长链非编码RNA LINC00996通过抑制CDKN2A促进胃癌进展

图1 LINC00996在胃癌细胞系和组织中表达上调. A: GEPIA数据库分析显示胃癌组织中LINC00996表达高于正常胃黏膜组织, P<0.01; B: Kaplan Meier Plotter数据库显示LINC00996高表达组的胃癌患者总生存期较低表达组明显缩短, P = 0.016; C: RT-qPCR分析胃癌组织和癌旁组织中LINC00996表达, n = 50, ^aP<0.01 vs 癌旁组织; D: RT-qPCR分析胃正常细胞系GES和胃癌细胞BGC-823、NCI-N87和SGC7901中LINC00996表达, n = 3, (^bP, ^cP, ^dP)<0.01 vs GES细胞.

图2 敲降LINC00996抑制胃癌细胞增殖. A-C: EDU染色(A和B)和CCK-8法(C)评估敲降LINC00996对SGC7901细胞增殖的影响, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-NC组; D-F: EDU染色(D和E)和CCK-8法(F)评估敲降LINC00996对NCI-N87细胞增殖的影响, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-NC组; G-J: 流式细胞术分析敲降LINC00996对SGC7901(G和I)和NCI-N87(H和J)细胞周期的影响, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-NC组.

图3 敲降LINC00996抑制胃癌细胞迁移与侵袭. A-D: 划痕法检测敲降LINC00996对SGC7901(A和B)和NCI-N87(C和D)细胞迁移的影响, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-NC组; E-H: Transwell法检测敲降LINC00996对SGC7901(E和F)和NCI-N87(G和H)细胞侵袭的影响, n = 3, ^cP<0.01, ^dP<0.01 vs si-NC组.

图4 敲降LINC00996诱导胃癌细胞凋亡. A-B: 流式细胞术法检测敲降LINC00996对SGC7901细胞凋亡的影响, n = 3, ^aP<0.01 vs si-NC组; C-D: 流式细胞术法检测敲降LINC00996对NCI-N87细胞凋亡的影响, n = 3, ^bP<0.01 vs si-NC组.

图5 敲降LINC00996对胃癌细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达的影响. A-B: Western blot法检测敲降LINC00996对SGC7901细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达的影响, n = 3, (^aP, ^bP, ^cP, ^dP, ^eP)<0.01 vs si-NC组; C-D: Western blot法检测敲降LINC00996对NCI-N87细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达的影响, n = 3, (^aP, ^bP, ^cP, ^dP, ^eP)<0.01 vs si-NC组. CDKN2A:细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A; cyclin D1: 周期蛋白D1; Bax: Bcl-2相关X蛋白; Bcl-2: B淋巴细胞瘤-2; Cleaved caspase-3: 劈开的半胱胺酸蛋白酶-3.

图6 敲降CDKN2A逆转敲降LINC00996对胃癌细胞增殖的抑制作用. A-C: EDU染色(A和B)和CCK-8法(C)评估两组SGC7901细胞增殖, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组; D-F: EDU染色(D和E)和CCK-8法(F)评估两组NCI-N87细胞增殖, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组; G-J: 流式细胞术分析两组SGC7901(G和I)和NCI-N87(H和J)细胞周期, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组.

图7 敲降CDKN2A逆转敲降LINC00996对胃癌细胞迁移与侵袭的抑制作用. A-D: 划痕法检测两组SGC7901(A和B)和NCI-N87(C和D)细胞迁移, n = 3, ^aP<0.01, ^bP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组; E-H: Transwell法检测两组SGC7901(E和F)和NCI-N87(G和H)细胞侵袭, n = 3, ^cP<0.01, ^dP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组.

图8 敲降CDKN2A逆转敲降LINC00996诱导的胃癌细胞凋亡. A-B: 流式细胞术法检测两组SGC7901细胞凋亡, n = 3, ^aP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组; C-D: 流式细胞术法检测敲降两组NCI-N87细胞凋亡, n = 3, ^bP<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组.

图9 si-LINC00996+si-NC组与si-LINC00996+si-CDKN2A组胃癌细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达情况. A-B: Western blot法检测两组SGC7901细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达, n = 3, (^aP, ^bP, ^cP, ^dP, ^eP)<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组; C-D: Western blot法检测两组NCI-N87细胞中CDKN2A、cyclin D1、Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3表达, n = 3, (^aP, ^bP, ^cP, ^dP, ^eP)<0.01 vs si-LINC00996+si-NC组. CDKN2A: 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A; cyclin D1: 周期蛋白D1; Bax: Bcl-2相关X蛋白; Bcl-2: B淋巴细胞瘤-2; Cleaved caspase-3: 劈开的半胱胺酸蛋白酶-3.