临床经验 Open Access
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世界华人消化杂志. 2009-11-28; 17(33): 3456-3459
在线出版日期: 2009-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i33.3456
Fractalkine在正常人和肝纤维化与肝硬化患者肝脏组织内的表达
廖欣鑫, 廖彩仙, 黄勇平, 秦安成, 袁杰, 赖勇强, 龚祖元
廖欣鑫, 廖彩仙, 黄勇平, 秦安成, 袁杰, 赖勇强, 龚祖元, 南方医科大学南方医院肝胆外科 广东省广州市 510515
基金项目: 广州市科技攻关计划基金资助项目, No. 2007Z3-E0371.
作者贡献分布: 此课题由廖彩仙、廖欣鑫、黄勇平及赖勇强设计; 研究过程由廖欣鑫、黄勇平、秦安成、袁杰及龚祖元完成; 数据分析由廖欣鑫与黄勇平完成; 本论文写作由廖欣鑫与廖彩仙完成.
通讯作者: 廖彩仙, 教授, 主任医师, 510515, 广东省广州市广州大道北1838号, 南方医科大学南方医院肝胆外科. liaocx@fimmu.com
电话: 020-61641705
收稿日期: 2009-08-21
修回日期: 2009-10-23
接受日期: 2009-10-26
在线出版日期: 2009-11-28

目的: 观察正常人和肝纤维化与肝硬化患者肝组织中趋化因子Fractalkine的表达.

方法: 采用ELISA法分别检测9例正常人、10例肝纤维化及11例肝硬化患者肝组织中的Fractalkine含量.

结果: 肝纤维化组和肝硬化组Fractalkine浓度均显著高于正常对照组 (13.72±5.59 ng/g, 14.70±3.52 ng/g vs 4.84±3.72 ng/g, 均P<0.05), 肝纤维化组和肝硬化组的Fractalkine浓度差异无统计学意义.

结论: 肝脏发生纤维化损伤时Fractalkine表达增强, 至肝硬化阶段仍维持较高水平.

关键词: 肝纤维化; 肝硬化; Fractalkine/CX3CL1; 趋化因子
引文著录: 廖欣鑫, 廖彩仙, 黄勇平, 秦安成, 袁杰, 赖勇强, 龚祖元. Fractalkine在正常人和肝纤维化与肝硬化患者肝脏组织内的表达. 世界华人消化杂志 2009; 17(33): 3456-3459
Intrahepatic levels of Fractalkine in healthy individuals and patients with hepatic fibrosis and cirrhosis
Xin-Xin Liao, Cai-Xian Liao, Yong-Ping Huang, An-Cheng Qin, Jie Yuan, Yong-Qiang Lai, Zu-Yuan Gong
Xin-Xin Liao, Cai-Xian Liao, Yong-Ping Huang, An-Cheng Qin, Jie Yuan, Yong-Qiang Lai, Zu-Yuan Gong, Department of Hepatobiliary Surgery, Nanfang Hospital of Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
Supported by: the Key Science and Technology Program of Guangzhou Municipality, No. 2007Z3-E0371.
Correspondence to: Professor Cai-Xian Liao, Department of Hepatobiliary Surgery, Nanfang Hospital of Southern Medical University, 1838 Guangzhou Avenue North, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China. liaocx@fimmu.com
Received: August 21, 2009
Revised: October 23, 2009
Accepted: October 26, 2009
Published online: November 28, 2009

AIM: To investigate the intrahepatic levels of chemokine Fractalkine in healthy individuals and patients with hepatic fibrosis and cirrhosis.

METHODS: Hepatic tissues were obtained in surgery from 9 normal persons, 10 patients with fibrotic liver, 11 patients with cirrhosis. The content of Fractalkine in hepatic tissue was assayed by ELISA.

RESULTS: The intrahepatic levels of Fractalkine in patients with hepatic fibrosis and cirrhosis were remarkably higher than that in healthy individuals (13.72 ± 5.59 ng/g and 14.70 ± 3.52 ng/g vs 4.84 ± 3.72 ng/g, respectively; both P < 0.05). No significant difference was noted in intrahepatic level of Fractalkine between patients with hepatic fibrosis and cirrhosis.

CONCLUSION: Intrahepatic level of Fractalkine increases with the aggravation of hepatic fibrosis and remains high in liver cirrhosis.

