真核起始因子3e亚基与原发性肝细胞癌的发生与发展正相关

图1 肝癌组织和癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中内源性eIF3e mRNA相对转录率及其表达水平的比较. A: qRT-PCR分析和比较5例病人新鲜肝癌组织(左)及癌旁组织(右)内elF3e mRNA相对转录水平. 将每个病人自身的肝癌组织和癌旁组织分为一组, 每组中癌旁组织内mRNA定量数据设置为1; B: qRT-PCR分析和比较正常肝细胞系HL7702和二种肝癌细胞系HepG2及Huh7内源性elF3e mRNA相对转录水平. 将HL7702的mRNA定量数据设置为1. A和B的结果均以β-actin作为内部参比进行了校正, 结果是三次独立实验的平均值(^aP<0.05, ^bP<0.01); C: Western Blot分析和比较5例HCC组织(T)及癌旁组织(N)内eIF3e蛋白表达水平. N和T后面的数字相同则表示同一位病人, N与T之间的短线表示总是以相同病人的N和T二者的数据进行比较. N和T下面所列数字为对应Western Blot条带强度的量化值, 分别以β-actin作为内部参比进行了校正.

图2 qRT-PCR分析和比较瞬时转染pcDNA3. 1-eIF3e不同时间后HepG2以及稳转细胞eIF3e-HepG2内eIF3e mRNA相对转录水平. 加入等量脂质体转染试剂但未转染任何质粒的HepG2为对照组, 其mRNA定量数据设置为1; 转染空载体pSuper的处理组为零对照组. 以上结果以β-actin作为内部参比进行了校正, 结果是3次独立实验的平均值(^bP<0.01).

图3 qRT-PCR分析和比较瞬时转染pSuper-sheIF3e不同时间后HepG2细胞内eIF3e mRNA相对转录水平. 加入等量脂质体转染试剂但未转染任何质粒的HepG2为空白对照组(Mock), 其mRNA定量数据设置为1; 转染空载体pSuper的处理组为零对照组; Sn为无关干扰的阴性对照组. 以上结果以β-actin作为内部参比进行了校正, 结果是三次独立实验的平均值(^bP<0.01).

图4 Western Blot分析瞬时转染不同质粒72 h后HepG2细胞内eIF3e蛋白的表达水平. 对照组: 加入等量脂质体转染试剂但未转染任何质粒的HepG2为空白对照组; 空载体pcDNA3.1和pSuper: 零对照组; eIF3e: 过表达组; sheIF3e: 干扰组; Sn: 无关干扰组. 所列数字为对应条带强度的量化值, 将空白对照组设置为100, 分别以β-actin作为内部参比进行了校正.

图5 CCK-8法分析eIF3e表达的变化对细胞增殖的影响. A: 过表达质粒eIF3e瞬时转染HepG2细胞后, eIF3e表达的变化对细胞增殖的影响; B: 干扰质粒sheIF3e瞬时转染HepG2细胞后, eIF3e表达的变化对细胞增殖的影响. 空载体pcDNA3.1(A)或pSuper(B): 对照组; Sn: 无关干扰组. 图中显示瞬时转染质粒24 h、48 h、72 h后的各组细胞OD_{450 nm}吸收值的变化趋势, 每个处理组设置3个重复样品, 结果是三次独立实验的平均值(^bP<0.01).

图6 划痕法分析过表达质粒eIF3e瞬时转染HepG2不同时间后, eIF3e表达上调对细胞迁移的影响. A: pcDNA3.1空载体转染的对照组(左)与eIF3e过表达转染组(右)的细胞原始迁移图; B: 是将A的原始迁移数据转换为细胞迁移率后的比较图. 每个处理组设置3个重复样品, 结果是三次独立实验的平均值(^aP<0.05, ^bP<0.01).

图7 划痕法分析干扰质粒sheIF3e转染HepG2不同时间后, eIF3e表达下调对细胞迁移的影响. A: pSuper空载体组(左)、eIF3e干扰组(中)及无关干扰组(右)的细胞原始迁移图; B: 将A的原始迁移数据转换为细胞迁移率后的比较图. 每个处理组设置3个重复样品, 结果是三次独立实验的平均值(^aP<0.05).

图8 Annexin V-FITC/PI法评价eIF3e表达水平的变化对HepG2细胞凋亡的影响. A: eIF3e过表达组中eIF3e表达水平的变化对HepG2细胞凋亡的影响; B: eIF3e干扰组中eIF3e表达水平的变化对HepG2细胞凋亡的影响. 横坐标代表FITC染色细胞数, 纵坐标代表PI染色细胞数. 每个处理组设置3个重复样品, 以上结果是三次独立实验的代表性数据.

图9 裸鼠皮下成瘤实验结果. A: 5周龄、 体重18-20 g的雄性BALB/c裸小鼠分为二组, 分别皮下接种HepG2及eIF3e-HepG2二组细胞, 每只小鼠接种1×10⁶-5×10⁶细胞, 从第6天起, 每隔6 d从每组中随机颈椎离断处死3只小鼠摘瘤, 24 d后汇集4次摘除的肿瘤, 按组别分类, 取代表性样本按时间顺序由左至右摆放, 下置游标卡尺直观地显示肿瘤体积大小; B, C: 接种细胞第6、12、18、24天后测量肿瘤的重量和体积, 绘制肿瘤生长趋势图. 每次结果是同组3个肿瘤数据的平均值(^bP<0.01).