刺激因子基因治疗胃癌的实验研究. 中华消化杂志. 2001;21:138-141.  [PubMed]  [DOI]