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世界华人消化杂志. 2003-11-15; 11(11): 1822-1824
在线出版日期: 2003-11-15. doi: 10.11569/wcjd.v11.i11.1822
丙型肝炎病毒母婴传播及羊水、乳汁和唾液的作用
王占英, 牛美智, 鲁学恒, 李颖, 乔光彦
王占英, 李颖, 乔光彦, 中国医科大学附属二院感染科 辽宁省沈阳市 110004
牛美智, 沈阳市中国人民解放军第四人民医院内科 辽宁省沈阳市 110031
鲁学恒, 沈阳铁路分局沈北医院内科 辽宁省沈阳市 110013
基金项目: 沈阳市科委资助课题, No. 9540.
通讯作者: 王占英, 110004, 辽宁省沈阳市和平区三好街36号, 中国医科大学附属二院感染科. zhanyingwang@hotmail.com
电话: 024-83956961
收稿日期: 2003-03-07
修回日期: 2003-03-20
接受日期: 2003-03-25
在线出版日期: 2003-11-15

目的

研究丙型肝炎病毒(HCV)母婴传播及羊水、乳汁和唾液在母婴传播中的作用.

方法

用酶免疫测定(EIA)检测IgG抗-HCV; 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV-RNA; Taq DNA聚合酶循环测序法对PCR产物测序.

结果

抗-HCV和HCV-RNA均阳性孕妇的24例婴儿中有4例血清检出HCV-RNA, 阳性率为16.7%; 一对HCV-RNA均阳性母、婴的HCV-cDNA序列同源性为100%; 母亲羊水、乳汁和唾液HCV-RNA阳性率分别为25%、16.7%和0%; 3例羊水HCV-RNA阳性母亲的婴儿有2例HCV-RNA阳性(66.7%).

结论

母婴传播是婴幼儿感染HCV的重要途径, 传播率为16.7%. 羊水在HCV母婴传播中起重要作用.

关键词: N/A
引文著录: 王占英, 牛美智, 鲁学恒, 李颖, 乔光彦. 丙型肝炎病毒母婴传播及羊水、乳汁和唾液的作用. 世界华人消化杂志 2003; 11(11): 1822-1824
N/A
N/A
Corresponding author: N/A
Received: March 7, 2003
Revised: March 20, 2003
Accepted: March 25, 2003
Published online: November 15, 2003

N/A

Key Words: N/A
0 引言

丙型肝炎病毒(HCV)主要经输血注射传播[1]. 然而母婴传播也是HCV的重要传播途径, 但国内外报告其传播率差异较大. HCV 可在宫内或分娩时感染婴儿, 但羊水、乳汁和唾液在HCV母婴传播中的作用尚不清楚. 我们于1996-01/2000-01筛查4 233例妊娠晚期孕妇, 对其中24例抗-HCV及HCV-RNA均阳性的孕妇进行母婴传播研究, 并检测母亲羊水、乳汁和唾液的HCV-RNA, 以揭示三种体液在母婴传播中的作用.

1 材料和方法
1.1 材料

1996-01/2000-01在中国医科大学附属第二医院和沈阳市妇婴医院妇产科门诊对4233例妊娠晚期妇女筛查血清抗-HCV, 检测肝功能, 部分血清-30 °C保存备检HCV-RNA, 其中抗-HCV阳性孕妇46例, 32例接受本研究. 其中24例血清HCV-RNA阳性, 16例有手术、输血及输血液制品史; 有4例为慢性丙型肝炎; 其余20例为病毒携带者, 产前检查肝功能均正常. 对32例血清抗-HCV阳性孕妇所生子女定期随访1 a, 在出生后1 wk内、3 mo、6 mo、9 mo和12 mo分别采血检测抗-HCV、HCV-RNA和ALT. 采血后1 h内分离血清, 立即-30 °C保存. 采集15例抗-HCV阳性母亲的羊水各2 mL, 乳汁和唾液各5 mL. 羊水用无菌注射器抽取, 唾液于清晨刷牙潄口前采集. 乳汁1000 r/min离心20 min去脂质层, 羊水和唾液10000r/min离心5 min取上清, -70 °C保存. 乳汁HCV-RNA提取前10 000 r/min离心5 min取上清. 所有容器均经高压灭菌处理. 选择10例抗-HCV及HCV-RNA均阴性孕妇的婴儿作为对照.

1.2 方法

1.2.1 抗-HCV检测 IgG抗-HCV用第三代抗-HCV EIA检测, 试剂盒由上海荣盛生物科技公司提供(批号 991001), 检测及结果判定均严格按试剂说明书进行.

1.2.2 HCV-RNA检测 RNA提取参考文献方法[2]. 逆转录和PCR按文献方法[3]. PCR结束后, 取15 ?L样品加在含0.5 μg/mL EB的20 g/L琼脂糖胶电泳, 紫外检测仪观察结果. 第二次PCR扩增片段为145 bp. 每次实验均设阳性、阴性及空白对照, 且每份样本重复2次, 结果一致者判为阳性. 引物参考文献[4], 利用高度保守的HCV 5'非编码区序列由中国科学院上海细胞生物研究所合成. 外引物正、负链分别为5'-ACT CCA CCA TAG ATC ACT CC-3'和5'-AAC ACT ACT CGG CTA GCA GT-3'; 内引物正、负链分别为5'-TTC ACG CAG AAA GCG TCT AG-3'和5'-GTT GAT CCA AGA AAG GAC CC-3'.