Key Words: Hepatic fibrosis; Liver cirrhosis; Fractalkine/CX3CL1; Chemokine
0 引言

Fractalkine是1997年才发现的CX3C亚家族趋化因子唯一的成员[1], 系统命名为CX3CL1, 其受体是CX3CR1. Fractalkine与白细胞的趋化和黏附功能密切相关[2]. 近年发现他对包括骨髓源性肝干细胞(bone marrow derived liver stem cells, BMDLSC)在内的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMMSC)也有趋化作用. 实验研究已证实, 肝病损伤可以引发BMDLSC向肝脏迁移并参与对损伤的修复[3-4], 但驱使BMDLSC向肝脏迁移的物质基础不明, 肝病患者肝脏组织内Fractalkine水平有何变化也不清楚. 为此, 我们对正常人和肝纤维化与肝硬化患者肝内Fractalkine的含量变化进行了观察. 结果发现, 肝脏发生纤维化损害时, 肝组织表达Fractalkine的数量增多. 肝内Fractalkine在肝纤维化阶段就已经升高到显著水平, 至肝硬化阶段仍然维持在高水平状态. 提示在肝脏发生疾病损伤时, 肝脏产生的Fractalkine有可能是驱使BMDLSC向肝脏迁移的一个因素.

1 材料和方法
1.1 材料

人肝脏组织, 样本量为30例, 男18例, 女12例. 年龄19-77(平均50)岁. 标本均来自2008-05/2009-05在南方医科大学南方医院肝胆外科接受手术(包括肝移植)的患者. 手术当天的术前采血查肝功能. 肝组织标本在手术中获取. 肝组织切取后立即分为2份, 一份甲醛固定后行组织病理学检查, 另一部分放入1.5 mL EP管内置于-80 ℃低温冰箱保存待测. 微量手动玻璃匀浆器、精密电子天平(北京赛多利斯仪器公司)、台式高速低温离心机、37 ℃孵箱、酶标仪(SpectraMax Plus384, 美国MD公司)及SoftMax Pro微孔板读数软件, 人Fractalkine试剂盒48T(美国ADL公司).

1.2 方法

1.2.1 肝组织病理学检查: 常规石蜡包埋与切片, HE染色, 光镜观察.

1.2.2 标本分组: (1)正常对照组(n = 9): 无乙型肝炎病史, 乙型肝炎两对半显示乙型肝炎表面抗原阴性, 肝组织病理学检查显示肝组织结构正常. (2)肝纤维化组(n = 10): 有乙型肝炎病史或乙型肝炎病毒感染史, 乙型肝炎两对半显示乙型肝炎表面抗原阳性, 组织病理学检查显示肝内纤维组织广泛增生, 但未见假小叶形成. (3)肝硬化组(n = 11): 有乙型肝炎病史或乙型肝炎病毒感染史, 乙型肝炎两对半显示乙型肝炎表面抗原阳性, 肝组织病理学检查提示肝内纤维组织广泛增生, 并有假小叶形成.

1.2.3 Fractalkine的测定: 肝组织经电子天平称质量后移入微量手动玻璃匀浆器中于冰水中匀浆5 min, 然后按1/8质量体积比加入1×PBS缓冲液将匀浆组织洗下并转移至1.5 mL EP管中, 再稀释1倍后, 低温高速离心机4 ℃下1000 g离心10 min, 提取上清液移至另一1.5 mL EP管中, 低温高速离心机4 ℃下25000 r/min离心20 min, 取上清液测定Fractalkine浓度, 操作程序按照人ELISA试剂盒的操作说明进行.

统计学处理 数据均以mean±SD表示, 应用SPSS13.0统计软件分析, 均数比较采用One-way ANOVA, 两两比较采用LSD检验. 相关分析数据符合双变量正态分布采用Pearson相关系数表示, 不符合双变量正态分布的采用Spearman相关系数表示.

2 结果
2.1 肝脏组织内Fractalkine的浓度和肝功能各项指标

正常对照组、肝纤维化组和肝硬化组组间Fractalkine浓度两两比较: 肝纤维化组的浓度显著高于正常对照组浓度(P<0.05); 肝硬化组的浓度显著高于正常对照组浓度(P<0.05); 肝纤维化组与肝硬化组比较, 2组的浓度差异无统计学意义(P>0.05, 表1).

表1 Fractalkine浓度和肝功能各项指标检测结果 (mean±SD).
分组Fractalkine(ng/g)ALB(g/L)ALT(U/L)AST(U/L)TBIL(μmol/L)PT(s)
正常对照组4.84±3.7238.56±2.9624.00±11.5024.44±10.109.77±3.4911.58±0.70
肝纤维化组13.72±5.5935.27±7.4660.60±18.1750.30±19.9514.36±7.0511.17±0.77
肝硬化组14.70±3.5232.95±5.91146.82±139.19174.18±190.6320.80±24.3213.23±2.00
F值14.7082.29216.8609.2661.2906.859
P值0.0000.1200.0000.0020.2920.004
2.2 肝脏组织内Fractalkine水平与患者肝功能指标的相关分析

Fractalkine与ALB、ALT、AST、TBIL具有相关性, 但相关系数都在0.7以下(表2).

