原代肝细胞分离培养技术现状及展望

表1 迄今发展的各种肝细胞分离方法的优缺点对比

分离方法	最适对象	优点	缺点	参考文献
机械分离法	小型动物及肝组织块	操作简单; 不需要复杂仪器和昂贵的胶原酶; 分离得到细胞的膜蛋白的成分和性质不易发生改变	所得细胞的收获量和成活率很低	[3], [4]
胰酶消化法		操作简单; 酶价格便宜	胰酶易造成肝细胞死亡, 使细胞活率低	[17], [18]
胶原酶消化法	肝脏体积小的动物	操作简单; 细胞产率高、损伤小, 且细胞维持特异功能时间较长	胶原酶价格昂贵; 获得的肝细胞悬液多细胞团块存在	[7], [18]
离体胶原酶灌流法		该法具有较好的细胞收率	需要较高的操作水平; 需要摸索最适酶浓度和作用时间; 所得细胞活率低	[9], [19]
半原位胶原酶灌流法	适用于大规模的肝细胞分离	不需要特殊设备; 半原位灌注使胶原酶的用量仅为原位灌注的1/4	操作技巧要求高; 易发生污染; 细胞易发生灌注再损伤而具有较低的生存能力	[14], [18]
Seglen两步灌流法	主要适用于中等大小动物	所得肝细胞较纯, 细胞存活率高; 可分离肝实质细胞及肝非实质细胞	操作过程复杂, 影响因素多, 细胞易污染; 需要恒流灌注装置, 胶原酶消耗量大	[18], [20], [21]
下腔静脉插管的逆向胶原酶灌注法		灌注效率高, 细胞收率高; 分离得到的细胞纯度高、生存能力强; 节省胶原酶; 细胞不易发生污染	该方法要求较高的操作技巧	[9], [22]
Gerlach五步胶原酶灌流法	主要用于大规模肝细胞分离	分离效率高, 所得细胞纯度高; 灌注的同时分离肝脏, 可避免污染; 所得细胞具有较强的生存能力和分化特性	操作过程复杂; 该方法的分离效果易受到不同的胶原酶浓度、动物体质量和月龄的影响	[16]