1.2.3 PCR产物测序 PCR产物纯化试剂盒和荧光标记终止物测序试剂盒均由PE公司提供, 用Taq DNA聚合酶循环测序法测序. (1)测序引物为5'-TTC ACG CAG AAA GCG TCT AG-3'. (2) 4种dNTP/ddNTP混合物每种各取2 μL, 分别加入4个微量离心管中, 每管中dNTP浓度均为30 μmol/L, 而每种dNTP相应ddNTP浓度分别为: ddATP 1.2 mmol/L, ddTTP 1.2 mmol/L, ddGTP 0.09 mmol/L, ddCTP 0.6 mmol/L. (3) HCV-cDNA测序模板的纯化按试剂说明书进行, 将HCV-cDNA片段与PCR反应剩余的dNTP及引物分离后, 加入测序引物、测序缓冲液和Taq DNA聚合酶(用量按试剂盒说明书). (4)上述步骤 (3)的混合物各取4 μL, 加入步骤(2)的4管dNTP/ddNTP中进行循环测序. (5)取3 μL测序反应物加入测序凝胶(60 g/L丙烯酰胺)上样孔内电泳, 通过自动测序仪读出核苷酸序列.

2 结果
2.1 婴儿抗-HCV和ALT检测结果

抗-HCV阳性母亲的32例婴儿出生时血清抗-HCV阳性率100%, 3 mo为78.1%, 6 mo为18.8%, 只有2例持续性HCV血症的婴儿生后9 mo和12 mo时抗-HCV仍然阳性. 所有婴儿血清ALT全部正常.对照组母亲的10例婴儿, 抗-HCV均阴性.

2.2 婴儿HCV-RNA检测结果

HCV-RNA阳性孕妇的24例婴儿中有4例血清检出HCV-RNA, 阳性率为16.7%. 2例出生时, 6 mo和12 mo时HCV-RNA均阳性, 另2例仅在出生时检出HCV-RNA, 生后6 mo和12 mo时复查均阴性. HCV-RNA阴性母亲的8例婴儿HCV-RNA均阴性. 对照组10例婴儿未检出HCV-RNA.

2.3 HCV-cDNA序列测定

选择1例婴儿血清HCV-RNA持续阳性者, 对母、婴HCV-cDNA进行序列测定, 母、婴间HCV-cDNA序列(46-190 nt)完全相同, 同源性为100%.

2.4 孕妇体液抗-HCV及HCV-RNA的检测

15例抗-HCV阳性母亲羊水、乳汁和唾液抗-HCV和HCV-RNA检测结果见表1. 3例羊水HCV-RNA阳性母亲的婴儿有2例血清HCV-RNA阳性(66.7%), 而羊水HCV-RNA阴性母亲的婴儿HCV-RNA均阴性, 二者间有非常显著的统计学差异(x2 = 7.2, P<0.01).

表1 孕妇体液抗-HCV和HCV-RNA检测.
体液抗-HCV
HCV-RNA
n阳性数(%)n阳性数(%)
羊水1515 (100)a123 (25.0)
乳汁158 (53.5)a122 (16.7)
唾液1515 (100)a120 (0)
乳汁抗-HCV阳性率显著低于羊水和唾液(x2 = 6.71,
aP<0.01).
3 讨论
3.1 HCV母婴传播率

近年来国内外学者报告未合并HIV感染孕妇的婴儿HCV感染率为2.7-15.0%[5-9]. 本文结果表明24例HCV-RNA阳性的母亲所生婴儿中有4例出生后血清HCV-RNA阳性, 2例HCV-RNA持续存在. 其中1例母婴间HCV-cDNA相应片段序列同源性为100%, 提示该婴儿HCV感染由其母亲传播. 本文HCV母婴传播率为16.7% (4/24). 本文结果进一步证实母婴传播是HCV的重要传播途径之一.

3.2 HCV母婴传播的标志

抗-HCV作为人体感染HCV的间接证据, 一直作为HCV血清流行病学调查的主要指标. 但近年来研究[3]证实孕妇的IgG抗-HCV可以通过胎盘到达婴儿体内, 婴儿出生后血中IgG抗-HCV短期存在(大多数在6 mo内消失)不能认为婴儿已感染HCV. 本文结果支持这一观点, 抗-HCV阳性母亲的32 例婴儿出生时IgG抗-HCV全部阳性, 6 mo时80%以上的婴儿抗-HCV已消失. 但2例持续HCV血症者抗-HCV持续存在超过12 mo, 故抗-HCV持续较长时间或主动产生可能提示婴儿已感染HCV[9,10]. HCV-RNA是病毒存在和复制的直接指标, 是确诊HCV感染的直接证据, 故可作为判定母婴传播的标志.

3.3 HCV母婴传播感染方式

本文4 例HCV感染婴儿均在出生后1 wk内血清HCV-RNA即阳性, 其中2例在随访期间(6 mo时)血清HCV-RNA阴转, 另2例血清HCV-RNA持续存在, 并排除了与HCV感染有关的其他暴露因素, 表明其传播方式可能为宫内或分娩时感染, 与Steininger et al [11]的研究结果一致. HCV感染孕妇引产胎肝HCV-RNA阳性证明宫内传播的存在[3,12]. 本文3例羊水HCV-RNA阳性母亲的婴儿有2例感染HCV, 提示HCV污染的羊水在母婴传播中起重要作用. 本文12例血清HCV-RNA阳性孕妇有2例乳汁中检出HCV-RNA(16.7%), 血清HCV-RNA 阳性母亲的婴儿中有18例母乳喂养, 除2例出生时即HCV-RNA阳性外, 其余16例HCV-RNA均阴性, 故不提示母乳引起HCV传播, 与Tajiri et al [13]研究结果一致. 但Ruiz-Extremera et al [14] 认为HCV-RNA阳性乳汁有传染性, 应避免母乳喂养. 本文12例血清HCV-RNA阳性孕妇唾液均未检出HCV-RNA, 与葛向华et al [15]研究结果一致, 故认为唾液传播HCV的可能性较小.

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