表2 Fractalkine水平与肝功能指标的相关分析.
统计量ALBALTASTTBILPT
r值-0.3910.6080.6950.6450.312
P值0.0330.0000.0000.0000.093
3 讨论

BMDLSC是近年才发现的一群细胞, 他具有肝干细胞的特性与潜能, 在生理状态下定居在骨髓, 在肝脏发生疾病损伤时又可以向肝脏迁移并参与修复损伤[5-6]. 为什么肝脏损伤会导致BMDLSC向肝脏迁移? 驱使BMDLSC向肝脏迁移的物质基础又是什么? 这些都不清楚. 鉴于肝脏本身不是BMDLSC的生理性归巢场所, 正常情况下只有极小部分BMDLSC向肝内归巢. 因此, 对于肝脏受到损伤时出现BMDLSC向肝内归巢增多这个现象, 我们完全有理由推测并相信, 在肝脏受到损伤时产生了可以促使BMDLSC向肝内归巢的因子, 只是具体是什么因子还不清楚. 从现有资料来看, 趋化因子及其受体系统很可能在其中起重要作用, 因为实验研究已证明基质细胞衍生因子1(stromal-derived factor-1, SDF-1)对CXCR4阳性BMDLSC有趋化作用[7]. 临床研究也已观察到肝病患者的肝内SDF-1浓度显著增加[8].

趋化因子Fractalkine是唯一的CX3C类趋化因子, 有膜结合型和分泌型2种形式. 近年来, Fractalkine对BMMSC的趋化性受到广泛关注. Ji et al[9]的研究认为SDF-1/CXCR4和Fractalkine/CX3CR1的相互作用可介导BMMSC的迁移. Sordi et al[10]的实验研究证实Fractalkine对BMMSC有趋化作用, BMMSC中也存在Fractalkine的受体CX3CR1. 国内也有研究报道, Fractalkine/CX3CR1通路参与BMMSC体外迁移[11]. 最近, Zhu et al[12]的研究也表明Fractalkine/CX3CR1可以促进BMMSC向缺血性脑损伤部位的定向迁移.

Fractalkine对BMMSC包括对BMDLSC有趋化作用, 这在体外实验和动物实验中已得到充分肯定, 但人体发生肝病损伤时引发的BMDLSC向肝脏迁移与肝内Fractalkine的关系还有待确定, 肝病患者的肝内Fractalkine水平有何变化也有待观察. 本研究观察到, 肝内Fractalkine在肝纤维化阶段就已经升高到显著性水平, 至肝硬化阶段仍维持在高水平状态. 表明肝脏发生纤维化损害时, 肝组织表达Fractalkine的数量显著增加, 随着肝纤维化向肝硬化阶段发展, Fractalkine的数量维持在高水平. BMMSC是一种循环的干细胞, 骨髓以一种较低的频率向循环血液中释放较低数量的BMMSC[13-14], 从Fractalkine对BMMSC的趋化作用角度看, Fractalkine在肝病损伤诱发的BMDLSC向肝脏迁移方面很可能发挥作用.

Fractalkine与肝功能指标的相关性分析, 提示Fractalkine的变化与肝脏的疾病损伤有关, 但变化的程度与肝病的损害程度不全一致.

评论
背景资料

自从1999年发现骨髓源性肝干细胞(BMDLSC)以来, 利用BMDLSC修复肝脏的疾病损伤就一直是国内外学者研究的热点, BMDLSC可以恢复因病变而减少的肝细胞数量, 修复因病变而破坏了的肝组织结构. 但BMDLSC向肝内归巢的机制仍然不清楚, 趋化因子及其受体系统应该起着重要作用.

同行评议者

李涛, 副主任医师, 北京大学人民医院肝胆外科

研发前沿

驱使BMDLSC向肝脏迁移的物质基础不明, 趋化因子及其受体系统受到广泛关注. 国内外众多学者通过体外试验、动物模型实验等证明, 部分趋化因子及其受体系统在骨髓间充质干细胞(BMMSC)的迁移过程中起作用. 但在人体内, 这些趋化因子究竟起何作用、如何起作用都不清楚.

应用要点

本研究提示, 肝脏发生纤维化损伤时Fractalkine表达增强, 至肝硬化阶段仍维持较高水平. 从一个新的角度为Fractalkine促进干细胞的肝损伤修复作用提供理论依据.

同行评价

本研究有一定的创新性, 方法简单可行, 结论有一定的参考价值.

编辑: 李军亮 电编: 吴鹏朕

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